Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2018 год
1-4 номера

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2004, № 4

Подписаться на 2019 год

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 4'2004

ПРОЛИФЕРАЦИЯ КЛЕТОК СТЕНКИ АРТЕРИЙ ЧЕЛОВЕКА ПРИ АТЕРОГЕНЕЗЕ КАК ФАКТОР ПРОЯВЛЕНИЯ ИММУННОГО ВОСПАЛЕНИЯ

А.Н. Восканьянц, В.А. Нагорнев

В статье обсуждается проблема иммунного воспаления в стенке артерий при атерогенезе. Основное внимание уделено пролиферации мононуклеаров (макрофагов и лимфоцитов) и гладкомышечных клеток - клеточным популяциям, экспрессирующим цитокины и факторы роста. (Цитокины и воспаление. 2004. Т. 3, № 4. С. 10-13.)

Ключевые слова: иммунное воспаление, пролиферация, мононуклеары, гладкомышечные клетки.

К концу 70-х годов А.Н. Климовым и В.А. Нагорневым [13] была окончательно обоснована концепция, позволяющая рассматривать атеросклероз с позиции иммунного ответа на модифицированные липопротеиды низкой плотности (мЛПНП). В настоящее время атерогенез оценивается как вариант развития иммунного воспаления в стенке артерий [2, 11, 12]. При этом большое значение придается не только мЛПНП, но и ряду других факторов, например, облигатным паразитам и, в первую очередь, Chlamydia pneumoniae [4, 7].

Оценка атерогенеза с позиций иммунного воспаления позволила рассматривать кинетику клеток стенки артерий с учетом экспрессии цитокинов и межклеточной кооперации: макрофаг - Т-лимфоцит - гладкомышечная клетка (ГМК). Экспрессия негранулярными лейкоцитами (моноцитами/макрофагами, лимфоцитами) провоспалительных цитокинов и факторов роста сопровождается пролиферацией клеток. Однако при атеросклерозе этот процесс остается неизученным. В то же время известно, что мЛПНП стимулируют экспрессию клетками сосудистой стенки IL-1b, TNFa, IFN-gamma, обеспечивающими каскадный цитокиновый ответ [2, 3, 11].

Среди цитокинов, экспрессируемых активированными макрофагами, эндотелиальными клетками и ГМК, при атерогенезе большое внимание уделяется MCP-1 и M-CSF [6]. Моноцитарное/макрофагальное дифференцирование в пенистые клетки осуществляется при участии M-CSF, который также стимулирует пролиферацию макрофагов и играет ключевую роль в последующих стадиях их дифференцирования, поддерживая функциональную способность клеток в атероматозном ядре атеросклеротических бляшек [5].

В отличие от ранее существовавшей точки зрения, было показано, что моноциты/макрофаги, мигрирующие в сосудистую стенку, не только трансформируются в пенистые клетки, но также включаются в реакции иммунного воспаления. Это позволило выделить популяции макрофагов секреторного и цитотоксического фенотипов, не участвующие в скевенджер-захвате мЛПНП, но экспрессирующие провоспалительные цитокины [15].

Возникает вопрос: какова природа макрофагов, продуцирующих цитокины? Высказано предположение, что, по-видимому, источником популяции макрофагов секреторного и цитотоксического фенотипов являются клетки, пролиферирующие в субэндотелиальном слое и находящиеся в контакте с Т-лимфоцитами [2]. С другой стороны, макрофаги - высокодетерминированные клетки, и, чтобы вызвать их пролиферацию, необходимы особые условия. Происходит ли действительно, наряду с ГМК, и пролиферация макрофагов в стенке артерий при атерогенезе - остается неизвестным. Это обусловлено тем, что секционный материал не позволял проследить динамику пролиферации клеток; известно только о пролиферации клеток в интиме аорты кроликов (использовали 3Н-тимидиновую метку с последующей гисторадиоавтографией) при экспериментальной гиперхолестеринемии [1]. При этом было показано, что включение 3Н-тимидина в моноциты возможно уже на стадии фиксации клеток на эндотелиальной поверхности. Поэтому, для более полного изучения особенностей развития очагового иммунного воспаления в стенке артерий при атерогенезе было оправдано проведение специального исследования, направленного на качественный и количественный анализ пролиферирующих клеток в стенке артерий, с использованием современных иммуноцитохимических методов.

Материалы и методы

Работа была выполнена на секционном материале, полученном во время вскрытия лиц, погибших от острой сердечно-сосудистой недостаточности. Для исследования использовали аорту и левую коронарную артерию с различными атеросклеротическими проявлениями, включая липидные пятна, липидные и фиброзные бляшки. Макроскопически неизмененные сегменты аорты были приняты за относительную норму. В работе был использован материал, полученный от 24 случаев (возраст от 49 до 70 лет, средний - 61 год), исследовано 120 сегментов артерий. Материал фиксировали в 4%-м параформальдегиде на фосфатном буфере (рН 7,4). Парафиновые срезы наносили на предметные стекла, покрытые адгезивным раствором (Novocastra Lab. Ltd, England).

Для иммуногистохимического исследования использовали мышиные моноклональные антитела против ядерного антигена пролиферирующих клеток [Anti-Proliferating Cell Nuclear Antigen (PCNA), Clone: PC 10, "DAKO", Denmark], меченные пероксидазой хрена (HRP). Данные антитела реагируют с эпитопами ядерных антигенов в пролиферирующих клетках. Максимальная экспрессия PCNA характерна для клеток, находящихся в S-фазе.

В работе также использовали мышиные антитела к антигену Ki-67 (Ki-67 Antigen, Clone: Ki-67 серия М 7187, "DAKO", Denmark), меченные HRP. Эти моноклональные антитела связываются с ядерным белком Ki-67, который экспрессируется в пролиферирующих клетках, находящихся в G1, S, G2 и М-фазах клеточного цикла. Сопоставление двух вышеприведенных методов показало практически идентичный результат (длительный период полужизни белка PCNA в клетках, находящихся в S-фазе). С учетом того, что использование антител к Ki-67 не всегда дает стабильный положительный результат, основной раздел работы с количественным анализом пролиферирующих клеток был выполнен с использованием антител к PCNA. При постановке иммуноцитохимической реакции была использована система визуализации EPOS ("DAKO"), "проявку" антигена осуществляли хромогеном 3,3-диаминобензидином, докраску ядер непролиферирующих клеток осуществляли метиленовым зеленым.

При морфометрическом исследовании в каждом случае подсчету подвергали 100 клеток при увеличении x 500 в микроскопе "Opton", не используя морфометрическую сетку, численность изучаемых клеточных форм выражали в процентах. Значимость различий между изучаемыми выборками определяли с помощью t-критерия Стьюдента. С учетом того, что после иммуногистохимической окраски можно выявить два пула клеток: веретенообразновытянутые, среди которых преобладают ГМК, и округлой формы, среди которых присутствуют как макрофаги, так и лимфоциты, эти клетки были обозначены как мононуклеарные. Наибольший интерес представляли именно мононуклеары, поскольку наличие данных клеток свидетельствует о клеточных реакциях, характеризующих, в первую очередь, развитие иммунного воспаления.

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!


Начата подписка на 2019 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2019 Цитокины и Воспаление