Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2018 год
1-4 номера

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2007, № 3

Подписаться на 2019 год

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 3'2007

ДИНАМИКА ИЗМЕНЕНИЯ АКТИВНОСТИ ЦИТОКИНОВИ ФУНКЦИЙ НЕЙТРОФИЛОВ В КРОВИ КРЫСПОСЛЕ ТЕРМИЧЕСКОГО ОЖОГА КОЖИ

В.И. Коненков, О.П. Макарова, Н.П. Бгатова, И.Г. Ракова

Проведено исследование сывороточного уровня IL-1β, TNFα, IL-2, IL-4 и функций нейтрофилов (Нф) в крови крыс Вистар в норме и после термического ожога кожи степени 3А (10 % поверхности тела). Концентрацию цитокинов определяли проточной иммунофлюориметрией с использованием тест-системы "Bio-Rad", функциональное состояние Нф - по фагоцитозу убитых S. aureus и восстановлению НСТ до и после стимуляции продигиозаном или убитыми S. aureus. В течение первой недели обнаружено снижение уровня IL-1β, IL-2 и TNFα и выраженное увеличение (в 2,2 раза) концентрации IL-4. Процент фагоцитирующих Нф снижался в 1,4 раза. Повышенный окислительный метаболизм Нф наблюдали только на 3-и сутки. В течение второй недели происходило восстановление фагоцитарной и снижение биоцидной функции Нф, что сочеталось со снижением способности Нф отвечать на стимуляцию продигиозаном и S. aureus. Повышение провоспалительных цитокинов IL-1β, TNFα наблюдали к 30-м суткам. Таким образом, выявлено двухфазное изменение активности цитокинов с различной биологической активностью и функций Нф. (Цитокины и воспаление. 2007. Т. 6, № 3. С. 57-62.)

Ключевые слова: ожог кожи, цитокины, нейтрофилы, НСТ-тест, фагоцитоз.

Функциональное состояние нейтрофилов во многом определяет прогноз как местного раневого процесса при ожоге кожи, так и течение ожоговой болезни при обширных поражениях в целом [7]. Термическое повреждение кожи часто сопровождается угнетением функций фагоцитарных систем организма, активно участвующих в формировании защитной воспалительной реакции. В то же время именно нейтрофилы, обладая высоким провоспалительным потенциалом, способны провоцировать развитие системного воспалительного ответа при ожоговой травме [4]. На функциональное состояние нейтрофильных лейкоцитов и их готовность к реагированию на бактериальные стимулы оказывают существенное влияние продукты активированных иммунных клеток - цитокины [3]. В зависимости от характера воздействия на воспалительный процесс цитокины подразделяются на провоспалительные (IL-1β, IL-6, IL-8, TNFα, IFNγ) и противовоспалительные (IL-2, IL-4, IL-10, TGFβ) [4, 6]. Исследований, посвященных комплексному изучению реактивности этих клеток и продукции цитокинов на всем протяжении воспалительного процесса после ожога кожи, проведено недостаточно. В связи с этим целью данного исследования явилось одновременное изучение динамических изменений активности цитокинов - IL-1β, TNFα, IL-2, IL-4 и функционального состояния нейтрофилов по поглотительной и биоцидной активности, а также по изменению кислородного метаболизма после стимуляции при развитии воспаления после термического ожога.

Материалы и методы

В эксперименте использовали 29 крыс-самцов породы Вистар массой 180-200 г. питомника "Рассвет" (г. Томск). Работу с животными проводили в соответствии с "Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных". Под эфирным наркозом крысам выбривали участок кожи в грудопоясничной области и наносили ожог диаметром 2 см с помощью специально разработанного устройства, путем подачи водяного пара в течение 5 сек. У животных развивалась ожоговая рана кожи 3А степени, занимающая 10 % поверхности тела. Контролем служили интактные животные. Развитие воспалительной реакции в ответ на термическое повреждение документировалось морфологическими исследованиями раневой поверхности кожи. Образцы кожи фиксировали в 1%-ном растворе ОsО4 на фосфатном буфере (pH 7,4) [13], дегидратировали в этиловом спирте возрастающей концентрации и заключали в эпон. Из полученных блоков готовили полутонкие срезы толщиной 1 мкм, окрашивали толуидиновым голубым, изучали под световым микроскопом.

Концентрацию цитокинов IL-1β, IL-2, IL-4, TNFα в сыворотке крови оценивали методом проточной иммунофлюориметрии на 2-х лучевом лазерном автоматизированном анализаторе (Bio-Plex Protein Assay System, Bio-Rad, USA). Сыворотку крови крыс получали через 3, 7, 15 и 30 суток после нанесения ожога. Образцы сыворотки для анализа быстро замораживали и хранили при -70°С. Перед исследованием образцы сыворотки размораживали и фильтровали через одноразовые нитроцеллюлозные фильтры с порами 0,4 нм в диаметре. Для исследования концентрации цитокинов в 50 мкл образца использовали коммерческую тест-систему фирмы "Bio-Rad" (USA) в соответствии с инструкцией фирмы-производителя. Для расчета концентрации исследуемых цитокинов использовали стандартные калибровочные разведения и программное обеспечение, поставляемое фирмой Bio-Rad (Bio-Plex Manager версии 3.0). Данные представлены в пг/мл.

Для оценки степени эндогенной интоксикации использовали метод определения средних молекул в сыворотке крови экспериментальных животных. "Средние молекулы" представляют собой гетерогенный континуум веществ в основном пептидной природы, молекулярная масса которых колеблется в диапазоне 300-5000 Да. Определение концентрации молекул средней массы проводили по методу, предложенному И.И. Габриелян и др. [1].

Оценку кислород-зависимой биоцидности нейтрофильных лейкоцитов и способности их к фагоцитозу выполняли по методам, описанным Д.Н. Маянским и др. [5]. Забор крови у экспериментальных животных производили при обрезании кончика хвоста под эфирным наркозом. Кислород-зависимую биоцидность нейтрофилов крови определяли в НСТ-тесте, в спонтанном и индуцированном вариантах. В качестве стимуляторов применяли продигиозан - липополисахаридный комплекс, выделенный из непатогенного микроорганизма B. prodigiosum ("Мосхимфармпрепараты", Россия), и убитые бактерии S. aureus (Харьковское предприятие по производству бактерийных препаратов, Украина). Фагоцитарную активность нейтрофилов оценивали по способности поглощать убитые бактерии S. aureus.

Статистическую обработку результатов проводили с применением пакета статистических программ Statistica 6.0.

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!


Начата подписка на 2019 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2019 Цитокины и Воспаление