Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2018 год
1-4 номера

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2007, № 3

Подписаться на 2019 год

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Врачу общей практики

Номер 3'2007

ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ БЕСТИМА (SCV-07)НА ДИФФЕРЕНЦИРОВКУ Т-ЛИМФОЦИТОВ У МЫШЕЙ

А.В. Петров, Н.В. Пигарева, А.Ю. Котов, А.А. Колобов, А.С. Симбирцев

Бестим - новый иммуномодулирующий препарат, используемый для терапии вторичных иммунодефицитов. В данной работе показано, что после введения Бестима у мышей наблюдается стимуляция лимфопоэза, что проявляется увеличением доли c-kit+- и Thy1+-клеток в костном мозге, изменением субпопуляционного состава и функциональной активности тимоцитов. Также увеличивается митоген-индуцированная продукция IL-2 и IFNγ спленоцитами при неизменной или сниженной продукции IL-4, что свидетельствует о поляризации иммунного ответа в направлении Т-хелперов 1-го типа. При пероральном введении Бестим полностью сохраняет свою иммуномодулирующую активность. В целом полученные данные указывают, что Бестим является перспективным препаратом для терапии широкого круга заболеваний, сопровождающихся дефицитом Т-клеточного звена, а также связанных с нарушением баланса Th1/Th2. (Цитокины и воспаление. 2007. Т. 6, № 3. С. 27-31.)

Ключевые слова: Бестим, Т-лимфоциты, дифференцировка, цитокины.

Бестим (γ-D-глутамIL-L-триптофан) - иммуномодулятор пептидной природы, разработанный в ГосНИИ особо чистых биопрепаратов (Санкт-Петербург). Открытие препарата стало результатом масштабного исследования активности синтетических аналогов глутамIL-триптофана с атипичными пептидными связями и/или содержащих D-аминокислоты. В ряду подобных веществ Бестим проявлял наибольшую активность в тестах in vitro - увеличивал экспрессию маркера Thy1 на клетках костного мозга и усиливал конканавалин А (КонА)-индуцированную продукцию IL-2 спленоцитами мыши. Эти же активности наблюдались также при введении препарата in vivo. В дополнение к усилению продукции IL-2 введение Бестима мышам приводило к повышению митоген-индуцированной продукции спленоцитами интерферона (IFN) γ при неизменной или сниженной продукции IL-4. Данное обстоятельство показывает влияние препарата на поляризацию Т-хелперов в направлении Т-хелперов первого типа (Th1) [3].

Бестим характеризуется практически полным отсутствием токсичности. Опыт клинического применения Бестима продемонстрировал клинико-иммунологическую эффективность этого препарата в комплексной терапии различных форм патологии, таких как хламидийная инфекция и туберкулез [2, 4], а также для повышения эффективности вакцинации [1]. Таким образом, Бестим является перспективным иммуномодулятором, терапевтическая активность которого исследуется в настоящее время в нескольких контролируемых клинических испытаниях. В то же время представления о действии препарата на различные этапы созревания Т-лимфоцитов недостаточно полны.

В настоящей работе представлены результаты глубокого изучения влияния препарата Бестим на лимфопоэз и поляризацию иммунного ответа у мышей при парентеральном и пероральном введениях. Результаты имеют существенное значение для понимания особенностей действия данного иммуномодулятора и создают предпосылки для использования Бестима при более широком круге заболеваний.

Материалы и методы

В работе использовались мыши (CBAЧC57Bl/6)F1 (Питомник лабораторных животных "Рапполово"), а также беспатогенные мыши линии BALB/c и аутбредные мыши Swiss Webster (Питомник лабораторных животных "Пущино"). Ампулированный препарат Бестим (ООО "НПФ Верта") вводили животным внутрибрюшинно (в/б) в дозах 0,1 и 1,0 мкг/кг в 200 мкл стерильного физиологического раствора (ФР) или перорально (п/о) в тех же дозах с помощью пищеводного зонда ежедневно в течение 3 дней. Контрольным животным вводили 200 мкл ФР в/б или п/о. В каждой группе было не менее 5 животных. Анализ иммунно-го ответа проводили, если не указано иначе, через 72 часа после последнего введения.

Клетки тимуса и селезенки выделяли стерильно. Тимоциты (1x106 клеток на лунку) и спленоциты (5x105 клеток на лунку) в 4-х параллелях стимулировали в присутствии конканавалина А (КонА) (Sigma) в среде RPMI-1640 с 10 % или 2 % телячьей эмбриональной сыворотки (Sigma), соответственно, в 96-луночных плоскодонных культуральных платах (Costar) в течение 72 часов в CO2-инкубаторе при 37 °С в условиях абсолютной влажности. Интенсивность пролиферации оценивали по включению 3Н-тимидина и выражали числом импульсов в минуту (имп/мин).

Для оценки КонА-индуцированной продукции цитокинов в культурах тимоцитов и спленоцитов клетки в концентрации 1x106/мл стимулировали различными дозами КонА, супернатанты собирали через 24 часа и определяли содержание IL-4 и интерферона гамма (IFNγ) с помощью твердофазного ИФА на основе реагентов EIA Expansion Kits (BD Biosciences Pharmingen) по инструкции изготовителя. Кроме того, биологическую активность IL-2 в супернатантах определяли с помощью биологического теста с IL-2-зависимой линией клеток CTLL-2.

Экспрессию антигенов CD3, CD4, CD8, CD90.1 (Thy1) и CD117 (c-kit) на клетках периферической крови, тимуса, селезенки и костного мозга определяли с помощью проточной цитофлюориметрии на цитофлюориметре EPICS XL (Beckman Coulter) после окраски соответствующими флюоресцеин- или фикоэритрин-меченными моноклональными антителами (Caltag) по инструкции изготовителя. Гейт (окно) популяции клеток устанавливали на основе комбинации прямого и бокового светорассеяния. При учете результатов подсчитывали 10000 клеток в гейте. Статистическую обработку данных цитометрии проводили с использованием программного пакета WinMDI 2.8.

Статистическую обработку результатов проводили с использованием двустороннего теста Стьюдента. Взаимосвязь параметров оценивали с помощью критерия Спирмена. Отличия считали достоверными при р<0,05.

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!


Начата подписка на 2019 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2019 Цитокины и Воспаление