Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2018 год
1-4 номера

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2007, № 3

Подписаться на 2019 год

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 3'2007

МОДУЛЯЦИЯ ЛЕПТИНОМ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ НЕЙТРОФИЛОВ И МОНОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ЖЕНЩИН

Е.Г. Орлова, С.В. Ширшев

Изучено влияние лептина на фагоцитарную и секреторную активность нейтрофилов и моноцитов женщин. Показано, что лептин в дозах, сопоставимых с концентрацией гормона в I и во II-III триместрах беременности, не оказывает влияния на фагоцитарную активность фракционированных нейтрофилов как по отношению к опсонизированным формалинизированным эритроцитам барана (опФЭБ), так и к неопсонизированным ФЭБ. Однако при совместном культивировании нейтрофилов и моноцитов, а также в монокультурах моноцитов лептин усиливает фагоцитоз неопсонизированных ФЭБ и, особенно, опФЭБ. Блокада рецепторов С3b-компонента комплемента отменяет активирующий эффект гормона на поглощение моноцитами опФЭБ. Связывание скевенджер-рецепторов с лигандом также отменяет стимулирующее действие лептина на фагоцитарную активность моноцитов в отношении ФЭБ. При оценке модуляции лептином секреторной функции моноцитов установлено, что лептин стимулирует секрецию IL-1β и угнетает продукцию IFNα моноцитами только при совместном культивировании с нейтрофилами. Таким образом, лептин в дозах, характерных для беременности, дифференцированно модулирует функциональную активность моноцитов и нейтрофилов периферической крови женщин. (Цитокины и воспаление. 2007. Т. 6, № 3. С. 44-48.)

Ключевые слова: лептин, моноциты, нейтрофилы, фагоцитарная активность, продукция цитокинов.

Лептин является пептидным гормоном с молекулярной массой 16 кДа, который синтезируется, главным образом, адипоцитами и циркулирует в крови как в свободной, так и в связанной форме [10, 14]. Основная биологическая роль лептина связана с регуляцией энергетического баланса организма, потребления пищи и ограничением избыточного накопления жировой массы. Содержание лептина в плазме крови прямо коррелирует с количеством жировой ткани, а также варьирует в зависимости от особенностей обменных процессов, изменения концентрации некоторых гормонов и цитокинов [10]. Так, уровень лептина значительно нарастает во время беременности, особенно во II-III триместре [12]. Участие лептина в регуляции иммунных реакций определяется его непосредственным влиянием на клетки иммунной системы, которые экспрессируют специфические гормональные рецепторы (Ob-R) [8, 11]. Анализ литературы убедительно показывает, что лептин является провоспалительным гормоном, который способствует преобладанию клеточно-опосредованных иммунных реакций, вследствие усиления продукции цитокинов Th1-типа (Тh1) [10, 14].

Моноциты являются ведущими эффекторами клеточно-опосредованных иммунных реакций и неспецифической резистентности организма. Их вклад в процессы иммунного реагирования определяется поглощением, деструкцией патогена и презентацией его антигенных детерминант, а также продукцией ряда биологически активных соединений, в том числе и цитокинов, модулирующих направленность развития иммунного ответа по Тh1-типу. Известно, что среди лейкоцитов мононуклеарные фагоциты имеют высокий уровень экспрессии молекул Ob-R, количество которых возрастает при активации клеток [4, 14].

Нейтрофилы наряду с моноцитами играют ведущую роль в развитии неспецифических защитных реакций организма. Обладая высокой реактивностью, нейтрофилы первыми мигрируют в очаг поражения и определяют пусковые механизмы развития воспаления, а также принимают активное участие в деструкции и элиминации патогена. Исследования последних лет показали, что нейтрофилы экспрессируют короткую форму Ob-R [7, 8]. Известно, что беременность сопровождается существенным изменением функциональной активности моноцитов и нейтрофилов [2], восприимчивость которых к лептину зависит от исходного гормонального фона, в частности от уровня стероидов [12].

Цель настоящей работы состояла в изучении влияния лептина в дозах, сопоставимых с концентрацией гормона в I, II-III триместрах беременности, на фагоцитарную активность и продукцию цитокинов фракционированными нейтрофилами и моноцитами, а также при их совместном культивировании.

Материалы и методы

Объектом исследования служили фракционированные нейтрофилы и моноциты периферической крови здоровых небеременных женщин репродуктивного возраста (от 23 до 32 лет). Периферическую кровь забирали из кубитальной вены в фолликулярную фазу менструального цикла (5-11 день). Нейтрофилы выделяли центрифугированием в двойном градиенте плотности фиколла-верографина (1,12 г/см3). Суспензию мононуклеаров получали центрифугированием в градиенте плотности фиколла-верографина (1,077 г/см3) с последующим выделением моноцитов путем адгезии на стеклянных чашках Петри. Чистота выделения моноцитов, оцениваемая с использованием моноклональных антител к CD14 (Primary Anti-Human CD14; clone 2D-15C, ICN Ph., USA), составляла 78-85 %. Жизнеспособность фракционированных нейтрофилов и моноцитов в тесте с эозином составляла 95-98 %. Влияние лептина (10 и 35 нг/мл, "Sigma", USA) в дозах, сопоставимых с концентрацией гормона в I, II-III триместрах беременности соответственно [12], на фагоцитарную активность нейтрофилов и моноцитов оценивали по поглощению формалинизированных эритроцитов барана (ФЭБ) и опсонизированных ФЭБ (опФЭБ) по стандартной методике [1]. Опсонизацию ФЭБ проводили пулом сывороток от 12 здоровых доноров, инкубируя объекты в течение 30 мин при 37 °С, периодически пипетируя. Выделенные нейтрофилы (1x106/мл), моноциты (1x106/мл), а также совместную культуру этих клеток (1x106/мл, нейтрофилы и моноциты в количественном соотношении 5:1) прединкубировали с лептином в дозах 10 и 35 нг/мл 60 мин при 37 °С. Затем часть клеток забирали и смешивали с равным объемом ФЭБ или опФЭБ (1x107/мл).

При оценке фагоцитарной активности клеток рассчитывали ряд показателей: фагоцитарное число, фагоцитарный индекс, процент фагоцитоза.

Для исследования механизмов модулирующих эффектов гормона на поглотительную функцию моноцитов за 5 мин. до внесения объектов фагоцитоза в суспензию добавляли блокатор скевенджер-рецепторов (Poly I:C, 100 мкг/мл, "Sigma", USA) [9] или блокатор рецепторов С3-компонента комплемента (CR3) (С3-компонент комплемента, 1 мг/мл, "Sigma", USA).

Оценку секреторной активности моноцитов проводили после прединкубации с гормоном, для чего в монокультуру моноцитов, а также в совместную культуру нейтрофилов и моноцитов вносили в качестве стимулятора липополисахарид (ЛПС) (100 нг/мл, E. coli; 026:B6; "Sigma", USA). После 18 ч культивирования при 37 °С в условиях 5 % СО2 собирали супернатанты и определяли концентрацию IL-1β, IFNα иммуноферментным методом с использованием коммерческих наборов (ООО "Цитокин", Санкт-Петербург). Контролем служили пробы без внесения гормона и/или ЛПС. Достоверность различий оценивали с помощью парного t-критерия Стьюдента.

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!


Начата подписка на 2019 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2019 Цитокины и Воспаление