Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер 2 номер
3 номер 4 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2009, № 1

Подписаться на 2018 год

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Врачу общей практики

Номер 1'2009

ПРОДУКЦИЯ ЦИТОКИНОВ КЛЕТКАМИ КРОВИКАК ПОКАЗАТЕЛЬ НАПРЯЖЕННОСТИПОСТВАКЦИНАЛЬНОГО КЛЕТОЧНОГО ИММУНИТЕТА

С.Л. Рыжикова, Ю.Г. Дружинина, Т.Г. Рябичева, М.Ю. Рукавишников, Н.А. Вараксин

Исследована возможность оценки напряженности клеточного иммунитета условно здоровых доноров по продукции цитокинов клетками цельной крови в ответ на стимуляцию HBsAg. Был рассмотрен широкий спектр цитокинов при ФГА и HBsAg стимуляции цельной крови 48 условно-здоровых иммунизированных рекомбинантной вакциной против гепатита В и неиммунизированных добровольцев. Для количественной оценки напряженности клеточного иммунитета нами был применен цитокиновый индекс (Iцит?, отношение антиген-стимулированной к митоген-стимулированной продукции цитокина). Показано, что значения цитокинового индекса для вакцинированных и невакцинированных добровольцев достоверно отличаются для IFN?, IL-6, IL-1?, TNF?, IL-1Rа. Наиболее достоверные отличия и наибольший размах средних значений Iцит? между добровольцами выявлен для индекса интерферона-гамма (IIFN?). Не обнаружено прямой корреляции между уровнем антител к HBsAg и IIFN? (и абсолютными значениями IFN?). Выявленная нами корреляция между значениями индекса IIFN? и индексами других цитокинов (IIL-6, ITNF?, IIL-1?, IIL-1Rа) позволяет предположить, что при контакте с HBsAg у лиц с высоким IIFN? будут активированы и продукция антител (IL-6 и IL-1?), и эффекторные клетки (TNF? и IL-1?). (Цитокины и воспаление. 2009. Т. 8, № 1. С. 57-61.)

Ключевые слова: клеточный иммунитет, цитокины, гепатит В, HBsAg.

При "классической вакцинации" с использованием Пастеровских вакцин эффективность иммунизации достаточно оценивать только по наличию и титру антител, так как при такой вакцинации задействованы все те же иммунные механизмы, что и при инфицировании. Однако с развитием новых технологий приготовления вакцин (рекомбинантные, субъединичные, ДНК-вакцины и, особенно, с использованием трансгенных растений), а также способов доставки (липосомы, микрокапсулы, гидрогели и пр.) недостаточно оценивать только гуморальное звено иммунитета. Эффективная вакцина, в первую очередь, должна индуцировать нужную форму иммунологического ответа: вызывать образование специфических антител к внеклеточным микробам и токсинам; формировать клеточный иммунитет к внутриклеточно размножающимся возбудителям. При разработке новых поколений вакцин и вакцин к новым возбудителям (в том числе, ВИЧ) необходимо точно знать, какое звено иммунитета играет основную роль в защите от данного патогена, и контролировать вызываемый тип иммунного ответа на всех стадиях доклинических и клинических испытаний.

У большинства людей, переболевших либо иммунизированных живой аттенуированной вакциной, как правило, сохраняется пожизненный иммунитет. При использовании других типов вакцин требуются ревакцинации. Например, при иммунизации рекомбинантной вакциной против гепатита В (ГВ) у части привитых (5-10?%) антитела к HBsAg не нарабатываются [6]. Более того, через 3-5 лет после иммунизации у значительной части привитых (до 25?%) антитела к HBsAg исчезают, что свидетельствует об ослаблении гуморального звена иммунитета. Некоторые фирмы-производители вакцин в инструкциях по применению рекомендуют проводить ревакцинацию через 5 лет после первичной иммунизации. Вместе с тем, к настоящему времени установлено, что даже при низком уровне антител к HBsAg (или отрицательном результате их определения) в крови у пациентов через много лет после проведения вакцинации НВsAg выявлялся крайне редко. Кроме того, ни один из обследованных субъектов не стал носителем вируса ГВ, и, тем более, не отмечено ни одного клинически выраженного случая заболевания ГВ [5]. После введения дополнительной дозы вакцины таким пациентам, как было показано, у них вновь начинается продукция антител против HВs-антигена. Концентрация этих антител была тесно связана с динамикой и степенью выраженности пролиферативного Т-клеточного ответа. В целом, результаты исследований свидетельствуют о том, что защита организма от вируса ГВ зависит скорее от иммунологической памяти, чем от уровня антител в крови пациента. Поэтому очевидно, что для оценки напряженности поствакцинального иммунитета необходимо оценивать как его гуморальную, так и клеточную составляющую.

Для исследования клеточного иммунитета в лабораториях используют кожные тесты, реакцию бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ), а также иммуноферментный анализ в тесте ELISPOT (enzyme-linked immunosorbent spot assay), позволяющий полуколичественно определить число антиген-специфичных Т-клеток. Однако применение РБТЛ и кожных тестов ограничивается либо большим количеством неспецифических реакций, либо низкой сходимостью результатов, полученных разными группами исследователей, и длительностью анализа, а ELISPOT мало доступен из-за высокой стоимости анализа и сложности интерпретации результатов [4].

Цель настоящей работы - исследование возможности оценки напряженности клеточного иммунитета условно здоровых доноров по продукции цитокинов клетками цельной крови в ответ на стимуляцию HBsAg.

Материалы и методы

Обследовано 48 условно здоровых добровольцев в возрасте 20-60 лет, в том числе: 30 невакцинированных HBsAg лиц с отсутствием серологических маркеров ГВ (1-я группа); 15 вакцинированных HBsAg людей с наличием антител к HBsAg и отсутствием антител к HВcor белку (2-я группа); 3?человека, переболевших ГВ (3-я группа).

Для проведения исследований 1 мл отобранной утром, натощак, периферической крови вносили во флакон, содержащий 4 мл стерильной поддерживающей среды DMEM (Biolot) с гепарином (2,5?ЕД/мл), гентамицином (100 мкг/мл) и L-глютамином (0,6 мг/мл). Полученный раствор делили на порции:

  • 2 мл использовали для определения спонтанной продукции цитокинов крови;
  • 1 мл?+?фитогемагглютинин (ФГА, Sigma) до конечной концентрации 10 мкг/мл [1, 3] - для митоген-индуцированной продукции цитокинов;
  • 1 мл?+?плазменный HBsAg до конечной концентрации 0,5-5,0?мкг/мл - для антиген-индуцированной продукции цитокинов.

Образцы инкубировали при 37 °С в течение суток, клетки крови осаждали центрифугированием при 3000 g в течение 10 мин, над-осадочную жидкость разливали по аликвотам и замораживали до проведения анализа.

Концентрацию цитокинов, анти-HBsAg и анти-HВcor определяли с помощью соответствующих наборов для иммуноферментного анализа производства ЗАО "Вектор-Бест" (г. Новосибирск). Статистическую обработку материала проводили с использованием программы Statistica 6.1.

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!


Начата подписка на 2018 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление