Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2009, № 1

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 1'2009

ИММУНОКОРРИГИРУЮЩЕЕ ДЕЙСТВИЕКОРКОВЫХ НЕЙРОТРОФИЧЕСКИХ ФАКТОРОВПРИ ИНСУЛЬТ-ИНДУЦИРОВАННОМ ИММУНОДЕФИЦИТЕ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

А.Е. Кульчиков, Н.С. Косицын, А.Н. Макаренко, И.Г. Васильева

Корковые нейротрофические факторы (КНФ) представляют собой комплекс пептидов и аминокислот (мол. масса менее 1000 Да), полученных из неокортекса животных, успешно перенесших экспериментальный геморрагический инсульт. Механизм их лечебного действия при остром инсульте связан со способностью регулировать продуцирование нейроцитокинов. Настоящее исследование посвящено изучению иммуноактивной фракции КНФ в условиях инсульт-индуцированного иммунодефицита. На первом этапе (исследование in vivo) изучали влияние КНФ на иммунную систему мышей при экспериментальном геморрагическом инсульте, а на втором этапе (исследование in vitro) оценивали один из возможных механизмов их иммунокорригирующего действия. Показано, что у мышей при моделировании острого геморрагического инсульта развивается нарушение иммунного ответа, при этом применение КНФ приводило к нормализации нарушенных показателей иммунитета, особенно при их интраназальном введении. Один из возможных механизмов иммунокорригирующего действия КНФ связан с их способностью индуцировать гамма-интерферон лейкоцитами крови человека в титрах 162 МЕ/мл. Следовательно, КНФ обладают помимо нейроактивирующего действия и иммунокорригирующей активностью в условиях инсульт-индуцированного иммунодефицита. (Цитокины и воспаление. 2009. Т. 8, №?1. С. 36-41.)

Ключевые слова: экспериментальный геморрагический инсульт, корковые нейротрофические факторы, инсульт-индуцированный иммунодефицит, гамма-интерферон.

Острое нарушение мозгового кровообращения (ОНМК) является одним из наиболее распространенных цереброваскулярных заболеваний, при котором инфекционные осложнения становятся важным патогенетическим фактором неблагоприятных и тяжелых последствий тяжелого заболевания [1, 3, 13]. Данные осложнения возникают вследствие сочетанного действия ряда неблагоприятных факторов: гибели значительного количества нейронов, нарушения нейроиммунного гомеостаза мозга, сопутствующей патологии и т. д. [9, 14]. Совокупность вышеуказанных неблагоприятных факторов приводит к развитию вторичного иммунодефицитного состояния и усилению иммунной депрессии вследствие накопления бактериальных и вирусных токсинов, протеолитических ферментов, а также медиаторов воспаления, результатом чего является присоединение инфекционных осложнений и замыкание сформированного патологического круга [6, 12, 17].

Принимая во внимание столь сложную и многоэтапную картину патогенеза инсульта, для его лекарственной коррекции необходим качественно новый политерапевтический подход, направленный на коррекцию всех индуцированных патологических процессов [2]. В связи с этим наиболее перспективными веществами в этой области представляются лекарственные средства, обладающие нейротрофическими и иммуномодулирующими свойствами [16, 20]. Корковые нейротрофические факторы (КНФ) представляют собой комплекс пептидов и аминокислот (мол. массой менее 1000 Да), получаемых из неокортекса взрослых свиней, успешно перенесших правополушарный экспериментальный геморрагический инсульт [8]. Механизм их лечебного действия при ОНМК связан со способностью регулировать продуцирование нейротрофических факторов на молекулярном уровне [4]. Настоящее исследование посвящено изучению иммунокорригирующего действия препарата КНФ при инсульт-индуцированном иммунодефиците. Рабочая гипотеза заключается в том, что молекулы КНФ, помимо регулирующего действия на систему нейроцитокинов, оказывают влияние на продукцию цитокинов, регулирующих иммунный ответ, вследствие чего достигается иммунокорригирующее действие при инсульт-индуцированном иммунодефиците. Предлагается использовать интраназальный способ введения молекул КНФ, что позволяет транспортировать их непосред-ственно в мозг за счет ретроградного аксонного транспорта по волокнам обонятельного нерва, минуя гематоэнцефалический барьер [4].

Цель исследования?- изучение характера нарушений иммунной системы при экспериментальном геморрагическом инсульте и способы коррекции с помощью применения корковых нейротрофических факторов.

Материалы и методы

Этап I (исследование in vivo). Опыты выполнены на 92 нелинейных белых мышах обоего пола массой 18-22 г, которые были разделены на 4 группы. Первая группа?-интактные животные, вторая группа?-животные с экспериментальным геморрагическим инсультом (ГИ) и две опытные группы (ГИ+КНФ), у которых лечение ГИ осуществляли с помощью интраназального (i. n., 3-я группа) и внутрибрюшинного (i. p., 4-я группа) введения раствора КНФ в дозе 0,1 мг/кг массы тела. Непосредственно перед введением КНФ (лиофильно высушенный порошок в ампулах) растворяли в дистиллированной воде из расчета 0,5 мг/кг, и животному в положении "на спине" закапывали по 2 капли КНФ в оба наружных носовых хода. В последующем раствор КНФ хранили в холодильнике (0 : +2 °C) и применяли по схеме (1?раз в сутки в течение 7 дней), начиная с первых суток (через 3-4?ч после воспроизведения инсульта). Животным первой и второй групп закапывали дистиллированную воду.

У анестезированных диэтиловым эфиром животных производили рассечение покровных тканей в лобной, теменной и затылочных областях, удаляли надкостницу с костей свода черепа. Высверливали с помощью трепана одно отверстие в проекции capsula interna правого полушария. Моделирование экспериментального ГИ осуществляли с помощью вращательных движений участка металлического мандрена, девиантно выступающего из предварительно подготовленной инъекционной иглы, усовершенствованной резиновым фиксатором (рис. 1). Травматизацию мозга осуществляли пятью вращательными движениями мандрена (по часовой стрелке), при этом достигалось конусообразное подсечение ткани мозга и повреждение сосудов в области capsula interna правого полушария на глубине 1,3-1,6 мм [11].

В процессе исследования изучали выживаемость животных и определяли ряд иммунологических показателей гуморального и клеточного иммунитета: первичный гуморальный иммунный ответ на тимусзависимый антиген (эритроциты барана, ЭБ) и реакцию гиперчувствительности замедленного типа (РГЗТ). Первичный гуморальный иммунный ответ отражает участие клеточных структур иммунной системы и их взаимодействие в процессе выработки антител. Оценивали титры циркулирующих антител (гемолизинов и гемагглютининов) в микропанелях на 7-е сутки после иммунизации, которую проводили через 1 сутки после воспроизведения ГИ введением мышам оптимальной дозы ЭБ (108 клеток) в объеме 0,2?мл. У мышей регистрировали массу тела, а после умерщвления?-массу тимуса и селезенки. Клеточное звено оценивали по РГЗТ, дающей представление о функциональной активности Т-лимфоцитов. Изучали влияние ГИ на продукцию сенсибилизированными Т-лимфоцитами факторов, вовлекающих мононуклеарные фагоциты в иммунный ответ. Мышей сенсибилизировали однократным внутрибрюшинным введением ЭБ в дозе 2???105 клеток в объеме 0,5 мл на 20 г массы тела. Через 5 суток животным в подушечку левой задней (опытной) лапы вводили 108 ЭБ в объеме 0,02 мл, а в правую заднюю (контрольную) лапу?-изотонический раствор натрия хлорида в том же объеме. Через 24 ч у животных определяли массу регионарных (подколенных) лимфатических узлов; результаты опыта оценивали по индексу РГЗТ?-отношению массы опытного лимфоузла к массе контрольного [5, 7, 15].

Морфологический контроль поражения головного мозга (очаг посттравматического кровоизлияния) осуществляли на окрашенных гематоксилином и эозином и тионином (по Нисслю) фронтальных срезах мозга.

Этические аспекты. Все работы с животными проводились согласно Guide for the Care and Use of Laboratory Animals [18].

Этап II (исследование in vitro). Исследовали лиофильно высушенные КНФ разных серий (1-5), представляющие собой комбинацию 1,0 мг фармакологически активных веществ, и 100 мг сахарозы. В других сериях опытов (I, II, III) использовали низкомолекулярные фракции КНФ, полученные гель-хроматографически с помощью сефадекса G-15 ("Pharmacia", Sweden). Интерфероногенную активность КНФ исследовали в экспериментах in vitro. Работа выполнена с использованием вируса везикулярного стоматита (ВВС), штамм Индиана, полученного из музея вирусов Института вирусологии им. Д.И.?Ивановского РАМН (Москва). Инфекционный титр ВВС в культуре клеток L41 составлял 4,0-5,0 lg ТЦЦ50. Для активации продукции интерферона использовали лейкоциты крови доноров в концентрации 3???106 клеток/мл, к которым добавляли 0,1 мл 0,1?%-го раствора КНФ, смесь инкубировали при температуре 37 ?С в течение 18 ч. Затем в надосадочной жидкости определяли активность гамма-интерферона (IFN?) по методу подавления цитопатогенного действия ВВС в гомологичной перевиваемой культуре клеток L41 [19]. Контролем служили клетки, обработанные ВВС (контроль вируса), и интактные клетки, не подвергшиеся подобной обработке (контроль клеток). Опытные и контрольные культуры инкубировали при температуре 37 ?С в течение 24 ч и после полной дегенерации клеток в контроле вируса, а также при отсутствии дегенерации в контроле клеток проводили учет активности IFN?. Титром IFN? служила величина, обратная разведению КНФ, при которой культура клеток на 50?% была защищена от цитопатогенного действия ВВС. Тип интерферона определяли по реакции нейтрализации со специфическими моноклональными антителами ("Sigma", USA) к IFN?, IFN? и IFN?, а также по маркерным показателям pH и реакции прогревания при температуре 56 ?С в течение 30?мин. В качестве препарата сравнения избран церебролизин ("Ebewe", Austria), пирацетам ("СИНТЕЗ ОАО", Россия) и физиологический раствор в той же дозе.

Статистика. Статистическую обработку полученных данных выполняли с помощью программ Biostat и Statistica 6.0. Достоверность различий средних значений устанавливали с помощью t-критерия Стьюдента.

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление