Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2009, № 2

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 2'2009

TGF?1 и регуляторные Т-клетки в формировании иммунной супрессии у онкологических больных

А.В. Чуров, Е.К. Олейник, В.М. Олейник

Одним из механизмов иммунной супрессии в онкогенезе считается увеличение численности CD4+CD25+-Treg-лимфоцитов (Treg). В настоящей работе проведена оценка супрессорной активности Treg-клеток у онкологических больных по уровню экспрессии трансформирующего фактора роста ?1 (TGF?1) и маркеров CD25 и FOXP3 лимфоцитами периферической крови. У больных с опухолями наблюдается увеличение экспрессии CD25, TGF?1 и FOXP3 по сравнению со здоровыми донорами. У больных раком легкого (РЛ) супрессорная активность Treg-клеток была выше по сравнению с группой больных колоректальным раком (КРР). (Цитокины и воспаление. 2009. Т. 8, № 2. С. .)

Ключевые слова: TGF?1, FOXP3, иммунная супрессия.

Изучение процесса формирования иммунной супрессии при опухолевом росте является одной из наиболее актуальных проблем современной иммунологии. В настоящее время важнейшим механизмом супрессии в онкогенезе считается увеличение численности регуляторных CD4+CD25+-T-клеток (Treg), которые обладают способностью ингибировать функции лимфоцитов-эффекторов противоопухолевого иммунного ответа [15]. По данным ряда исследований, у онкологических больных численность Treg-клеток увеличивается в периферической крови, а также среди инфильтрирующих опухоль лимфоцитов и в регионарных лимфатических узлах [5, 7, 10].

Одним из механизмов функционирования CD4+CD25+-Treg-лимфоцитов является продукция этими клетками трансформирующего фактора роста ?1 (TGF?1) [3, 9, 13]. Иммуносупрессорная активность TGF?1, главным образом, связана со способностью ингибировать пролиферацию лимфоцитов, а также блокировать дифференцировку CD8+-цитотоксических клеток, CD4+-Т-хелперов 1 и 2 типа [6]. В то же время, TGF?1 может стимулировать развитие Treg-клеток из наивных CD4+CD25--лимфоцитов периферической крови и индуцировать в этих клетках экспрессию транскрипционного фактора FOXP3 (forkhead box P3), который считается наиболее специфичным из известных на сегодня маркеров Treg [4, 11, 12].

Целью настоящей работы было изучение супрессорной активности Treg-клеток по уровню экспрессии генов TGF?1, рецептора TGF?1 второго типа (TGF?RII), FOXP3, а также мембранных маркеров активации (CD25, HLA-DR, CD71) лимфоцитами периферической крови онкологических больных.

Материалы и методы

Материалом исследования служили лимфоциты периферической крови 50 онкологических больных в возрасте от 29 до 74 лет, из них 11 больных раком легкого (РЛ), 10 больных колоректальным раком (КРР), а также 29 больных с онкологическими заболеваниями желудочно-кишечного тракта, мочевыделительной, эндокринной и репродуктивной систем. В качестве контроля использовали показатели, полученные при исследовании лимфоцитов периферической крови 31 здорового донора в возрасте от 31 до 68 лет.

Для взятия проб крови использовали стерильные вакуумные пробирки, содержащие антикоагулянт K3ЭДТА в концентрации 2 мг/мл. Кровь больных в объеме 3 мл брали при первичном обследовании до начала терапии.

Определение поверхностных маркеров лимфоцитов проводили методом непрямой иммунофлюоресценции [1]. Мононуклеарные клетки крови выделяли центрифугированием на градиенте фиколла - верографина (плотность 1,077 г/см3). Иммунофенотипирование проводили с использованием моноклональных антител к молекулам CD3, CD4, CD25, CD71 и HLA-DR (ООО "Сорбент", Москва). Число клеток, на поверхности которых был экспрессирован тот или иной маркер, выражали в процентах от общего числа лимфоцитов.

Уровень экспрессии мРНК генов TGF?1, TGF?RII и FOXP3 определяли методом полимеразной цепной реакции в реальном времени, совмещенной с обратной транскрипцией (Real-Time RT-PCR) [14]. Суммарную РНК лимфоцитов выделяли из цельной крови с использованием набора реагентов "YellowSolve" (АОЗТ "Клоноген", Санкт-Петербург). Очистку препарата РНК от примесей геномной ДНК осуществляли с помощью ДНКазы (ООО "Силекс", Москва). Нативность РНК определяли методом электрофореза в агарозном геле. Процедуру обратной транскрипции проводили с использованием случайных гексапраймеров и MMLV-обратной транскриптазы (ООО "Силекс", Москва).

Амплификацию кДНК исследуемых генов, а также анализ продуктов амплификации в режиме реального времени проводили на приборе iCycler Thermal Cycler ("Bio-Rad") с использованием реакционной смеси с интеркалирующим красителем SYBR Green I (НПК "Синтол", Москва) и программного обеспечения iQ5 Optical System Software, версия 2.0 ("Bio-Rad"). Праймеры к нуклеотидным последовательностям исследуемых генов подобраны с использованием программы Beacon Designer 5.01 ("Premier Biosoft International", USA). В качестве референсного гена использовали GAPDH. Анализ данных Real-Time RT-PCR проводили методом 2-??Ct [8]. Итоговый уровень экспрессии генов TGF?1, TGF?RII и FOXP3 рассчитывали относительно контроля, принимая величину экспрессии каждого исследуемого гена в контроле за единицу.

Достоверность различий оценивали на основании критерия t Стьюдента.

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление