Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2009, № 3

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 3'2009

Признаки общего и легочного воспаления у детей первого года жизни, оперированных по поводу врожденных пороков сердца

Л.К. Романова, Л.А. Бокерия, А.В. Трепаков, Л.Ф. Макарова, Н.В. Гукасова, Р.С. Бугрилова

Для сравнительной оценки общего и местного (легочного) воспалительных ответов у детей первого года жизни, оперированных по поводу врожденных пороков сердца (ВПС), изучали концентрации провоспалительных цитокинов: интерлейкина 6 (IL-6) и интерлейкина 8 (IL-8) в сыворотке крови и трахеобронхиальных смывах (ТБС), а также клеточный состав ТБС до и после операций на сердце как с искусственным кровообращением (ИК), так и без ИК. Анализ полученных результатов показал, что уровни IL-6 и IL-8 в периферической крови детей с ВПС достоверно возрастают после операции как с использованием ИК, так и без ИК. Признаки развития воспалительной реакции в легких, в частности, достоверное повышение уровня IL-6 и увеличение числа нейтрофильных лейкоцитов в ТБС, отмечаются после операций как с ИК, так и без ИК. Воспалительная реакция в легких развивается одновременно с развитием общей воспалительной реакции и обусловливает высокий риск возникновения пневмонии в раннем послеоперационном периоде у детей 1-го года жизни; при этом непосредственными факторами риска являются как ИК, так и сама хирургическая травма. (Цитокины и воспаление. 2009. Т. 8, № 3. С. 33-37)

Ключевые слова: интерлейкин 6, интерлейкин 8, нейтрофильные лейкоциты, трахеобронхиальный смыв.

Увеличение в последние годы количества операций по коррекции сложных врожденных пороков сердца (ВПС) у детей первого года жизни обусловлено расширением возможностей ранней хирургической помощи и значительным снижением количества осложнений, связанных с применением искусственного кровообращения (ИК), искусственной вентиляции легких (ИВЛ), а также улучшением хирургической техники [1, 3, 5]. Однако все еще наблюдается значительное количество осложнений, связанных с развитием воспалительной реакции организма в ответ на проведение операций на сердце и сосудах с применением ИК, ИВЛ [8].

Одним из тяжелых осложнений, развивающихся после операции по поводу ВПС, является пневмония, частота которой, по данным зарубежных авторов, достигает в послеоперационном периоде 14% от числа прооперированных пациентов [8].

В связи с этим возникает вопрос: является ли воспаление в легких следствием развития общей воспалительной реакции (так называемой системной воспалительной реакции), или пневмония развивается как самостоятельное операционное осложнение.

Цель настоящего исследования - дать сравнительную оценку общего и местного воспалительных ответов на основании изучения концентраций провоспалительных цитокинов (IL-6 и IL-8) в сыворотке крови и трахеобронхиальном смыве (ТБС), а также клеточного состава ТБС до и после хирургического лечения сложных ВПС у новорожденных грудных детей.

Материалы и методы

Исследовали ТБС, полученные у детей первого года жизни, оперированных по поводу ВПС. Возраст пациентов варьировал от 18 до 330 дней. Масса тела составляла от 2 до 9 кг.

Общее обезболивание проводили по стандартным схемам, разработанным в НЦССХ им. А.Н. Бакулева РАМН. Премедикация за 40 мин до операции включала введение седуксена (0,5 мг/кг массы тела) и атропина (0,01 мг/кг массы тела). Вводный наркоз включал введение кетамина (4-6 мкг/кг, в/м) с дальнейшим введением фентанила (5 мкг/кг) и павулона (0,1мг/кг), в/в. Всем больным выполняли назотрахеальную интубацию трубкой без манжетки (Portex). ИВЛ проводили на аппарате Siemens KION, снабженном увлажнителем BENNETT c подогревом дыхательной смеси, смесью воздуха и кислорода при фракционном содержании последнего в дыхательной смеси Fi O2 = 0,2 – 0,4 в режиме нормовентиляции (Ра СО2 = 36 – 38 мм рт. ст.). Больным с артериальной гипоксемией и обедненным легочным кровотоком ИВЛ проводили с умеренной гипервентиляцией (Ра СО2 = 28-30 мм рт. ст.) при Fi О2 = 1,0.

Для поддержания анестезии вводили фентанил (25-30 мкг/кг) и павулон (0,1 мг/кг) с интервалом 40 мин. С целью профилактики нарушений ритма сердца при хирургических манипуляциях на фоне высокой возбудимости миокарда у младенцев применяли лидокаин в дозе 4-6 мг/кг/час. Использование фторотана было ограничено из-за его кардиодепрессивного и ганглиоблокирующего действия.

Операцию на сердце проводили в условиях ИК и без ИК. Неэндоскопический ТБС брали дважды: 1-й – через 10 мин после интубации ребенка, 2-й – после окончания операции на сердце. Для получения ТБС использовали специальную систему, состоящую из катетера и ловушки. Особенностью конструкции является наличие ловушки малого диаметра, что обеспечивает скопление анализируемого материала в основном на ее дне, а не на стенках. Это дает возможность в дальнейшем более полноценно использовать материал, поскольку облегчается перенос содержимого ловушки для последующего исследования.

В зависимости от массы тела пациента диаметр катетера варьировал от 6-8 до 10 Fr. В интубационную трубку заливали от 1 до 3 мл подогретого до +27 °С стерильного физиологического раствора, после чего подсоединяли дыхательный контур и вентилировали легкие в течение 10 сек. Затем вводили катетер и с помощью вакуумного отсоса, используя давление всасывания 5-15 kPa, аспирировали содержимое из трахеи и бронхов в ловушку. Глубина введения катетера варьировала от 10 см до 17 см в зависимости от длины интубационной трубки. В том случае, если объем полученного смыва оказывался менее 0,3 мл, процедуру повторяли.

Цитологическое исследование ТБС проводили в НИИ морфологии человека в лаборатории пульмонологии (рук. - проф. Л.К. Романова) [6]. Всего было обследовано 15 случаев. Время между забором ТБС и изучением его клеточного состава составляло не более 3 ч.

ТБС исследовали в камере Горяева после окраски 1%-ным раствором трипанового синего, при которой все нежизнеспособные клетки окрашиваются в голубой или синий цвета, а жизнеспособные остаются неокрашенными. Этот метод позволяет подсчитать: 1) общее число клеток в 1 мл ТБС, т. е. клеточность; 2) число различных клеток (альвеолярных макрофагов плюс моноцитов, лимфоцитов, нейтрофильных лейкоцитов) в 1 мл; 3) число жизнеспособных и нежизнеспособных альвеолярных макрофагов и моноцитов.

Одновременно с исследованием ТБС в камере Горяева готовили также монослойные цитологические препараты по оригинальной методике [7]. Перед приготовлением монослойных цитологических препаратов ТБС не центрифугировали. Препараты красили по Романовскому - Гимза. В каждом случае для составления эндопульмональной цитограммы (процентное соотношение различных клеточных элементов внутренней среды легких и воздухоносных путей) просматривали 100-500 клеток при увеличении ´1200 (иммерсия). Термин «эндопульмональная цитограмма» (ЭПЦ) впервые был предложен в 1982 г. А.П. Авцыным, Г.И. Лукомским, Л.К. Романовой и др. [2]. При составлении ЭПЦ учитывали альвеолярные макрофаги, моноциты, лимфоциты, нейтрофильные лейкоциты. Клетки бронхиального эпителия и эритроциты в ЭПЦ не включали.

Степень деструкции альвеолярных макрофагов оценивали количественно, выражая в процентах (%) число нежизнеспособных и жизнеспособных клеток.

Для исследования в ТБС уровней цитокинов IL-6 и IL-8 (13 случаев) полученный смыв выдерживали при комнатной температуре в течение 30 мин. При этом в пробирку с ТБС добавляли 1,5 мл физиологического раствора комнатной температуры. ТБС центрифугировали при 400 g в течение 15 мин. Пробирку с ТБС помещали в морозильную камеру с t = -25 °C. В таком виде пробирка с ТБС хранилась до проведения иммуноферментного анализа.

Кровь (18 случаев) для определения содержания в ней цитокинов брали дважды: сразу после постановки канюли для прямого измерения артериального давления и спустя 5 мин после удаления аортальной канюли. Кровь в объеме 2 мл набирали из лучевой или локтевой артерий с помощью шприца объемом 2 мл. Затем пробу крови центрифугировали при 400 g в течение 15 мин. Полученную сыворотку отбирали с помощью автоматической пипетки и переливали в стерильную пробирку. Объем пробы составлял 500 мкл. Пробу помещали в морозильную камеру и хранили при t = -25 °C до проведения иммуноферментного анализа. Определение уровней IL-6 и IL-8 в сыворотке крови и в жидкой фракции ТБС детей проводили в лаборатории пульмонологии НИИ морфологии человека РАМН с использованием тест-системы ООО «Цитокин» (Санкт-Петербург) твердофазным иммуноферментным методом.

Использовали данные общего анализа крови, полученные при микроскопии мазка путем стандартного подсчета клеток крови в камере Горяева.

Статистический анализ полученных данных проводили с использованием пакета программ Statistica 6.0 (Statsoft).

Распределение данных с числом наблюдений более 20 оценивали по тесту Lilliefors, с числом наблюдений менее 20 – по критерию Shapiro – Wilks. Распределение считали нормальным или близким к нормальному при значениях Lilliefors p > 0,2 и Shapiro – Wilks p > 0,1. Для параметрических данных определяли среднее арифметическое ± стандартное отклонение, минимум и максимум вариационного ряда. Для непараметрических количественных данных вычисляли среднее, минимум и максимум вариационного ряда, для качественных признаков – долю.

Для выявления и оценки характера связи между признаками с нормальным распределением использовали регрессионный анализ и коэффициент корреляции Пирсона, для непараметрических данных – коэффициенты корреляции Спирмена и Кендалла.

Для выявления различий в группах с количественными параметрическими данными применяли t-test. Непараметрические данные анализировали с помощью критериев Манна – Уитни и Крускала - Уоллиса; для оценки повторных измерений применяли критерий Уилкоксона и дисперсионный анализ Фридмана. Достоверными считали различия при р<0,05.

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление