Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер 2 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2009, № 3

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 3'2009

Тучные клетки как мишень антивоспалительного действия активированного протеина C

А.В. Русанова, Т.В. Васильева, М.Д. Смирнов, С.М. Струкова

Функции активированного протеина C (АРС), как модулятора воспаления, реализуются через рецептор, активируемый протеазой 1 (PAR1) на клетках эндотелия, моноцитах и других клетках. Некоторые из этих эффектов могут быть вызваны регуляцией АРС активности тучных клеток. Чтобы характеризовать влияние АРС на дегрануляцию перитонеальных тучных клеток крысы (ПТК) в ответ на агонисты, такие как тромбин и вещество 48/80, было исследовано действие АРС на секрецию гистамина. АРС (0,1-1 нМ) снижал освобождение гистамина из ПТК, активированных спонтанно, веществом 48/80 или тромбином (50-100 нМ). Вызванное АРС протективное действие на активированные ПТК опосредовано через PAR1, как доказано с помощью блокады PAR1 антагонистами (Mpr(Cha) (0,1 мкМ), SCH 79797 (0,2 мкМ)). Показано, что профилактическое внутрибрюшинное введение АРС (0,1 нМ) стабилизирует ПТК у крыс с иммобилизационным стрессом, блокируя освобождение медиаторов воспаления (гистамина и b-гексозаминидазы). Выявлено противовоспалительное и ранозаживляющее действие АРС на модели экспериментальной язвы желудка у крыс. АРС ускоряет заживление язвы желудка у крыс, сдвигая фазу пролиферации на более ранние сроки. Таким образом, показано, что АРС стабилизирует тучные клетки крыс in vitro и in vivo и также проявляет антиульцерогенное действие. (Цитокины и воспаление. 2009. Т. 8, № 3. С. 48-53.)

Ключевые слова: воспаление, тучные клетки, репарация тканей, активированный протеин C, рецептор, активируемый протеиназой.

Активированный протеин C (АРС) – антикоагулянтная сериновая протеиназа, которая образуется из протеина С (РС) при действии тромбина и блокирует его образование по механизму отрицательной обратной регуляции, инактивируя факторы Va и VIIIa свертывания крови [5]. Тромбин, взаимодействуя с рецептором эндотелия – тромбомодулином, превращает профермент PC, связанный с эндотелиальным рецептором РС (EPCR), в протеиназу АРС [3, 5]. Кроме антикоагулянтной активности у АРС обнаружены противовоспалительные свойства в условиях in vitro (на клетках эндотелия, лейкоцитах, кератоноцитах и др.) и in vivo (сепсис, пневмония и др.) [13, 14]. Эти защитные свойства АРС обусловлены его способностью ингибировать экспрессию провоспалительных цитокинов, адгезивных молекул, предотвращать адгезию лейкоцитов и снижать гибель пациентов с тяжелым сепсисом [5, 7, 14]. АРС, ингибируя образование TNFα и адгезию лейкоцитов, супрессирует воспалительный ответ клеток эндотелия микрососудов кишечника in vitro, а также in vivo в модели эрозии желудка у крыс [8] и при экспериментальных колитах [11]. Действие АРС на клетки реализуется благодаря взаимодействию с рецепторами эндотелия EPCR и PAR1 [10]. Ранее нами показано, что пептид-агонист PAR1 (PAR1-АР) ускоряет заживление экспериментальной язвы желудка у крыс и кожных ран (у мышей и крыс) [2, 3]. Однако нет данных о влиянии АРС на перитонеальные тучные клетки (ПТК) крыс при стрессорном воздействии и репарации тканей при ацетатной язве желудка. Ранее было показано, что PAR1-АР способен освобождать медиатор воспаления гистамин из ПТК [4]. Вопрос о влиянии АРС на секрецию гистамина ПТК остается открытым, хотя есть данные о регуляции ферментом освобождения b-гексозаминидазы из ПТК, активированных спонтанно или веществом 48/80 [1].

Целью настоящей работы было исследование влияния АРС на освобождение гистамина ПТК в норме и при иммобилизационном стрессе, а также действия АРС на процесс репарации ткани в модели ацетатной язвы желудка у крыс.

Материалы и методы

В работе использованы самцы беспородных крыс весом 200-350 г. Эксперименты на животных выполняли в соответствии с этическими принципами и нормативными документами, рекомендованными Европейским научным фондом (ESF) и Хельсинской декларацией о гуманном отношении к животным. В работе использовали: АРС (Chromogenix и Sigma); плюроник F-127 (Sigma), тромбин (Human, Bovine) (Sigma), антагонисты PAR1-рецептора тромбина – Mpr(Cha) (Mercaptopropionyl-F(Cha-Cha)RKPNDK-NH2) и SCH 79797 (N3-cyclopropyl-7-[[4-(1-methylethyl)phenyl]methyl]-7H-pyrrolo[3, 2-f]quinazoline-1,3-diamine). Определяли амидазную активность APC и тромбина по отношению к хромогенным субстратам S2366 (pyroGlu-Pro-Arg-pNA) и S2238 (H-D-Phe-Pip-Arg-pNA) (Chromogenix) и антикоагулянтную активность АРС по удлинению частичного тромбопластинового времени (АЧТВ) свертывания плазмы крови человека.

Метод определения секреции гистамина ПТК крыс. Выделяли тучные клетки из перитонеальной полости крыс (n=200) и исследовали их секреторную активность по освобождению гистамина. ПТК инкубировали с определенными концентрациями АРС, антагонистов PAR1 (Mpr(Cha), SCH 79797) (10 мин при 37 °С), и добавляли либо активатор – вещество 48/80 (200 мкг/мл), либо буфер (HEPES-NaCl, содержащий 10 мM NaCl, 5 мM KCl, 1 мM CaCl2, 1 мM MgCl2, 5 мM глюкозы, рН 7,4), либо тромбин в высоких концентрациях (10–100 нМ). Содержание гистамина определяли флуориметрически с ортофталевым альдегидом (Sigma) на Fluoroskan Ascent (США) [12] и вычисляли % секреции гистамина по формуле А/(А+В)´100 %, где А – содержание медиатора в надосадочной жидкости, В – в осадке.

Модель иммобилизационного стресса. Крысам (n=48) внутрибрюшинно вводили АРС (Chromogenix) (0,02 мкг/кг; 0,1 нМ АРС) и через 30 мин у животных вызывали стресс иммобилизацией в течение 1 часа. Далее выделяли ПТК и исследовали их секреторную активность по освобождению гистамина (см. выше) и β-гексозаминидазы (по расщеплению субстрата р-нитрофенил-N-ацетил-b-D-глюкозаминида (Sigma)).

Модель ацетатной язвы желудка. Готовили композицию, содержащую 0,2 нM АРС (0,004 мкг АРС/300 мкл геля) в геле неионного поверхностно-активного вещества (ПАВ) плюроника F-127, в концентрации 30 % (по весу). Эксперименты по заживлению язвы проводили на крысах массой 200-250 г (n=24), используя метод Okabe et al. [9]. Животным под эфирным наркозом апплицировали ледяную уксусную кислоту на серозную оболочку желудка. Через 2 часа после операции опытным животным (n=12) в желудок через зонд вводили композицию, содержащую АРС. Контрольным животным вводили плюроник в физиологическом растворе (n=12). Критериями оценки заживления язвы были относительная площадь язвы и параметры морфометрического анализа образцов грануляционной ткани желудка в области язвы, взятых на 3 и 7 сутки опыта. Гистологические срезы ткани желудка окрашивали гематоксилином и эозином. Интенсивность репаративного процесса в подслизистом слое желудка оценивали по процентному содержанию макрофагов, нейтрофилов и эозинофилов (маркеров воспаления) и фибробластов (маркера пролиферации).

Статистическую обработку данных проводили в парных выборках, используя t-критерий Стьюдента.

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление