Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер 2 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2009, № 4

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Врачу общей практики

Номер 4'2009

Оценка противовоспалительного действия лекарственных препаратов на основе шалфея

К.Л. Крышень, С.И.Гусева, С.В. Тесакова, А.А. Ацапкина,

Для исследования противовоспалительной активности лекарственных препаратов на основе шалфея лекарственного использованы модели каррагенинового воздушного мешочка и острого лимфаденита у крыс. В результате эксперимента установлена выраженная противовоспалительная и противоотечная активность всех исследованных препаратов шалфея. Предложен возможный механизм противовоспалительной активности препаратов путем блокирования NF-kB-зависимого сигнального пути. По результатам морфометрического анализа лимфатических узлов крыс выявлена иммуностимулирующая активность препарата «Шалфей Иммунактив», обусловленная наличием в нем дополнительного активного компонента - экстракта эхинацеи узколистной. (Цитокины и воспаление. 2009. Т. 8, № 4. С.     .)

Ключевые слова: шалфей, воспаление, воздушный мешочек, острый лимфаденит, λ-каррагенин.

Острые респираторные заболевания являются наиболее распространенными трансмиссивными болезнями XXI века и нередко приобретают характер эпидемического процесса [12]. Данная группа заболеваний часто встречается у детей. При неправильном лечении инфекционно-воспалительных поражений верхних дыхательных путей возможно развитие различных бактериальных осложнений. Поэтому назначение на ранней стадии болезни низкотоксичного лекарственного фитопрепарата, обладающего противовоспалительными и иммуномодулирующими свойствами, позволяет добиться излечения уже на начальном этапе, не вызывая побочных эффектов и позволяя избежать антибактериальной терапии.

Препараты на основе шалфея лекарственного широко известны и длительное время применяются для лечения заболеваний различного генеза. Противовоспалительные и антимикробные свойства шалфея связаны с содержанием в его листьях дубильных и флавоноидных соединений, а также с присутствием в надземной части растения эфирного масла и витаминов Р и PP. Антимикробная активность растения наиболее выражена по отношению к грамположительным штаммам бактерий и, в меньшей степени, к грамотрицательным штаммам микроорганизмов. Противовоспалительный эффект шалфея обусловлен снижением проницаемости стенок сосудов и капилляров, а также наличием у растения кровоостанавливающих свойств. Совокупность этих свойств значительно потенцирует общее воздействие растения на основные звенья воспалительного процесса [2].

Целью настоящего исследования явилась сравнительная оценка влияния фитопрепаратов на основе шалфея лекарственного на патогенез острого воспалительного процесса на модели каррагенинового воздушного мешочка и специфической активности препаратов на модели острого лимфаденита у крыс.

Материалы и методы

1.1. Исследуемые препараты

1. «Шалфей», таблетки для рассасывания производства Натур Продукт Европа Б.В., Нидерланды (ШНП). Активные вещества: экстракт шалфея лекарственного - 12,5 мг; эфирное масло шалфея - 2,5 мг.

2. «Доктор Тайсс экстракт шалфея с витамином С», таблетки для рассасывания, производства Др. Тайсс Натурварен ГмбХ, Германия (ШТ). Состав: экстракт шалфея лекарственного - 50,0 мг, эфирное масло шалфея - 6,0 мг, аскорбиновая кислота - 20,0 мг.

3. «Шалфей Иммунактив», таблетки для рассасывания (ШИ), - новый лекарственный препарат, разработанный компанией Натур Продукт Европа Б.В. Активные компоненты препарата: экстракт шалфея лекарственного - 12,5 мг, эфирное масло шалфея лекарственного - 2,5 мг, экстракт эхинацеи узколистной - 50,0 мг, аскорбиновая кислота - 50,0 мг.

1.2. Способ введения и выбор доз

Для изучения противовоспалительной активности на модели каррагенинового воздушного мешочка у крыс препараты ШИ и ШТ вводили однократно в объеме 2 мл внутрижелудочно. Контрольной группе животных вводили дистиллированную воду в объеме 2 мл внутрижелудочно. Поскольку данная модель отражает острый воспалительный процесс и предполагает однократное введение препаратов, для эксперимента были выбраны высокие дозы ШТ и ШНП - 50 мг/кг.

В качестве метода введения препаратов на модели острого лимфаденита у крыс использовали орошение ротовой полости животных растворами препаратов, которое соответствует способу применения препарата, предусмотренному для клинической практики. Контрольной группе животных вводили дистиллированную воду в объеме 2 мл внутрижелудочно. Препараты ШТ и ШИ исследовали в терапевтических дозах, рассчитанных, исходя из действующего вещества экстракта шалфея лекарственного с учетом последних данных массы тела животных и метаболического коэффициента для крысы. Терапевтическая доза препарата ШТ для крысы составила 16 мг/кг, ШИ - 6 мг/кг.

Для приготовления растворов требуемой концентрации таблетки ШТ, ШИ и ШНП измельчали и растворяли в дистиллированной воде.

1.3. Животные

Для исследования противовоспалительных свойств препаратов на модели каррагенинового воздушного мешочка использовали самцов крыс породы Wistar, масса которых к началу исследования составляла 120-150 г. В модели острого лимфаденита использовали самок крыс породы Wistar массой к началу исследования 150-200 г.

Животные были получены из питомника лабораторных животных РАМН «Рапполово» и распределены по группам методом рандомизации. Животных содержали в стандартных условиях в соответствии с правилами, утвержденными МЗ СССР 06.07.73 г., и в соответствии с Директивой Совета ЕС от 24.11.1986 г. по вопросам защиты животных, используемых для экспериментальных и других научных целей (86/609/ЕЕС), в клетках Charles River Laboratories Inc (USA), тип 3H, по 5 особей в каждой, при температуре 18-22 °С, 12 ч - свет, 12 ч - темнота. Был установлен режим проветривания, обеспечивающий около 15 объемов помещения в час, концентрацию CO2 не более 0,15 объемных %, аммиака - не более 0,001 мг/л. Животные получали стандартный пищевой рацион (ПК-120-1) и воду, соответствующую ГОСТу «Вода питьевая» 2874-82. Эксперименты проводили согласно протоколу испытаний, который был одобрен комитетом по этике ЗАО «Санкт-Петербургский Институт Фармации».

1.4. Дизайн исследования

Модель каррагенинового воздушного мешочка у крыс

Дизайн исследования выполнен в соответствии с Current Protocols in Pharmacology, Models of inflammation: Carrageenan Air Pouch in the rat [11]. Для формирования воздушного мешочка за 6 дней до начала лечения крыс помещали в СО2-камеру для анестезии на 30 секунд. Стерильным шприцем вводили 15 мл воздуха подкожно во внутрикапсульную область спины крысы. Спустя 3 дня вводили 7,5 мл воздуха в то же место для поддержания целостности воздушного мешочка без увеличения раны. С целью индукции воспалительной реакции на 6-й день под анестезией СО2 животным опытных и контрольной групп вводили 3 мл 0,5% водного раствора каррагенина (Fluka) непосредственно внутрь воздушного мешочка. Животным интактной группы подкожно вводили 3 мл физиологического раствора.

Исследуемые препараты вводили животным опытных групп сразу же после инъекции каррагенина однократно внутрижелудочно в объеме 2 мл. Животным интактной и контрольной групп вводили по 2 мл дистиллированной воды.

Через 6 ч после инъекции животных подвергали эвтаназии в СО2-камере. Сразу же после эвтаназии внутрь мешочка вводили 10 мл физиологического раствора. После легкого массажа области воздушного мешочка производили сагиттальный разрез, через который отбирали экссудат в стерильные пробирки объемом 15 мл. В экссудате подсчитывали процентное содержание нейтрофилов и производили оценку содержания в нем TNFα.

Модель острого лимфаденита у крыс

С целью получения адекватной модели, сопоставимой с острым тонзиллитом у человека, каррагенин вводили непосредственно в верхний правый лимфатический узел (ЛУ) шеи крысы (nodus lymphaticus cervicalis superficialis) - пораженный ЛУ.

После наступления наркоза крысу укладывали на операционный столик и выполняли разрез на шее в проекции ЛУ справа. Животным опытных и контрольной групп в ЛУ вводили 20 мкл 1%-ного раствора каррагенина (Fluka). ЛУ заправляли под поверхностные мышцы шеи и ушивали кожу. Рану обрабатывали стрептоцидом.

Растворы препаратов вводили методом орошения ротовой полости животных один раз в сутки, на протяжении 10-ти дней до индукции воспаления ЛУ и 3 дня после. Животным интактной и контрольной групп вводили дистиллированную воду.

Для оценки противовоспалительной активности препаратов через 72 ч после индукции острого лимфаденита животных эвтаназировали. Исследовали следующие показатели: С-реактивный белок (СРБ) в плазме крови, количество лейкоцитов в крови, разницу массы пораженного и интактного ЛУ, осуществляли морфологический анализ пораженных ЛУ. Содержание TNFα в крови из хвостовой вены крыс, определяли через 4 ч после оперативного вмешательства.

1.5. Методы оценки противовоспалительной активности препаратов

Анализ клеточного состава экссудата проводили в мазках, окрашенных по Романовскому - Гимза. Препараты исследовали при 400-кратном увеличении с использованием иммерсионного объектива (ЛОМО, Россия).

Концентрацию TNFα в собранном экссудате и плазме крови измеряли твердофазным иммуноферментным методом с использованием коммерческого набора «Rat TNF-α BD Biosciences» (USA). Интенсивность цветной ферментативной реакции, прямо пропорционально зависевшей от концентрации TNFα в опытных образцах, определяли при длине волны 450 нм на иммуноферментном анализаторе HTI Immunochem (USA). Анализ проводили в соответствии с инструкцией производителя тест-системы (BD Biosciences, USA).

Оценку содержания СРБ в плазме крови осуществляли иммунотурбидиметрическим методом в сыворотке крови с помощью набора реагентов «Витал Диагностикс СПб» (Россия) на биохимическом фотометре Stat Fax 1904 Plus (USA).

Оценку содержания лейкоцитов в цельной крови проводили с помощью автоматического ветеринарного гематологического анализатора Abacus Junior Vet. (Diatron, Австрия). Линейность методики обеспечивалась до 15´1012 клеток/л, воспроизводимость составляла более 97%, погрешность между пробами была менее 1%.

ЛУ замораживали в морозильной камере при температуре -25 °С в течение 72 ч, затем сушили в лиофильной сушилке Alpha 1-2 LDplus (Германия).

Для определения разницы в массе интактный и пораженный ЛУ от каждого экспериментального животного фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина в течение 24 ч, проводили стандартную обработку в спиртах нарастающей концентрации (70-95%), ксилоле и парафине, готовили гистологические препараты с толщиной серийных парафиновых срезов 5-7 мкм.

Для микроскопического и морфометрического исследования срезы окрашивали гематоксилином и эозином. Исследование гистологических препаратов проводили при помощи светооптического микроскопа Leica DM LS (Германия) при увеличении микроскопа ´200 и ´400. Микрофотографирование осуществляли цифровой фотокамерой Leica DC320 (Германия).

Проводили сравнительную гистологическую и морфометрическую оценку влияния изучаемых препаратов на стимуляцию макрофагов, гистиоцитов и В-лимфоцитов пораженных и интактных (контралатеральных) ЛУ шеи крыс. Для этого была оценена cтруктура ЛУ, диаметр герминативных центров (ДГЦ) вторичных фолликулов и гистиоцитоз синусов, то есть содержание гистиоцитов и макрофагов в синусах по периметру ЛУ. Гистиоцитоз оценивали полуколичественно: 1 балл - до 1/3 периметра синусов, 2 балла - от 1/3 до 2/3 периметра синусов, 3 балла - более 2/3 периметра синусов.

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление