Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер 2 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2009, № 4

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 4'2009

Провоспалительные цитокины и регуляторы их активности у больных раком желудочно-кишечного тракта

А.И. Аутеншлюс, А.В. Соснина, Е.С. Михайлова, А.П. Лыков, Д.В. Морозов, Н.В. Великая, С.А. Фурсов, Н.А. Вараксин

Исследование посвящено изучению взаимосвязи между цитокинами, регуляторами их активности и патогистологическими параметрами опухолей при раке желудочно-кишечного тракта. В сыворотке крови определяли содержание провоспалительных цитокинов, антител к ним, а также IL-1Ra и IL-18BP. В супернатантах клеток цельной крови при стимуляции ФГА и опухолеассоциированными антигенами определяли содержание TNFα, IL-1β, IL-18, IL-18BP, IFNα и IFNγ. У больных по сравнению со здоровыми отмечались более высокие уровни TNFα, IL-1β, IL-1Ra, IFNγ, IgG4 к TNFα и более низкие - IFNα, IgM и IgG1 к TNFα; происходило увеличение продукции IL-1β в ответ на стимуляцию опухолеассоциированными антигенами (ОАА). Прямые корреляционные связи были отмечены между содержанием TNFα, уровнем IgG2 к TNFα и степенью васкуляризации опухоли, соотношением содержания TNFα и уровня IgG1 к нему и глубиной инвазии, а обратные - между уровнями IgG2 и IgG3 к TNFα и содержанием низкодифференцированных клеток в опухоли, между содержанием IL-18BP, индексом влияния ОАА на продукцию клетками цельной крови IL-1β и числом пораженных метастазами лимфоузлов, индексом влияния ФГА на продукцию клетками цельной крови IFNα и инфильтрацией опухоли лимфоцитами. Результаты исследования показали, что механизмы гомеостаза направлены на сохранение опухоли и обеспечение ее дальнейшего прогрессирования. (Цитокины и воспаление. 2008. Т. 8, № 4. С.    .)

Ключевые слова: цитокины, антитела, рак желудочно-кишечного тракта.

В настоящее время известны различные пути регуляции активности цитокинов. Например, рецепторные антагонисты, такие как IL-1Ra, препятствуя связыванию цитокинов с рецепторами на мембранах клеток-мишеней, блокируют их биологические эффекты [5], а антитела к цитокинам, в частности к IL-1, IL-2, IL-8, TNFα, VEGF, G-CSF, IL-4, IL-6, IL-10 и интерферонам, выявленные как в норме, так и при патологии, могут полностью отменять действие медиаторов воспаления (нейтрализующие антитела), а также осуществлять их транспортировку к клеткам-мишеням [9, 13]. Это же касается и связывающего IL-18 белка (IL-18BP), который, как известно, способен, подобно иммуноглобулинам, высокоаффинно соединяться с цитокином, ингибируя его эффект [11]. Таким образом, изучение цитокинов и регуляторов их функциональной активности при различных патологических состояниях, в частности, при злокачественных новообразованиях, является актуальным, так как даст возможность понять роль этих взаимосвязанных между собой компонентов гомеостаза в опухолевой прогрессии.

Целью настоящего исследования явилось изучение характера взаимосвязи между цитокинами, регуляторами их активности и патогистологическими параметрами опухолей у больных раком желудочно-кишечного тракта.

Материалы и методы

Материалом исследования служили периферическая кровь и резецированные опухоли 81 больного раком желудочно-кишечного тракта (аденокарциномы желудка, толстого кишечника и прямой кишки) (I группа), периферическая кровь 51 условно здоровых лиц без злокачественных новообразований в анамнезе и без обострения хронических инфекционно-воспалительных заболеваний (II группа, контроль).

Для определения содержания цитокинов в супернатанте клетки цельной крови разводили 1:5 полной посадочной средой (среда RPMI 1640, 0,3 мг/мл L-глутамина, 3 мМ буфера Hepes и 100 мкг/мл гентамицина). Клетки инкубировали в CO2-инкубаторе при температуре 37 °С в течение 24 ч в присутствии ФГА в дозе 20 мкг/мл (неспецифическая стимуляция), опухолеассоциированных антигенов (ОАА) в дозе 300 мкг/мл (специфическая стимуляция) и без митогена и антигенов (спонтанная продукция). В качестве ОАА использовали фетальные протеины в изотоническом растворе хлорида натрия, содержащем раковоэмбриональный антиген - 84 МЕ/мл, хорионический гонадотропин человека - 170 МЕ/мл, нейроспецифическую энолазу - 1,35 МЕ/мл, углеводные антигены СА-19-9 - 144 МЕ/мл и СА 125 - 512 МЕ/мл, альфа-фетопротеин - 172 МЕ/мл и микроглобулин человека - 4 МЕ/мл.

Индекс влияния (ИВ) при стимуляции клеток ФГА и ОАА высчитывали по формуле: ИВ = Б/А, где А - уровень спонтанной продукции цитокина, Б - уровень стимулированной продукции цитокина [2].

В сыворотке крови и супернатанте клеток цельной крови определяли содержание TNFα, IL-1β, IL-1Ra, IL-18, IFNα и IFNγ с помощью твердофазного иммуноферментного анализа с использованием наборов реагентов производства ЗАО «Вектор-Бест» (п. Кольцово Новосибирской области). Определение связывающего IL-18 белка (IL-18BP) проводили с помощью набора фирмы R&D Systems. Уровень рецепторного антагониста IL-1Ra определяли с помощью набора «Рецепторный антагонист ИЛ-1-ИФА-БЕСТ» только в сыворотке крови.

Определение антител классов IgG, IgM, IgA и субклассов IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 к TNFα, класса IgG и субклассов IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 к IFNα, классов IgG и IgM к IFNγ проводили по технологии, разработанной в лаборатории физико-химической индикации иммунных процессов НИИ молекулярной биологии и биофизики СО РАМН. Использовали моноклональные антитела, меченные пероксидазой хрена, производства ООО «Полигност», Санкт-Петербург. Уровни антител определяли по коэффициенту К, который представлял собой отношение величины оптической плотности продукта реакции опытной сыворотки к величине оптической плотности продукта реакции контрольной (серонегативной) сыворотки, последняя представляла собой лабораторный пул образцов здоровых лиц. К выражали в условных единицах [1].

Для характеристики соотношения между уровнями цитокинов и регуляторов их биологического эффекта был введен показатель, отражающий их баланс (ПБ), выраженный в условных единицах. ПБ = уровень цитокина / уровень его регулятора.

Патогистологическую картину опухоли характеризовали в баллах по следующим параметрам: опухолевые клетки в сосудах: опухолевых клеток нет - 1 балл, наличие опухолевых клеток сомнительно - 2 балла, единичные клетки опухоли - 3 балла, много клеток - 4 балла; инфильтрация опухоли лимфоцитами: слабая - 1 балл, умеренная - 2 балла, выраженная - 3 балла; инфильтрация опухоли макрофагами: слабая - 2 балла, умеренная - 3 балла, выраженная - 4 балла; митозы в поле зрения: отсутствуют - 1 балл, единичные - 2 балла, 2-3 митоза - 3 балла, 4-5 митозов - 4 балла, 6-10 митозов - 5 баллов, более 10 митозов - 6 баллов; патологические митозы в поле зрения: отсутствуют - 1 балл, единичные - 2 балла, в большом количестве - 3 балла; относительное содержание в опухоли (%) высокодифференцированных, умеренно дифференцированных и низкодифференцированных клеток; вариант гистологической дифференцировки опухоли: высокодифференцированная аденокарцинома - 1 балл, умеренно дифференцированная аденокарцинома - 2 балла, низкодифференцированная аденокарцинома - 3 балла; глубина инвазии: в пределах слизистой - 1 балл, подслизистого слоя - 2 балла, начальных мышечных слоев - 3 балла, средних мышечных слоев - 4 балла, глубоких мышечных слоев - 5 баллов, всех слоев, включая серозную оболочку, - 6 баллов; степень васкуляризации: слабая - 1 балл, умеренная - 2 балла, выраженная - 3 балла; метастазы в регионарные лимфоузлы: нет - 1 балл, одной группы лимфоузлов - 2 балла, двух групп - 3 балла, трех групп - 4 балла, четырех групп - 5 баллов и т. д.

Статистическую обработку данных проводили с использованием методов непараметрического анализа, в связи с ненормальным распределением значений изученных показателей (тест Колмогорова - Смирнова). Результаты, представленные в таблицах, даны в виде медиан (25; 75 процентилей). Для выявления взаимосвязи переменных проводили расчет коэффициента ранговой корреляции по Спирмену (r). Для статистической обработки данных применяли программу Statistica 6.0.

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление