Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер 2 номер
3 номер 4 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2010, № 2

Подписаться на 2018 год

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Врачу общей практики

Номер 2'2010

Биомаркеры воспаления у детей с обструктивными уропатиями

Д.А. Морозов, А.А. Свистунов, О.Л. Морозова, Н.Б. Захарова, Б.В. Долгов, Ф.К. Напольников, Н.К. Шахпазян, Д.Ю. Лакомова

Изучен цитокиновый профиль (IL-1β, IL-6,IL-8, TNFα, IL-4, IL-10) сыворотки крови и мочи иммуноферментым методом с помощью тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (г. Новосибирск) у 80 детей с различными вариантами обструктивных уропатий. Получено, что даже при отсутствии клинических проявлений хронического обструктивного пиелонефрита имеются достоверные изменения цитокинового профиля, при обострении заболевания отмечается дисбаланс цитокинов с преобладанием провоспалительных фракций. Мониторирование цитокинов мочи – перспективный неинвазивный метод оценки воспалительного процесса в мочевыводящих путях. (Цитокины и воспаление. 2010. Т. 9, № 2. С. .)

Ключевые слова: цитокины, обструктивные уропатии, дети.

Несмотря на значимые успехи в пренатальной и ранней диагностике обструктивных уропатий (ОУ), внедрение новых высокотехнологичных методов их эндоскопической коррекции, до настоящего времени остаются нерешенными вопросы инициации воспалительного процесса и фибросклероза почечной паренхимы на фоне данной патологии [5]. Перед клиницистами зачастую встает вопрос, почему при одном и том же виде обструкции мочевыводящих путей у одних детей функция почек после коррекции довольно быстро восстанавливается, а у других продолжает прогрессивно снижаться вплоть до развития хронической почечной недостаточности [6].

Экспериментальными и клиническими исследованиями последних лет установлена ведущая роль цитокинов в развитии и прогрессировании ОУ у детей [2, 7, 8]. Интерес исследователей вызывают цитокины и факторы роста, которые являются ключевыми в течение эмбрионального развития и постнатального роста тканей, контролирующими процессы клеточной пролиферации, дифференцировки, апоптоза, участвующими в процессах воспаления и регенерации тканей [1, 9].

Развитие туболоинтерстициального фиброза почечной паренхимы является закономерным исходом хронического воспалительного процесса в мочевыделительной системе, возникающего на фоне нарушения уродинамики функционального или органического генеза, ремоделирования почечного кровотока, присоединения ишемического и инфекционного повреждающих факторов [6, 8]. Парциальная или тотальная обструкция мочеточника приводит с одной стороны к повышению внутрикапсулярного давления и снижению эффективного фильтрационного давления в клубочках почек, с другой стороны, к редукции и перераспределению почечного кровотока. В условиях ишемии почечной паренхимы активируется ренин-ангиотензиновая система с последующим формированием вазоренальной гипертензии, а также происходит альтерация различных структурных элементов нефрона. Вслед за первичной альтерацией следует выброс гуморальных и клеточных медиаторов воспаления, в том числе и цитокинов, факторов роста и неоваскуляризации. Длительность и выраженность стадии альтерации предопределяет вектор развития воспалительного процесса в почечной паренхиме [8, 10].

Однако до настоящего времени недостаточно изучена степень участия этих биологических маркеров в развитии и прогрессировании поражения почек при ОУ у детей [3, 12]. Отсутствуют данные о мониторировании активности хронического обструктивного пиелонефрита (ХОП) при различных вариантах патологии на основании анализа цитокинового профиля крови и мочи.

Целью нашего исследования стало изучение цитокинового профиля крови и мочи у детей с различными вариантами ОУ, определение диагностической значимости различных цитокинов в оценке степени выраженности воспалительного процесса в мочевыводящих путях.

Материалы и методы

Изучен цитокиновый профиль (IL-1β, IL-6, IL-8,TNFα, IL-4, IL-10) у 80 детей с обструктивными уропатиями (ОУ). В зависимости от уровня обструкции мочевыводящих путей все больные были разделены на две группы: в 1-ю группу вошли 40 детей с гидронефрозом (обструкция пиелоуретерального сегмента), 2-ю группу составили 40 детей с пузырно-мочеточниковым рефлюксом (ПМР). В 1-й группе больных коррекция обструктивного синдрома проводилась путем ревизии пиелоуретерального сегмента по методике Хайнца — Андерсона — Кучера. Во 2-й группе эндоскопическую коррекцию устья мочеточника проводили: по методике subureteral trunsureteral injection (STING) 16 пациентам, hydrodistention implantation technique (HIT) — 14, implantation periurethral trunspositional (IPT) — 10. Коррекцию ПМР по методике STING выполняли при ПМР 2–3-й степени преимущественно у детей до 2 лет, методики HIT и IPT использовали при ПМР 3–4-й степени. Эндоскопическая коррекция путем эндоимплантации биостабильного препарата ДАМ+ выполнена у 26 больных с ПМР (65%) и биодеградируемого препарата коллаген — у 14 больных с ПМР. Средний возраст больных в обеих группах составил 5,1+4,6 года. Группу контроля составили 20 детей с малой хирургической патологией (пупочной или паховой грыжей) в предоперационном периоде, стратифицированных по возрасту и полу.

Констатацию ОУ производили на основании стандартного рентгеноурологического обследования (экскреторной урографии и микционной цистоуретерографии) и ультразвукового исследования с допплерографией. В случае необходимости дополнительно проводили нефросцинтиграфию с целью динамической оценки экскреторной функции почек.

В зависимости от наличия клинических проявлений ХОП больные внутри каждой группы были разделены на две подгруппы. В подгруппу А входили пациенты в стадии ремиссии ХОП (атаки пиелонефрита в анамнезе), в подгруппу Б отнесены дети, у которых произошло обострение ХОП с характерной клинической картиной (лихорадкой, лейкоцитозом, бактериурией, пиурией), потребовавшее оперативного вмешательства.

Всем пациентам исследуемых групп и группы сравнения было выполнено количественное определение цитокинов в образцах сыворотки крови и мочи твердофазным иммуноферментным методом с помощью тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (г. Новосибирск) (IL-1β, IL-6, IL-8, TNFa, IL-4, IL-10) на иммуноферментном анализаторе Stat Fax 2010 (Stat Fax, USA).

Забор крови и мочи для анализа проводили при поступлении с целью оценки исходного уровня активности воспалительного процесса. Кровь для получения сыворотки брали в утренние часы до приема пищи из подкожных вен локтевого сгиба. Для сбора крови и получения сыворотки использовали систему Vacutainer, состоящую из стерильной двусторонней полой иглы для забора венозной крови, пластикового фиксатора для иглы и вакуумной пробирки Vacutette объемом 4 мл с активатором коагуляции. Свернувшуюся кровь центрифугировали в течение 15 минут при 3000 об/мин (центрифуга ЦЛМН-Р10-01-«Элекон»). Полученную сыворотку разливали на аликвоты по 0,5 мл в полипропиленовые пробирки «Эппендорф» (Германия), замораживали и хранили при –18 °С до проведения исследования, но не более трех месяцев. Мочу для проведения исследования после гигиенического туалета наружных половых органов собирали в специальный контейнер, далее центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут, а надосадочную жидкость замораживали в пробирках «Эппендорф» и хранили при –18 °С до проведения анализа. Непосредственно перед анализом образцы биоматериала размораживали при комнатной температуре, перемешивали и центрифугировали 5 минут при 3000 g на микроцентрифуге Elmi (Sky Line, Латвия).

Кроме того, была проведена оценка влияния мочи и 3% мочевины на определение концентрации цитокинов (IL-1β, IL-6, IL-8, TNFα, IL-4, IL-10) наборами ЗАО «Вектор-Бест». Для исследования влияния мочи и 3% мочевины на определение концентрации цитокинов использовали природные цитокины, полученные при митогенной активации клеток цельной крови. Одинаковое количество супернатанта с высоким содержанием цитокина добавляли в раствор для разведения образцов (РРО) из соответствующего набора, в РРО+3 % мочевины и в мочу с содержанием данного цитокина ниже уровня чувствительности набора. Полученные значения в РРО+3 % мочевины и моче делили на значение в РРО. Для всех цитокинов брали по 5 разных супернатантов (от разных доноров). Это исследование показало, что моча и 3%-ная мочевина практически не влияют на выявление IL-1β, IL-6, IL-8, IL-4, IL-10, так как измеренные в них концентрации цитокинов отличались от значений, полученных в РРО, не более чем на 17 % (в среднем на 4 % и 6 % в мочевине и в моче, соответственно). TNFα в моче выявлялся в среднем на 25 % выше, а в мочевине на 66 % ниже, чем в РРО. В связи с этим трактовка изменения TNFα в моче больных с ОУ может быть затруднена.

Статистический анализ результатов обследования и лечения пациентов проведен с использованием пакета прикладных программ Statistica 6.0 for Windows корпорации StatSoft-Russia (1999) [4].

Формирование анализируемой выборки проводили в режиме проспективной рандомизации. Анализируемые признаки были разделены на количественные (непрерывные и дискретные). При анализе количественных данных определяли вид их распределения с использованием критерия Шапиро — Уилка при исходно неизвестных среднем значении и среднем квадратичном отклонении признака. По результатам анализа принимали нулевую (распределение исследуемого признака в генеральной совокупности соответствует закону нормального распределения) или альтернативную (распределение исследуемого признака в генеральной совокупности не соответствует закону нормального распределения) гипотезы распределения признака. Для сравнения выборок по количественным признакам использовали критерии знаков и Вилкоксона для парных сравнений.

Критический уровень статистической значимости (р) был принят за 0,05.

Эффективность диагностики степени выраженности воспалительного процесса в мочевыводящих путях методом исследования цитокинового профиля крови и мочи по анализу чувствительности и специфичности оценивали с помощью построения характеристической кривой (ROC-анализ) при разных точках разделения значений показателей цитокинов [4].

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!


Начата подписка на 2018 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление