Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2010, № 2

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 2'2010

Иммунопатологическое действие на экспериментальных животных пептидных препаратов, представляющих вирус-нейтрализующий домен F-белка респираторно-синцитиального вируса

В.З. Кривицкая, В.Г. Майорова, Е.В. Сорокин, В.В. Зарубаев, Т.Д. Смирнова, Г.П. Власов, А.А. Соминина

Цель: изучение in vivo иммуногенных и протективных свойств, а также отдаленных последствий иммунизации липопептидом SP12-LA, состоящим из синтетического пептида (SP12), представляющего нейтрализующий эпитоп F-белка (аминокислотная последовательность 221-232) респираторно-синцитиального вируса (РСВ), конъюгированного с альдегидом лауриновой кислоты (LA). Методы исследования: непрямой ИФА и реакция микронейтрализации для характеристики антител (АТ) в сыворотках животных, сэндвич-ИФА и микрокультуральный ИФА при выявлении антигенов РСВ в легких мышей. Результаты: SP12-LA индуцировал синтез РСВ-специфичных АТ у кроликов и мышей. При этом у кроликов наблюдали более пролонгированный синтез вирус-нейтрализующих АТ при замедленной динамике их формирования по сравнению с иммунизацией РСВ. C другой стороны, иммунизация SP12-LA вызывала патологические реакции - увеличение репродукции РСВ в легких мышей при последующем инфицировании и длительный (в течение 2-3 лет) синтез аутореактивных АТ у кроликов. Ассоциация их синтеза с воспалительными и деструктивными процессами в респираторных и лимфоидных органах вакцинированных животных указывала на патогенный характер этих АТ. Заключение: впервые при испытании синтетической РСВ-вакцины выявлены аутореактивные АТ. Показана необходимость долгосрочных наблюдений при разработке пептидных вакцин для исключения отдаленных последствий их введения. Предполагается, что патологическое действие SP12-LA обусловлено иммуномодулирующими свойствами пептида или его конъюгата, которые отсутствуют у данного эпитопа в контексте вирусной частицы. (Цитокины и воспаление. 2010. Т. 9, № 2. С. 18-26.)

Ключевые слова: респираторно-синцитиальный вирус, синтетический пептид, аутореактивные антитела, иммунопатология, экспериментальные животные.

Респираторно-синцитиальный вирус (РСВ) играет важную роль в структуре респираторной патологии у людей всех возрастных групп. Несмотря на необходимость вакцинации в группах риска (дети первого года жизни, пожилые люди, пациенты с кардиопульмонологическими заболеваниями), до сих пор нет ни одной лицензированной РСВ-вакцины. Причины неудач в разработке этих вакцин заключаются в особенностях иммунного ответа, индуцируемого РСВ - нарушении регуляторного баланса со сдвигом в сторону Th2-опосредованных реакций, ответственных за развитие иммунопатологических состояний (длительную гиперреактивность бронхов, легочную эозинофилию, бронхообструкцию) [5]. Несбалансированный иммунный ответ на вакцину может усиливать патологические реакции при последующей РСВ-инфекции (РСВИ). Трагическим примером служат испытания инактивированной формалином РСВ-вакцины (ИФ-РСВ), проведенные в 60-е годы в США среди детей первого года жизни. В отличие от достаточно эффективной и безопасной аналогичной гриппозной вакцины, ИФ-РСВ провоцировала осложненное течение последующей РСВИ, вплоть до летальных исходов [7]. В настоящее время ведутся разработки всех типов РСВ-вакцин, в том числе пептидных - на основе синтетических пептидов (СП), имитирующих структуру коротких фрагментов F- или G-белка РСВ [8, 15]. Основанием для разработок пептидных вакцин служит то, что СП способны индуцировать узконаправленный протективный иммунитет благодаря синтезу нейтрализующих антител (АТ) к основным детерминантам вирусных белков, функционально важных для репродукции вируса. Такие вакцины были бы особенно важны для защиты от РСВИ, поскольку при естественной инфекции и использовании цельновирионных вакцин показана иммунопатологическая роль широкого спектра ненейтрализующих РСВ-специфичных АТ за счет образования большого количества циркулирующих иммунных комплексов и локальной гиперактивации комплемента, результатом чего может являться повреждение легочной ткани и формирование обструкции дыхательных путей [12]. Одним из способов увеличения эффективности СП-вакцин (короткие СП, как правило, низко иммуногенны) является создание липопептидов, представляющих конъюгаты СП с производными жирных кислот. Высокая иммуногенность липопептидов обусловлена взаимодействием липидных составляющих конъюгата с Toll-подобными рецепторами (TLR). Активация TLR на антиген-презентирующих клетках (АРС) вызывает их созревание, индуцирует процессинг и презентацию антигенов (АГ) пептидного компонента. В результате наблюдается формирование вирус-специфичных CD4+, CD8+ T-лимфоцитов и синтез нейтрализующих АТ к эпитопам вирусных белков, как это показано для гриппозных пептидных липовакцин [6].

Целью данного исследования являлось изучение in vivo иммуногенных и протективных свойств липопептида, синтезированного на основе СП, имитирующего первичную структуру нейтрализующего эпитопа F-белка РСВ, а также изучение возможных отдаленных последствий иммунизации.

Материалы и методы

Синтетические пептиды

Синтез пептидов был осуществлен в Институте высокомолекулярных соединений РАН (Санкт-Петербург). Пептид SP12 (IEFQQKNNRLLE) представлял аминокислотную последовательность (АП) 221-232 F-белка РСВ. Были синтезированы конъюгаты SP12 с альдегидом лауриновой кислоты (SP12-LA) или бычьим сывороточным альбумином (SP12-BSA). Пептид SP-13 (YDPLVFPSDEFDA) имитировал АП 479-491 F-белка РСВ. SP-HSV (ELAPEDPEDS), представляющий АП 267-276 белка gpD вируса герпеса 2-го типа, был конъюгирован с гемоцианином (SP-HSV-HC).

Иммунизация животных для оценки иммуногенности пептидных препаратов

1. Опытные группы животных:

- Четыре кролика были иммунизированы SP12-LA, содержащим 250 мкг СП, 4 раза с недельным интервалом. В 1-й и 3-й раз – подкожно (п/к) с полным адъювантом Фрейнда (CFA), во 2-й раз - п/к с неполным адъювантом Фрейнда (IFA), в последний раз - внутривенно (в/в) без адъюванта.

- Четыре мыши BALB/c иммунизированы SP12-LA, содержащим 50 мкг СП, по той же схеме, за исключением того, что все инъекции были сделаны п/к с интервалом в 2 недели.

2. Группы сравнения:

- Кролики, иммунизированные конъюгатами SP-12-BSA (n=2) или SP-HSV-HC (n=1), содержащими 250 мкг СП, по той же схеме, что и SP12-LA.

- Четыре кролика, иммунизированные цельновирионным РСВ, очищенным ультрацентрифугированием через градиент сахарозы. Трем из них вирус вводили по той же схеме и в том же количестве, что и SP-12-LA, за исключением того, что адъювантом служил только IFA. Один кролик был иммунизирован внутримышечно 4 раза с интервалом в 2 недели. Адъювант (CFA) был введен только при первой инъекции.

- Четыре мыши BALB/c, которым 2 раза через 4 недели вводили только CFA.

Забор крови у кроликов проводили в динамике, у мышей – однократно через 8 недель после первой иммунизации.

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление