Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер 2 номер
3 номер 4 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2010, № 2

Подписаться на 2018 год

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 2'2010

Эффективность трехкратного применения интерлейкина 2 в спонтанной мышиной модели рака молочной железы

Е.В. Моисеева, С.Г. Семушина, Е.И. Скрабелинская, Е.С. Садовникова, И.А. Пахомова, В. Ден Оттер

Результаты по эффективности иммунотерапии интерлейкином 2 (IL-2) и при лечении рака молочной железы (РМЖ) неоднозначны как в клинике, так и в эксперименте. Это приводит к необходимости новых исследований на спонтанных мышиных моделях РМЖ, адекватно отражающих развитие взаимоотношений организм-опухоль по мере проявления и роста естественно возникающих неоплазм. Целью настоящей работы было оценить эффективность трехкратного применения IL-2 в ранние сроки после выявления спонтанного рака у самок мышей оригинальных линий BLRB, BYRB и CBRB с высокой частотой опухолей молочных желез. IL-2 вводили самкам (n=29) перитуморально в дозе 2,5´105 МЕ на 4-й, 8-й и 12-й дни после обнаружения опухоли. Сравнили скорость роста опухоли после клинического проявления и выживание самок опытной группы с аналогичными параметрами контрольных мышей с учетом наличия/отсутствия субклинического периода до клинического проявления опухоли (n=143). Адекватность морфологии субклинической стадии опухолей мыши аналогичным новообразованиям человека была подтверждена патоморфологически. Было показано, что обработанные IL-2 опухоли росли медленно после клинического проявления у 82% самок по сравнению с 36% и 45% самок в двух группах исторического контроля, что привело к улучшению динамики выживания пролеченных самок с клинически проявившимся РМЖ при одновременном сокращении субклинического периода. (Цитокины и воспаление. 2010. Т. 9, № 2. С. 27-31.)

Ключевые слова: рак молочной железы, спонтанная мышиная модель, интерлейкин-2, ронколейкин.

Цитокинотерапия интерлейкином 2 (IL-2) с целью отторжения опухоли редко применяется в клинике рака молочных желез (РМЖ) в связи с неоднозначностью полученных результатов (обсуждается в [6, 9, 10]). Изначально этот цитокин был идентифицирован как ростовой фактор активированных Т-лимфоцитов; однако позднее было показано, что IL-2 также стимулирует дифференцировку и рост других типов лейкоцитов: цитотоксических Т-лимфоцитов, В-лимфоцитов, натуральных киллеров и моноцитов [15]. Более того, было выявлено прямое действие IL-2 на рост клеток РМЖ in vitro и in vivo: в модельных экспериментах на мышах nude IL-2 стимулировал рост гормонозависимого РМЖ [12]. Таким образом, неоднозначность результатов применения IL-2 в клинике является, по-видимому, следствием изначально присущей этому цитокину многофакторности и разнонаправленности действия на различные клеточные системы организма реципиента. Проблема усугубляется тем, что выводы о противоопухолевом действии долгосрочной монотерапии IL-2 были сделаны в ранних клинических испытаниях с участием буквально единичных пациентов с РМЖ: например, 2 пациента в Италии (у одного из которых болезнь прогрессировала, несмотря на применение IL-2 [7]) и 6 пациентов в аналогичном российском исследовании [3]. Несмотря на наличие в зарубежной литературе конца столетия определенного оптимизма в отношении применения IL-2 для лечения РМЖ, позднее был сделан вывод об отсутствии адекватных схем монотерапии IL-2 при РМЖ [6]. В настоящее время в клинике РМЖ за рубежом IL-2 применяют достаточно широко для нестандартного метода, например, для лечения пациентов с поздними стадиями развития болезни после и/или в сочетании с другими видами терапии, в том числе, в восстановительном периоде после пересадки костного мозга [14]; в Италии - в сочетании с гормоно- или химиотерапией [9]; в Японии - в сочетании с адоптивным клеточным переносом [5], в США - при наличии экспрессии HER2/neu в сочетании с иммунизацией [4]. Заметных достижений при этом не отмечается. На таком фоне успешное применение IL-2 в сочетании с β-интерфероном [9] для лечения гормонозависимого РМЖ является, по мнению самих авторов, скорее исключением, чем правилом.

Появление ронколейкина (отечественного аналога IL-2) на Российском рынке иммунотерапевтических препаратов мало изменило ситуацию в клинике РМЖ. В России, как и за рубежом, наибольший опыт применения IL-2 (ронколейкина) накоплен при лечении диссеминированных форм рака почки и меланомы, имеются сообщения о терапии ронколейкином рака яичника [2]. Однако в современной российской онкологической практике отсутствуют обоснованные рекомендации по применению IL-2 с целью отторжения РМЖ. Возможно, терапевтический эффект препарата связан с различным воздействием цитокина на патологический процесс в зависимости от особенностей протекания болезни (тип опухоли, скорость и стадия роста, иммунологический статус пациента [8]).

Очевидно, что в такой ситуации следует накопить достаточно нового экспериментального материала, позволяющего определить целесообразность применения IL-2 при РМЖ, разработать эффективные режимы введения и критерии отбора пациентов для успешного проведения терапии (A. Nicolini, личное сообщение [9]). При этом предпочтительно испытание монотерапии IL-2, для этой цели актуально использование адекватных моделей РМЖ. Как известно, рано проявляющиеся перевиваемые опухоли молочных желез (ОМЖ) мышей более чувствительны к однократной инъекции IL-2 в дозе 2,5´106 МЕ по сравнению с поздно проявляющимися [8]. В спонтанной модели, являющейся наиболее адекватной человеческому заболеванию, при одновременном начале лечения самок с ОМЖ, находящихся на разных стадиях роста опухоли, были получены похожие данные, а именно: пролеченные IL-2 самки с внезапно проявившимися ОМЖ выживали значительно лучше, чем контрольные (неопубликованные данные). Поскольку эффективность лечения пациентов с РМЖ повышается при раннем выявлении и начале лечения, представлялось целесообразным протестировать новую схему цитокинотерапии, начиная курс лечения IL-2 сразу после обнаружения спонтанных ОМЖ. Целью данной работы было оценить эффективность трехкратного применения IL-2 в дозе 2,5´105 МЕ в ранние сроки развития спонтанных ОМЖ.

Материалы и методы

Характеристики спонтанной модели рака молочной железы

В работе были использованы 143 самки мышей BLRB, BYRB и CBRB с хромосомной транслокацией Rb(8.17)1Iem (далее, RВ-линии) с высокой частотой возникновения спонтанного MMTV-зависимого РМЖ [8]. Подкожные ОМЖ выявлялись у 90-95% рожавших и 80-85% девственных самок BLRB и BYRB, соответственно. ОМЖ у самок CBRB встречались менее чем у 50% девственных и около 75% рожавших самок. Средний возраст самок на момент первичного диагноза ОМЖ был равен 9,5, 11, и 12,5 месяцам для рожавших самок линий BYRB, BLRB и CBRB, соответственно. Мыши содержались в конвенциональных условиях.

Мониторинг опухолевого роста

Мышей старше 6 месяцев еженедельно исследовали для выявления ОМЖ визуально и методом пальпации. С момента первичного диагноза (ПД), т. е. обнаружения ОМЖ, и до гибели самки еженедельно регистрировали размер опухоли в соответствии с ранее описанной методикой [8]. В течение индивидуальной жизни каждой самки со спонтанной ОМЖ выделяли следующие три периода в соответствии со стадией проявления и роста опухоли: латентный (невидимый, равный возрасту самки на момент ПД опухоли), субклинический (пальпируемый, размер <4 мм) и клинический (видимый, размер ≥4 мм). Постепенно проявляющиеся опухоли, размеры которых при ПД и далее в течение одной или более недель определялись только на ощупь (размер менее 4 мм), т. е. имеющие зарегистрированный субклинический период, называли суб+ (субклинический период ≥1 нед.). Внезапно проявившиеся опухоли, которые на момент ПД уже имели размер 4-5 мм или более, считали суб(субклинический период <1 нед.). Время визуального проявления опухоли определяли как момент достижения опухолью размера 4-5 мм в диаметре и считали началом клинической стадии роста ОМЖ. С момента клинического проявления (КП) выделяли быстро и медленно растущие опухоли, т. е. имеющие типичную для RB-линий (или более быструю) и более медленную скорость роста после КП, соответственно [8].

Локальная терапия IL-2 и регистрируемые параметры

IL-2 (Chiron, Амстердам, Нидерланды) растворяли в 0,5 мл раствора, содержащего 0,9% хлорид натрия и 0,1% БСА. IL-2 вводили мышам подкожно в окружающие опухоль ткани в дозе 2,5´105 МЕ. Самок опытной группы вводили в эксперимент постепенно, по мере обнаружения у них спонтанных опухолей. Мышей (n=29, осень) обрабатывали IL-2 трехкратно на 4-й, 8-й и 12-й дни после первого обнаружения опухоли. Диаметр опухолей и вес мышей измеряли еженедельно. При проведении тестирования на спонтанных моделях общепринятый контроль (одновременное введение растворителя) практически невозможен вследствие крайней гетерогенности популяции и ограниченного количества самок с ОМЖ в данный момент времени. Поэтому данные по росту опухолей пролеченных самок сравнили с аналогичными данными интактных самок (при сохранении в группе процентного соотношения мышей всех трех RВ-линий) двух групп исторического контроля: исторического контроля-1 (n=56, лето-осень, до проведения тестирования IL-2) и исторического контроля-2 (n=58, зима-весна, после проведения тестирования). Выживание самок опытной группы сравнили с выживанием группы так называемого текущего контроля, в которую вошли интактные самки из исторического контроля, обследованные незадолго до и после проведения эксперимента и не получившие лечения IL-2 (n=36, лето-осень-зима). Таким образом были использованы данные по росту ОМЖ и выживанию 143 самок со спонтанными, естественно проявляющимися опухолями.

Патоморфологический анализ

При массивном размере опухоли (≥15 мм), потере массы тела более 15% и/или отказе животных от пищи, самок подвергали эвтаназии методом цервикальной дислокации. Некропсию, патоморфологический анализ, классификацию ОМЖ проводили в соответствии с методикой [8].

Статистическую значимость различий в значениях параметров определяли с помощью непараметрического U-критерия Вилкоксона - Манна - Уитни.

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!


Начата подписка на 2018 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление