Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер 2 номер
3 номер 4 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2010, № 3

Подписаться на 2018 год

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Врачу общей практики

Номер 3'2010

Вовлечение лектинового каскада комплемента в постишемический воспалительный ответ

А.С. Бояджян, Г.В. Цаканова, Л.Г. Жамгaрян, Р.Б. Сим, К. М. Нагапетян

Изучен функциональный статус ключевых компонентов лектинового каскада комплемента в динамике развития постишемического ответа при остром ишемическом инсульте. Показано, что, по сравнению с нормой, в крови больных, перенесших инсульт, достоверно повышены уровни маннан-связывающего лектина и активности ассоциированных с ним сериновых протеаз c 1-го по 14-й дни от начала инсульта. На основании полученных данных сделан вывод, что постишемический воспалительный ответ характеризуется гиперактивацией лектинового каскада комплемента, и что. компоненты лектинового каскада комплемента могут рассматриваться как терапевтические мишени для коррекции индуцируемых ишемией воспалительных реакций. (Цитокины и воспаление. 2010. Т. 9, № 3. С. 35-39.)

Ключевые слова: ишемический инсульт, постишемический воспалительный ответ,  лектиновый каскад комплемента, маннан-связывающий лектин, ассоциированные с маннан-связывающим лектином сериновые протеазы.

Комплемент является важнейшим эффектором иммунной системы, медиатором воспаления. Участвуя в огромном разнообразии клеточных и гуморальных реакций и межмолеку­лярных взаимодействий, формирующих иммунный ответ, комплемент, по сути, представляет собой цитотоксичную систему защиты организма, обес­пе­чи­вающую в норме элиминацию инородных патогенов, токсических продуктов тканевого распада, опсонизацию некротических и апоптотических клеток, индукцию и усиление воспаления, а также секрецию иммунорегуляторных молекул и удаление из кровотока иммунных комплексов. Однако, неконтролируемая длительная гиперактивация комплемента может приводить к повреждению здоровых тканей, что наблюдается при ряде патологических состояний организма [6, 13].

Система комплемента активируется в каскаде протеолитических реакций и состоит из более чем 60 раство­римых и мембраносвязанных белков, включая рецепто­ры и регуляторы. Существуют три пути активации комплемента - классический, альтернативный и лектиновый, отличающиеся составом компонентов и пусковыми механизмами [6, 13].

Результаты наших предыдущих исследований показали, что для ИИ характерна гиперактивация как классического, так и альтернативного каскадoв комплемента [1, 2]. В настоящей работе мы изучили функциональный статус лектинового каскада комплемента в динамике развития постишемического ответа при остром ИИ у человека. В этих целях в крови у 50 больных ИИ и такого же количества здоровых лиц были определены уровни маннан-связывающего лектина (МСЛ) и активности ассоциированных с МСЛ сериновых протеаз (МАСП-1 и МАСП-2) на 1-й, 3-й, 5-й, 7-й и 14-й дни от начала ИИ. Проведен корреляционный анализ полученных данных.

Материалы и методы

Больные ИИ находились на лечении в Республиканском медицинском центре “Армения” МЗ РА. Диагностирование больных проводилось врачами вышеотмеченных центров согласно Международной классификации болезней (10-е издание; МКБ-10), на основе анамнеза, неврологического обследования и компьютерной томографии мозга. Тип инсульта определяли на основании критериев TOAST [3]. Среди больных ИИ у 8 пациентов наблюдался кардиоэмболический инсульт, а у 42 - атеротромбоэмболический. У 5 больных зона инфаркта была локализована в стволовой части мозга, а у 45 - в корково-подкорковых участках полушарий головного мозга. В исследование были включены больные со средней тяжестью ИИ (17 баллов по шкале Национального института здоровья США). Объем инфаркта в среднем составлял 65541±63745mm3 (M± d). 30 пациентов страдали атеросклерозом, 20 - артериальной гипертонией, 9 - ишемической болезнью сердца, 9 - застойной сердечной недостаточностью и 8 - мерцательной аритмией. У 38 пациентов наблюдалась гиперлипидемия. У всех больных уровни С-реактивного белка, лейкоцитов и свертываемость крови превышали характерные для нормы значения. У 19 больных наблюдалась никотиновая зависимость. 12 больных имели наследственную предрасположенность к инсульту, 3 – к сахарному диабету, 6 – к инфаркту миокарда. Средний возраст больных (женщин - 25, мужчин - 25) составлял 64 ± 6 лет (М ± d).

Группу здоровых лиц (без наследственной отягощенности инсультом, инфарктом миокарда и сахарным диабетом) составили сотруднили НАН РА, соответствующие по возрасту и полу больным ИИ. У 22 из них наблюдалась никотиновая зависимость.

Никто из субъектов исследования не страдал сахарным диабетом, онкологическими, аутовоспалительными или аутоиммунными заболеваниями, не переносил инфаркт миокарда, острых инфекционных заболеваний, не подвергался хирургическим операциям и не принимал препараты иммуномодуляторного действия как минимум за 12 месяцев до взятия крови. Все субъекты дали согласие предоставить кровь для проведения настоящего исследования. На проведение последнего было также получено разрешение Комитета по этике Института молекулярной биологии НАН РА.

Забор крови проводили пункцией из вены. У больных забор крови проводили на 1-й, 3-й, 5-й, 7-й и 14-й дни от начала инсульта. На 1-й день кровь забирали сразу же после поступления пациента в клинику и его обследования, до применения каких-либо лекарственных препаратов. Затем все пациенты получали базовую терапию инсульта (антиагреганты, нейропротекторы, препараты ноотропного и антигипертензивного действия) совместно с симптоматическим лечением. Пробы крови сразу помещали на лед, затем центрифугировали при 3000 g в течение 10 минут и отбирали сыворотку, которую использовали в последующих экспериментах. Образцы сыворотки хранили при -30о С.

Все реактивы, кроме специально отмеченных, были производства фирмы Sigma-Aldrich. (США).

Определение концентрации МСЛ и активности находящейся с ним в комплексе МАСП-2 в исследуемых образцах сыворотки проводили при помощи ранее описанных методов твердофазного иммуноферментного анализа на приборе Multiskcan (ThermoLifeSciences, Великобритания) при длине волны 405 нм, используя микропланшеты с ячейками, покрытыми маннаном [4, 15]. При определении МСЛ в качестве первичных антител использовали специфичные к МСЛ кроличьи антитела, в качестве вторичных - анти-кроличьи козьи антитела, коньюгированные со щелочной фосфатазой, а в качестве субстрата последней - п-нитрофенил фосфат. Концентрацию МСЛ рассчитывали на основании стандартной кривой, построенной при использовании очищенных препаратов МСЛ (Staten Serum Institut, Дания), и выражали в мкг на 1 мл сыворотки (мкг/мл) [4]. При определении активности МАСП-2 вместо первичных антител использовали один из ее субстратов - С4 белок комплемента. Инкубацию образцов сыворотки с субстратом проводили в течение 1 часа. В качестве вторичных антител использовали специфичные к человеческому С4 белку кроличьи антитела, коньюгированные со щелочной фосфатазой (Immunsystem, Швеция), а в качестве субстрата последней - п-нитрофенил фосфат. Активность МАСП-2 выражали в единицах прироста оптического поглощения за 1 мин в расчете на 1 мл сыворотки (А405/мин/мл) [15].

Активность МАСП-1 в исследуемых образцах сыворотки измеряли ранее описанным методом флуоресцентного анализа [15] на приборе Fluoroskan (Thermo Life Sciences, Великобритания), используя микропланшеты с ячейками, покрытыми маннаном, и трет-бутилоксикарбонил-валин-пролин-аргинин-аминометилкумарин (Boc-Val-Pro-Arg-AMC; Bachem, Швейцария) в качестве субстрата. Инкубацию образцов сыворотки с субстратом проводили в течение 1 часа. При расщеплении этого синтетического соединения под действием МАСП-1 высвобождается флуоресцирующий продукт - аминометилкумарин, что регистрировали измерением относительной интенсивность флуоресценции в области 460 нм при длине волны возбуждения 355 нм. Активность МАСП-1 выражали в условных единицах прироста интенсивности флуоресценции за 1 мин в расчете на 1 мл сыворотки (I460/ мин/мл) [15].

Во всех трех методах инкубацию опытных проб проводили в присутствии ионов Са+2,а в контрольных пробах Са+2 замещали ЭДТА. В отсутствии Са+2 связывания МБЛ с маннаном и, соответственно, активации МАСП-1 и МАСП-2 не происходит [4, 15].

Статистическую обработку полученных данных проводили, используя программный пакет «Graphpad Prism» (GraphPad Software Inc., USA). Поскольку предварительный анализ данных при помощи W-критерия Шапиро-Уилка показал их нормальное распределение, обработка данных включала методы парамерической статистики. Достоверность различий определялась на основании однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA) и теста Бонферрони (многократный t-тест с альфа-коррекцией). Для проверки гомогенности дисперсий использовали тест Бартлета. Значения p < 0,05 были приняты как статистически достоверные.

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!


Начата подписка на 2018 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление