Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер 2 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2011, № 2

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 2'2011

Характеристика аутореактивных антител класса IgG у пациентов с острыми респираторными вирусными инфекциями

В.З. Кривицкая

Целью исследования являлась характеристика аутореактивных IgG у пациентов с острыми респираторными заболеваниями различной этиологии.
Методы исследования.Содержание антител, взаимодействующих с антигенами нормальных клеток (anti-NCAg-IgG), гепарином/гепарансульфатом (anti-Hr-IgG), а также IgE к респираторно-синцитиальному вирусу (РСВ), определяли непрямым иммуноферментным методом в парных сыворотках от 760 пациентов и материалах от 86 здоровых людей.
Результаты. У здоровых детей и взрослых частота выявления сывороток, положительных по содержанию ауто-IgG не превышала 8%. Активность ауто-IgG при РСВ-инфекции была статистически значимо выше, чем при других вирусных заболеваниях. Частота сероконверсий anti-NCAg-IgG у пациентов с РСВ-инфекцией, гриппом А, гриппом В, парагриппом и аденовирусной инфекцией составила 16, 5, 0, 3 и 3% , соответственно. Частота сероконверсий anti-Hr-IgG при этих заболеваниях достигала 34, 16 , 2, 4 и 6%, соответственно. У пациентов с РСВИ высокая активность anti-Hr-IgG была ассоциирована с осложненным течением заболевания и синтезом РСВ-специфического IgE, что указывает на потенциально патогенный характер этого типа аутоантител и возможную их роль в формировании вирус-индуцированной аллергии.
Заключение. Результаты проведенного исследования свидетельствуют о том, что синтез аутореактивных IgG, взаимодействующих с поверхностными клеточными антигенами, включая гепарансульфат, является характерной чертой РСВ-инфекции в отличие от ОРВИ иной этиологии. (Цитокины и воспаление. 2011. Т. 10. № 2. С. 21–27.)

Ключевые слова: аутореактивные IgG, острые респираторные вирусные заболевания, респираторно-синцитиальная вирусная инфекция, дети и взрослые, иммуноферментный анализ.

Некоторые вирусные инфекции сопряжены с аутоиммунными нарушениями. Например, при паротите, краснухе, цитомегаловирусной инфекции наблюдается синтез антител (АТ) к клеткам островков Лангерганса поджелудочной железы, что может привести к возникновению диабета 1 типа. Герпес-, адено- и папилломавирусы индуцируют синтез IgG к основному белку миелина периферической нервной системы, вызывающих демиелинизацию нейронов и развитие рассеянного склероза. Миокардит, обусловленный действием антимиозиновых АТ, может быть следствием инфицирования вирусами коксаки В3 [7]. Аутореактивные АТ, относящиеся к разным классам, отличаются по свойствам и выполняемым функциям. К аутореактивным АТ класса IgМ относятся «нормальные» (natural) АТ. Они продуцируются лимфоцитами субпопуляции В1, у которых гены иммуноглобулина (Ig) не претерпевают соматических мутаций. Нормальные IgM взаимодействуют не со специфичными эпитопами, а c эволюционно консервативными шаблонами (patterns) патогенов, зачастую структурно сходными с хозяйскими антигенами (АГ). Этим объясняются их свойства: низкий аффинитет, полиспецифичность и аутореактивность. Нормальные АТ являются неотъемлемой частью врожденного иммунитета, выполняют защитные и регуляторные функции.

В отличие от нормальных ауто-IgM, ауто-IgG являются, как правило, АГ-специфичными, и синтезируются лимфоцитами субпопуляции В2 после аффинного «созревания» в результате соматических мутаций ДНК, кодирующей вариабельный участок гена Ig. В отличие от В1-лимфоцитов, В2-клетки подвергаются в костном мозге и периферических лимфатических узлах строгой негативной селекции, что приводит к устранению аутоспецифичных клонов. Однако некоторые из них избегают элиминации и становятся источником АГ-специфичных ауто-IgG [4]. В то время как нормальные IgM являются необходимой составляющей иммунологического гомеостаза, ауто-IgG синтезируются, главным образом, в экстремальных ситуациях, например, при одновременном высвобождении большого количества ауто-АГ из погибших клеток. Как правило, ауто-IgG обладают значительно большим патогенным потенциалом, чем ауто-IgМ [21]. Синтез ауто-АТ при инфекционных процессах обычно не ассоциирован с развитием аутоиммунных заболеваний. Однако риск потери аутотолерантности резко возрастает в условиях сильного локального воспаления (в том числе, вирусного), поскольку иммуногенность ауто-АГ из погибших инфицированных клеток при этом значительно увеличивается [13].

Вопрос о роли ауто-АТ в патогенезе острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ) остается открытым. Ранее нами была проанализирована активность ауто-IgМ при ОРВИ [3]. Целью настоящего исследования являлась характеристика аутореактивных IgG у пациентов с острыми респираторными заболеваниями различной этиологии.

Материалы и методы

Клинические материалы. Были проанализированы парные сыворотки от 760 детей и взрослых, полученные в острой и реконвалесцентной фазах — через 1–3 и 7–14 дней от начала заболевания, соответственно (в среднем, через 3,5 и 9,8 дней), а также одиночные сыворотки от 48 здоровых детей в возрасте от 3 до 16 лет (средний возраст — 10,3±3,5 года) и 38 взрослых доноров (средний возраст — 20,5±2,1 года).

Диагностика вирусных инфекций. Диагностирование респираторно-синцитиальной вирусной инфекции (РСВИ), гриппа и аденовирусной инфекции (АВИ) проводили на основании выявления сероконверсий вирус-специфичных IgG в ИФА. Для сенсибилизации планшет использовали вирусы, очищенные ультрацентрифугированием в градиенте плотности сахарозы. Процедура проведения анализа описана ранее [1]. Парагриппозную инфекцию диагностировали выявлением сероконверсий противовирусных АТ в реакции торможения гемагглютинации с эритроцитами морской свинки.

Выявление в ИФА IgG, взаимодействующих с АГ нормальных клеток (anti-NCAg-IgG). В качестве антигенной смеси для сенсибилизации твердой фазы использовали фракцию солюбилизированных поверхностных структур клеток культуры фибробластов легкого эмбрионов человека (ФЛЭЧ) после их обработки мягким неионным детергентом β-октилгликозидом (β-ОГ, Sigma, USA) [3]. Детекцию АТ к нормальным клеточным АГ (NCAg) в сыворотках (при разведении 1/400) проводили с использованием пероксидазного конъюгата моноклональных антител (МКА-Пх) к IgG человека (НПО «Полигност», Санкт-Петербург). Субстратная смесь содержала 0,02 % Н2О2 и 0,1 мг/мл 3,3',5,5'-тетраметилбензидина. Результаты учитывали спектрофотометрически при длине волны 450 нм (ОD450).

Выявление в ИФА IgG, взаимодействующих с гепарином (anti-Hr-IgG).Для сенсибилизации твердой фазы использовали жидкий гепарин для инъекций (ОАО «Синтез», г. Курган) в концентрации 50 мкг/мл. Детекцию anti-Hr-IgG (при разведении сывороток 1/20) проводили, как описано выше.

Учет результатов детекции anti-NCAg-IgG и anti-Hr-IgG. Сероконверсии считали доказанными, если различия ОD450 для сывороток, полученных в реконвалесцентной и острой фазах, составляли не менее 0,3. Положительными по содержанию ауто-IgG считали сыворотки, для которых ОD450превышали средний показатель OD450 в контрольной группе с отрицательным уровнем АТ (К-) на величину не менее 3 стандартных отклонений (пороговое значение=OD450 К- +3 SD).

Конкурентный ИФА. Планшеты сенсибилизировали гепарином, после чего вносили сыворотки (в разведениях 1/10–1/80) с одновременным добавлением равных объемов (50 мкл) β-ОГ-фракции ФЛЭЧ, содержащей 1–10 мкг/мл NCAg. Степень ингибирования взаимодействия АТ с гепарином в присутствии NCAg выявляли с использованием МКА-Пх к IgG человека, как указано выше.

Выявление в крови IgЕ, специфичных к РСВ, проводили в ИФА с использованием очищенного ультрацентрифугированием РСВ для сенсибилизации планшетов с последующим добавлением сывороток в разведении 1/10 и МКА-Пх к IgЕ человека (НПО «Полигност», Санкт-Петербург) [2].

Статистическая обработка результатов. Сравнение выборочных долей (частот выявления сероконверсий АТ в различных группах пациентов) проводили с использованием критерия Фишера с поправкой на множественность анализа. Мерой связи между качественными признаками (связь между наличием сероконверсий разных типов АТ) служил коэффициент ассоциации Пирсона (rA).

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление