Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер 2 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2011, № 2

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 2'2011

Противовирусная активность антиоксидантов и их комбинаций с интерфероном альфа-2b человеческим рекомбинантным в отношении вируса гриппа птиц А/H5N1

А.Н. Васильев, П.Г. Дерябин, Г.А. Галегов

В работе получены данные, свидетельствующие о наличии у антиоксидантов — витамина Е, унитиола и аскорбиновой кислоты — противовирусной активности invitro и отсутствии противовирусной активности у таурина в отношении вируса гриппа птиц А/H5N1. Показано, что при совместном применении интерферона альфа-2b и витамина Е, унитиола или аскорбиновой кислоты противовирусная активность интерферона увеличивалась в несколько раз. В отличие от вышеперечисленных сильных антиоксидантов таурин в сочетании с интерфероном альфа-2b не оказывал синергидного влияния на противовирусную активность последнего. Результаты проведенного исследования дают основание рекомендовать включение препаратов интерферона альфа-2b человеческого рекомбинантного в комбинации с высокоактивными антиоксидантами витамином Е, аскорбиновой кислотой или унитиолом в систему лекарственной терапии гриппозной инфекции. (Цитокины и воспаление. 2011. Т. 10. № 2. С. 32–37.)

Ключевые слова: грипп птиц А H5N1, интерферон альфа-2b, антиоксиданты.

Впервые грипп птиц был описан в 1878 г. итальянским ветеринаром Эдуардо Перрончито. Возбудителем гриппа птиц является РНК-содержащий вирус Influenza virus А из семейства Orthomyxoviridae, для которого, как и для вирусов гриппа характерна высокая видоспецифичность. Среди всех циркулирующих среди птиц вариантов вируса гриппа А вариант H5N1 представляет наибольшую опасность: именно этот вариант вируса вызвал наибольшее количество случаев тяжелого заболевания птиц и наибольшее количество смертельных исходов [3].

Первые случаи инфицирования людей вирусами птичьего гриппа были зарегистрированы в 1959 г. Заболевание людей вызывали следующие варианты вируса гриппа А: H5N1, H7N3, H7N7 и H9N2, при этом в основном проявления инфекции были незначительны за исключением высокопатогенного варианта вируса гриппа птиц А/H5N1 [11]. За последние годы вирус H5N1 преодолел видовой барьер специфичности и инфицировал людей: начиная с момента первого случая в 1997 г. в Гонконге зафиксировано более 100 случаев заболевания людей при инфицировании вирусом А/H5N1, из них более 60 случаев со смертельным исходом. На сегодняшний день случаи заболевания людей были зарегистрированы в семи странах, расположенных в Азии: Вьетнаме, Индонезии, Ираке, Китае, Таиланде, Камбодже и Турции [8, 9].

Клиническое развитие болезни, вызванной вирусом H5N1, как правило, необычайно стремительно, с быстрым ухудшением состояния и высокой летальностью. Подобно многим возникающим новым инфекционным заболеваниям, грипп А/H5N1 у людей еще мало изучен. Исследование возможности применения традиционных противогриппозных препаратов для профилактики и лечения гриппа А/H5N1 является актуальной и перспективной задачей [2, 7]. Разработки вакцины против пандемического вируса ведут специалисты многих стран [10].

В Государственной коллекции вирусов НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН депонированы штаммы высоковирулентного гриппа А/H5N1, изучены их биологические свойства, получены экспериментальные данные, свидетельствующие о чувствительности выделенных штаммов к известным специфическим противогриппозным препаратам: ремантадину, арбидолу, осельтамивиру [2, 7].

Учитывая важность проблемы борьбы с пандемией гриппа, в том числе возможность появления штаммов вируса с устойчивостью к традиционным химиопрепаратам, представляет интерес поиск новых схем терапии инфекции, вызываемой вирусом А/H5N1, препаратами рекомбинантного интерферона альфа-2b в комбинации с антиоксидантами. Это позволит не только эффективно блокировать репликацию вируса в клетках, но и проводить иммуномодулирующую терапию. В работах [1, 5, 6] показано наличие выраженного синергидного эффекта комбинации интерферона альфа-2b и антиоксидантов ivvitro и invivo: в присутствии антиоксидантов специфическая противовирусная активность интерферона увеличивается в несколько раз, что позволяет не только повысить эффективность терапии, но и снизить возможность проявления побочных эффектов.

Целью настоящей работы явилось изучение invitro противовирусной активности сочетаний интерферона альфа-2b с разными антиоксидантами в отношении высоковирулентного вируса гриппа птиц А/H5N1.

Материалы и методы

Вирус. В работе использовали вирус гриппа А/H5N1, по данным молекулярно-генетического анализа, отнесенный к Цинхай–Сибирскому генотипу-2. Штамм депонирован в коллекции вирусов НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН. Инфекционный титр вируса в культуре клеток MRC5, по нашим данным, составил 5,5–6,0 LgТЦД50. Вирусы пассировали в культуре клеток почки эмбриона свиньи (СПЭВ) по стандартной методике [2, 7]. В работе изучали дозы вируса, равные 10, 1 и 0,1 ТЦД50/лунку.

Культура клеток. Исследования проводили с использованием культуры клеток легкого эмбриона человека MRC5, полученной из лаборатории культур тканей НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского. Культуру клеток выращивали в виде монослоя в 48-луночных планшетах при 37°С в атмосфере 5 % СО2 с использованием среды Игла МЕМ с добавлением антибиотиков (100 ЕД/мл пенициллина и 50 МЕ/мл стрептомицина), глутамина (300 мкг/мл) и 10% сыворотки крови эмбрионов коров (ростовая среда). В качестве поддерживающей использовали среду Игла МЕМ с добавлением антибиотиков (100 ЕД/мл пенициллина и 50 МЕ/мл стрептомицина), 300 мкг/мл глутамина и 2% инактивированной при 56°С сыворотки крови эмбрионов коров.

Препараты. В работе использовали следующие препараты:

интерферон альфа-2b человеческий рекомбинантный, Р N003726/01, производства ООО «Фармапарк», Россия, активность 4×108 МЕ/мл; унитиол (димеркаптопропансульфонат натрия), Р N003207/01, производства ФГУП «Технолог СКТБ», Россия; таурин (аминоэтансульфоновая кислота), Р N000151/01, производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства», Россия; аскорбиновая кислота, Р N002030/01, производства ООО «Полисинтез», Россия; витамин E (dl-альфа-токоферола ацетат, тип CWS/F500 (водорастворимая форма), концентрация 500 МЕ/г.

В качестве референсного препарата активности интерферона альфа-2b человеческого рекомбинантного использовали международный стандарт активности интерферона (WHO International Standard Interferon alpha 2b, NIBSC code: 95/566).

Для работы на культуре клеток из препаратов готовили растворы на поддерживающей среде: интерферон альфа-2b изучали в концентрациях 10000, 5000, 2000 и 1000 МЕ/мл; унитиол — в концентрациях 25, 12,5, 6,25, 5 и 3,125 мг/мл, таурин — в концентрациях 250, 125, 62,5 и 31,1 мкг/мл. Растворы аскорбиновой кислоты в концентрациях 100, 50, 25 и 12,5 мкг/мл корректировали по рН до значения 5,5 при помощи 2% раствора гидрокарбоната натрия. Витамин Е использовали в виде растворов с концентрацией 1,0, 0,1, 0,05 и 0,01 мкг/мл.

Все перечисленные концентрации препаратов не обладали цитотоксическими свойствами, за исключением раствора унитиола в концентрации от 25 до 6,25 мг/мл. Оценку цитотоксичности растворов препаратов проводили по стандартной методике, исследуя морфологию и жизнеспособность клеток в монослое после 72 ч инкубации с растворами препаратов: при отсутствии изменений качества клеток в монослое растворы препаратов считали не цитотоксичными.

Изучение противовирусной активности препаратов и их комбинаций. Оценку противовирусной активности препаратов и их комбинаций проводили согласно рекомендациям [4]. В работе использовали двухсуточный монослой культуры клеток MRC5, выращенный в стандартных 48-луночных планшетах. Полностью сформированный монослой клеток заражали вирусом гриппа А/H5N1 с инфекционной активностью 10, 1 и 0,1 ТЦД50/лунку в объеме 25 мкл на лунку. После сорбции в течение 1 ч вируссодержащий материал удаляли, монослой клеток отмывали от неадсорбировавшегося вируса средой Игла МЕМ и вносили растворы препаратов или их комбинаций, приготовленные на поддерживающей среде, как описано ранее, в количестве 200 мкл. Планшеты инкубировали в течение 96 ч, для подсчета количества жизнеспособных клеток использовали метод окрашивания 0,1% спиртовым раствором метиленового синего. Противовирусную активность препаратов и их комбинаций оценивали путем сравнения их влияния на жизнеспособность инфицированных клеток в сравнении с культурой инфицированных клеток без испытуемых растворов. Учет воздействия веществ на процессы репликации вируса производили только в случае, если в интактных клетках отсутствовала клеточная дегенерация и при развитии практически 100% цитопатического действия вируса в контрольных инфицированных клетках.

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление