Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2011, № 3

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 3'2011

IL-4, IFNγ, IL-10 и IL-17 кожных экссудатов как диагностические критерии ремоделирования кожи при атопическом дерматите

А.А. Денисов, В.В. Климов, Е.К. Фирсова

С целью оценки концентраций IL-4, IFNγ, IL-10 и IL-17 в кожных экссудатах при атопическом дерматите (АтД) — как возможных диагностических критериев ремоделирования кожи — обследовано 59 больных АтД и 10 здоровых добровольцев. Содержание цитокинов определяли с помощью иммуноферментного анализа. Выявлены поляризация иммунорегуляторных субпопуляций Т-клеток на локальном уровне в сторону увеличения Тh2 (по данным соотношения IL-4 и IFNγ) и высокая концентрация IL-10. Последний может служить одним из диагностических критериев ремоделирования кожи при АтД. (Цитокины и воспаление. 2011. Т. 10. № 3. С. 76–78.)

Ключевые слова: атопический дерматит, ремоделирование кожи, цитокины, кожный экссудат.

Атопический дерматит (АтД) является хроническим широко распространенным заболеванием кожи, сопровождающимся зудом и другими клиническими проявлениями [1, 3]. Это иммунопатология, имеющая чрезвычайно сложный механизм развития и трудно поддающаяся терапии [6, 8]. В последние годы вскрыты новые звенья патогенеза болезни, которые касаются эпикутанной сенсибилизации и тканевого ремоделирования кожи при АтД [5], при этом длительная персистенция воспаления даже в период ремиссии поддерживается разными иммунорегуляторными субпопуляциями Т-клеток и секретируемыми ими и другими клетками цитокинами [6, 7, 9]. Ремоделирование кожи — это стойкая, но обратимая морфофункциональная перестройка кожной ткани с вовлечением иммунной системы, клинически проявляющаяся характерными элементами (лихенификацией) и сухостью [3, 5].

Целью настоящей работы была оценка концентраций IL-4, IFNγ, IL-10 и IL-17 в кожных экссудатах, полученных в разных участках кожи при АтД, как возможных диагностических критериев ремоделирования кожи при данной патологии.

Материалы и методы

Обследовано 59 больных АтД обоего пола в возрасте 18–45 лет и 10 здоровых добровольцев 17–24 лет. Диагноз АтД устанавливали на основании данных анамнеза, клинической картины, кожного аллерготестирования, содержания IgE, а также принимая во внимание критерии национальных и международных согласительных документов по данной патологии [1, 3]. При исследовании соблюдали принципы информированного согласия пациентов в соответствии с Хельсинкской декларацией Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2000 г. и «Правилами клинической практики в РФ», утвержденными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. № 266.

Концентрацию цитокинов определяли в бесклеточных кожных экссудатах, получаемых согласно медицинской технологии «Способ оценки минимальной воспалительной активности кожи при атопическом дерматите в стадии ремиссии» ФС№2010/217 от 10.06.2010 [4]. Переднюю сторону предплечья дезинфицировали спиртом, затем в средней трети ладонной поверхности предплечья с помощью стерильного скальпеля удаляли верхний слой эпидермиса, не затрагивая более глубокие слои кожи. Удалив роговой слой на участке кожи площадью 0,5×0,5 см, получали поверхность с характерным блеском. Слой шиповатых клеток, базальных клеток и базальная мембрана эпидермиса оставались интактными. В острый период выбирали пораженные участки кожи, а в период ремиссии — два типа кожных зон: условно здоровые и лихенифицированные. На скарифицированный участок помещали камеру объемом 1,0 мл, предварительно заполненную с помощью шприца стерильной средой 199. Камеру фиксировали на коже с помощью лейкопластыря. Круговая обвязка предплечья бинтом обеспечивала наиболее надежную фиксацию камеры.

Через 6 ч камеру снимали, ее содержимое пипеткой собирали и переносили в пробирку. После центрифугирования экссудата получали супернатант, который в дальнейшем использовали для определения цитокинов.

С этой целью использовали твердофазный иммуноферментный анализ с применением пероксидазы хрена в качестве индикаторного фермента. Основным реагентом набора являлись моноклональные антитела к определяемому цитокину, иммобилизованные на поверхности лунок полистирольного планшета. Другой тип моноклональных антител к независимому эпитопу молекулы цитокина находился в наборе в виде конъюгата с биотином. Индикаторным компонентом являлся конъюгат стрептавидина с пероксидазой хрена. После нескольких стадий инкубации и отмывок, количество связавшегося конъюгата с пероксидазой хрена определяли цветной реакцией с использованием субстрата для пероксидазы хрена — перекиси водорода. Интенсивность окрашивания прямо пропорциональна концентрации определяемого цитокина. Активность связанной пероксидазы измеряли с использованием автоматического фотометра для микропланшетов.

Для определения продукции IL-4, IL-10, IL-17 и IFNγ использовали наборы реагентов «ИЛ-4-ИФА-БЕСТ», «ИЛ-10-ИФА-БЕСТ», «ИЛ-17-ИФА-БЕСТ» и «гамма-ИНТЕРФЕРОН-ИФА-БЕСТ» (ЗАО «Вектор-Бест», г. Новосибирск). Постановку иммуноферментного анализа проводили в соответствии с методическими рекомендациями производителя.

Анализ результатов осуществляли на микропланшетном ридере Multiscan EX («Labsystems», Финляндия). Расчет концентрации цитокинов проводили по калибровочной кривой с помощью компьютерной программы. Количество выражали в пикограммах на миллилитр (пг/мл).

Статистическую обработку результатов исследования осуществляли с помощью пакета статистических программ SPSS. Поскольку колебания исследованных цитокинов не подчинялись нормальному закону распределения, для представления количественных данных использовали описательные статистики: Ме (медиана), Q1 (1-й квартиль (25%)) и Q3 (3-й квартиль (75%)). Для всех имеющихся выборок данных применяли непараметрические критерии Крускал — Уоллиса и Манна — Уитни. Различие двух сравниваемых величин считали достоверным с надежностью p>0,95, если вероятность их тождества оказывалась меньше 5%.

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление