Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2011, № 3

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 3'2011

Изменение показателей окислительного стресса и апоптоза нейтрофилов при диффузной и лимитированной формах системной склеродермии

М.В. Ильин, П.А. Мальцева, В.А. Романов, О.А. Хрусталев

Исследовали изменение показателей окислительного стресса и апоптоза нейтрофилов (Нф) в зависимости от формы заболевания у 32 больных системной склеродермией (ССД). Функциональную активность Нф исследовали хемилюминесцентным методом. Для определения экспрессии антигена bak в Нф использовали стрептавидин–биотиновый метод. Обнаружено значительное снижение экспрессии факторов окислительного стресса и апоптоза Нф, а также уменьшение резервного потенциала клеток при диффузной форме ССД в сравнении с лимитированной формой заболевания, которая характеризуется высоким уровнем функциональной активности и резервного потенциала Нф. Выявлена прямая положительная корреляционная взаимосвязь между показателями экспрессии факторов апоптоза и резерва продукции супероксид-аниона Нф. (Цитокины и воспаление. 2011. Т. 1. № 3. С. 79–81.)

Ключевые слова: нейтрофилы, апоптоз, системная склеродермия.

Системная склеродермия (ССД) является прогрессирующим полисиндромным заболеванием, в основе которого лежит поражение соединительной ткани с преобладанием фиброза и сосудистых патологических изменений, сопровождающихся характерными изменениями кожи, опорно-двигательного аппарата, внутренних органов и распространенными вазоспастическими нарушениями [2].

Несмотря на неясность механизмов патогенеза ССД, очевидно, что взаимодействие лейкоцитов, клеток эндотелия и фибробластов играет в нем важную роль [5]. Хемокины, будучи активными участниками воспалительного процесса, способствуют хемотаксису и миграции лейкоцитов через эндотелий в ткани. Увеличение концентрации хемокинов, в том числе IL-8, являющихся хемоаттрактантами и активаторами нейтрофилов, представляется специфическим для ССД и коррелирует с повреждением внутренних органов [4].

В экспериментах на лабораторных животных было показано, что персистенция фиброза при ССД не зависит от текущего нейтрофильного воспаления [6]. Однако поражение сосудистой стенки, в котором принимают участие нейтрофилы, является важным фактором локального и общего патогенеза ССД, при котором наблюдаются пролиферация и деструкция эндотелия, утолщение и гиперплазия интимы, фибриноидные изменения и склероз сосудистой стенки.

Целью данной работы являлось исследование и определение характера взаимосвязи показателей окислительного стресса и апоптоза нейтрофилов при диффузной и лимитированной формах ССД.

Материалы и методы

В исследование были включены 32 пациента с ССД, в том числе 4 (12,5%) мужчины и 28 (87,5%) женщин в возрасте от 18 до 73 лет (в среднем — 39,911,3 года). Для диагностики ССД использовали критерии Американской ревматологической ассоциации (1980). Определение вариантов течения и стадии развития ССД основывалось на классификации Н.Г. Гусевой (1993). Диффузная форма заболевания выявлена в 12 (37,5 %), лимитированная — в 20 (62,5%) случаях. Течение заболевания носило преимущественно хронический характер 26 (81,2%) и соответствовало II стадии патологического процесса. Контрольную группу составили 25 относительно здоровых доноров, сопоставимых по полу и возрасту с группой наблюдения.

Выделение нейтрофилов периферической крови проводили на двойном градиенте плотности фиколла–урографина. После центрифугирования на границах растворов образовывались два кольца клеток, состоящие из мононуклеаров и нейтрофилов. Элементы крови, обладающие более высокой плотностью, оседали на дно пробирки. Для исследования брали клетки второй интерфазы, которую на 95% составляли нейтрофилы. Взвесь клеток дважды отмывали центрифугированием с раствором Хенкса в течение 10 мин при 200 g и доводили до концентрации 5×106/мл. Жизнеспособность фагоцитов, оцениваемая по трипановому тесту, составляла более 90%.

Функциональную активность нейтрофилов исследовали хемилюминесцентным методом. Для усиления хемилюминесценции (ХЛ) использовали люминол, индуцирующий ХЛ пероксида водорода, супероксидного радикала, гидроксил-аниона, аниона гипохлорной кислоты и нитроксильного радикала, а также люцигенин, селективный индикатор супероксид-аниона. О функциональном резерве клеток судили по люминол- (ЛЛ) и люцигенинзависимым (ЛН) коэффициентам активации хемилюминесценции (КА ХЛлл и КА ХЛлн), которые рассчитывали как отношение индуцированного показателя (иХЛлл и иХЛлн) к спонтанному (сХЛлл и сХЛлн). В качестве индуктора кислородзависимого метаболизма нейтрофилов использовали 1×109 взвесь убитых нагреванием клеток S. aureus штамма p-209 [1].

Для определения экспрессии проапоптозного гомолога семейства bcl-2 bak нейтрофилами использовали стрептавидин–биотиновый метод (реагенты «DAKOCytomation», Дания). Исследование проводили в соответствии со стандартным протоколом, осуществляли пермеабилизацию мембран клеток, определяли экспрессию белка bak (bak-положительные нейтрофилы, %). В качестве положительного контроля использовали моноклональные мышиные антитела к гранулоцит-ассоциированному антигену CD15. Для отрицательного контроля применялась разводящая жидкость для антител.

Статистическую обработку данных проводили при помощи пакета прикладных программ Statistica 6.0 (StatSoft Inc., США). Осуществляли проверку нормальности распределения количественных признаков. Производили вычисление медиан и интерквартильных интервалов (Me (25%; 75%)). Для сравнения двух независимых групп по одному признаку применяли критерий Манна — Уитни. Для изучения взаимосвязи двух признаков использовали корреляционный анализ по Спирмену. Критическое значение уровня статистической значимости принимали равным 5%.

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление