Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер 2 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2011, № 3

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 3'2011

Коррекция изменений цитотокинового профиля мышей с индуцированной иммуносупрессией

Е.А. Лебединская, Л.Ф. Лосева, О.В. Лебединская, Н.К. Ахматова, И.Б. Семенова, А.П. Годовалов, М.В. Киселевский

Исследован уровень сывороточных, выработка спонтанных и индуцированных фитогемагглютинином цитокинов мононуклеарными лейкоцитами селезенки мышей при введении циклофосфана, вакцины иммуновак-ВП-4 и их комбинированном воздействии. Установлено, что циклофосфан вызывает снижение спонтанной и индуцированной продукции как провоспалительных, так и противовоспалительных цитокинов, что может рассматриваться как иммуносупрессивный эффект данного цитостатика. Введение вакцины бактериальной природы иммуновак-ВП-4 позволяет корректировать угнетающее действие цитостатика на синтез и секрецию исследованных эндогенных биорегуляторов. При этом продукция цитокинов не только восстанавливается до исходных значений, но в ряде случаев превышает фоновый уровень. Отмечается разная динамика восстановления секреции провоспалительных (в более ранние сроки) и противовоспалительных цитокинов, которая по своему характеру качественно соответствует стимулирующему действию самой вакцины иммуновак-ВП-4. Полученные в настоящей работе данные свидетельствуют о том, что в силу невысокой информативности концентрации цитокинов в сыворотке крови для оценки цитокинового статуса необходимо, наряду с определением содержания сывороточных цитокинов, исследовать их спонтанную и индуцированную продукцию лимфоцитами. Резюмируя вышеизложенное, следует отметить, что для коррекции нарушения цитокинового статуса, обусловленного супрессивным действием цитостатиков, могут быть использованы иммуномодуляторы бактериального происхождения отечественного производства, в частности, вакцина иммуновак-ВП-4. (Цитокины и воспаление. 2011. Т. 10. № 3. С. .)

Ключевые слова: цитотокины, циклофосфан, иммуносупрессия, иммуновак-ВП-4.

Одной из главных особенностей индуцированной химиотерапией иммунодепрессии является истощение T-лимфоцитов. Azuma E. и др. показали, что снижение CD4+ Т-клеток сохраняется в течение 5 лет после химиотерапии [6]. При действии цитостатиков CD8+ Т-лимфоциты восстанавливаются значительно быстрее, чем CD4+ Т-клетки [16]. Bruserud O., Ulvestad E. [9, 10] продемонстрировали, что несмотря на снижение количества T-лимфоцитов при химиотерапии, те клетки, которые переживают данный режим, могут активизироваться и продуцировать цитокины. Такие химиотерапевтические агенты как циклофосфан в малых дозах способны вызывать иммуностимулирующее действие [8, 15, 17–19]. Этот эффект объясняется способностью цитостатиков избирательно ингибировать супрессорную популяцию Т-регуляторных клеток, что, в свою очередь, приводит к активации Th1-лимфоцитов и усилению продукции противовоспалительных цитокинов, например, интерферона γ (IFNγ) [8, 18].

Иммуносупрессию, вызываемую цитостатиками, способны уменьшать некоторые иммуномодулирующие препараты [2, 4, 5, 14]. Среди большого количества иммуномодулирующих средств, предлагаемых отечественными и зарубежными производителями, перспективными являются бактериальные препараты из полисахаридных комплексов, антигенов или лизатов условно патогенных микроорганизмов (рибомунил, бронхо-ваксом, респивакс, поликомпонентная вакцина иммуновак-ВП-4 и др.), а также их синтетические аналоги (ликопид). Эти препараты уже зарекомендовали себя как эффективные средства коррекции вторичных иммунодефицитов.

Однако в настоящее время недостаточно изучен механизм действия различных иммуномодулирующих препаратов бактериального происхождения на систему противоопухолевого надзора в состоянии иммуносупрессии.

Показано, что иммуномодуляторы разной природы оказывают стимулирующее влияние на продукцию цитокинов иммунокомпетентными клетками как в монорежиме, так и в сочетании с введением цитостатиков [1, 3, 11, 13, 20]. По мнению ряда авторов, именно цитокины являются связующим звеном между врожденным и адаптивным противоопухолевым иммунитетом [7, 12].

Целью настоящего исследования было изучение уровня сывороточных цитокинов, а также их спонтанной и индуцированной продукции мононуклеарными лейкоцитами (МЛ) селезенки на фоне индуцированной циклофосфаном иммуносупрессии при воздействии иммуномодулятора вакцины иммуновак-ВП-4.

Материалы и методы

Объекты исследования. Мышам линии СВА (22–26 г) вводили циклофосфан-Лэнс (Россия) по 100 мг/кг веса в 0,2 мл физиологического раствора внутрибрюшинно четырехкратно с интервалом 24 ч. Спустя сутки внутрибрюшинно однократно вводили 200 мкг вакцины иммуновак-ВП-4, разведенной в 0,2 мл изотонического раствора хлорида натрия. Иммуновак-ВП-4 является поликомпонентной вакциной из антигенов условно патогенных микроорганизмов (ГУ НИИВС им. И.И. Мечникова РАМН, г. Москва), которая содержит липополисахарид, ассоциированный с белком наружной мембраны грамотрицательных микроорганизмов, пептидогликан, тейхоевые кислоты и лабильные белковые компоненты стафилококка. Через 4, 24 и 96 ч после введения вакцины у экспериментальных животных и группы интактных мышей под эфирным наркозом извлекали селезенку и пробы периферической крови в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных». В каждую из исследуемых групп (интактные, при монорежимном введении вакцины или циклофосфана, при комплексном введении препаратов) включено по 30 экспериментальных животных.

Выделение МЛ из селезенки мышей линии СВА. Селезенку гомогенизировали, добавляли среду 199 и полученную взвесь спленоцитов центрифугировали при 400 g в течение 30 мин в градиенте плотности фиколла–урогафина («Pharmacia», USA), ρ=1,077 г/см3. МЛ, образовавшие интерфазное кольцо, собирали пипеткой и трехкратно отмывали в среде 199. После каждой отмывки в 10-кратном объеме среды клетки осаждали центрифугированием при 200 g, и их концентрацию доводили до 106 кл/мл.

Определение цитокинового профиля в сыворотке крови мышей линии СВА. Пробы крови для определения сывороточных цитокинов получали из ретроорбитального синуса мышей посредством пункции. Сыворотку отделяли центрифугированием при 400 g в течение 20 мин.Полученную сыворотку замораживали при -70 °С. Уровень цитокинов в пробах определяли твердофазным иммуноферментным методом с использованием тест-систем («Biosource», Belgium) согласно инструкции производителя.

Определение цитокинового профиля в надосадочной жидкости культуры спленоцитов мышей. С целью определения цитокинов в супернатанте культуры МЛ селезенки мышей рассевали в лунки 24-луночных планшетов («Costar», France) в полной культуральной среде в концентрации 106 кл/мл. Для определения индуцированной продукции цитокинов к МЛ добавляли фитогемагглютинин (ФГА) (НПП «ПанЭко», г. Москва) в оптимальной концентрации 5 мкг/мл. Клетки инкубировали в течение 48 ч при 37 °С и концентрации СО2 4,5%. Супернатант интактных и активированных ФГА мононуклеарных лейкоцитов собирали и замораживали при -70 °С. Уровень цитокинов в образцах определяли вышеуказанным способом.

Статистическую обработку данных проводили с использованием t-критерия Стьюдента и критерия Вилкоксона при помощи стандартного пакета статистических программ Windows 2003 (StatSoft 6.0).

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление