Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2011, № 4

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 4'2011

Оценка противовирусной активности препарата пидотимод при герпетической инфекции в эксперименте на животных

И.А. Тузанкина, И.А. Мальчиков, А.В. Петров А.С. Симбирцев, Ю.В. Григорьева, С.Ю. Медведева, И.А. Ольков, М.А. Болков

Проведена оценка противовирусной активности иммунотропного препарата пидотимод in vivo. В результате проведенных исследований выявлен профилактический эффект, выразившийся в предотвращении от заболевания и летального исхода у 86,7% экспериментальных животных, получавших пидотимод. В группе животных, не получавших препарат, погибло 46,7% особей. При этом в группе животных, не получавших препарат, отмечен значительный подъем уровня провоспалительных цитокинов в сыворотке крови, а во второй группе мышей, получивших препарат, — уровня IL-10. (Цитокины и воспаление. 2011. Т. 10. № 4. С. 56–60.)

Ключевые слова: пидотимод, вирус герпеса, клеточные культуры, максимально допустимая концентрация, токсичность, цитотоксичность, противовирусная активность, цитокины.

Известно, что вирус простого герпеса (ВПГ) обладает широкой тропностью и поражает различные системы органов, он способен долгое время находиться в ядре клеток нервных узлов в неактивированном состоянии, находясь даже не в виде ДНК, а в виде транскрипта мРНК [1, 5]. В связи с важной ролью иммунной системы в сдерживании реактивации вируса принято считать, что при лечении хронической герпесвирусной инфекции иммунотропная терапия может играть существенную роль. Иммунотропным препаратом, рекомендованным экспертами ВОЗ для лечения вирусных инфекций, является пидотимод. В исследованиях, предшествующих нашему, была продемонстрирована достоверная клиническая эффективность данного препарата у детей дошкольного возраста, часто и длительно болеющих респираторными вирусными инфекциями [4]. Были выявлены разнонаправленные изменения иммунологических параметров. Однако остается невыясненным вопрос об иммунных механизмах этого эффекта.

В настоящее время интенсивно изучаются механизмы, с помощью которых вирусы могут нейтрализовать активность цитокинов, используя внутриклеточные процессы и межклеточные взаимоотношения для осуществления репликации [2, 7]. В этой связи причины снижения продукции цитокинов моноцитами/макрофагами под действием вируса ВПГ могут быть разнообразны, что требует дальнейших исследований. Нерешенными остаются и вопросы развития заболеваний при инфицировании вирусами герпетической группы. В связи с эим целью данного исследования стал анализ течения герпетической инфекции у лабораторных животных in vivo, в том числе, в условиях иммунотропного воздействия.

Материалы и методы

Экспериментальные исследования проводили на 45 беспородных белых мышах (массой 20–22 г), полученных из питомника-вивария при ОКБ № 1 г. Екатеринбурга. Животных содержали в стандартных условиях лабораторного вивария со свободным доступом к пище и воде. Перед использованием в эксперименте животные проходили двухнедельный карантин и адаптацию в условиях данного вивария. Все исследования выполняли в соответствии с правилами проведения работ по использованию экспериментальных животных (GLP), а также приказом МЗ РФ № 267 от 19.06.03 г.

Для моделирования герпетической инфекции были сформированы следующие группы:

1-я группа (n=15) — мыши, инфицированные внутрибрюшинно ВПГ дозой вируса 4,5 lg ТЦД50/мл (мышиная летальная доза, применение которой вызывает гибель 50 % животных) в объеме 0,2 мл для воспроизведения острой герпесвирусной инфекции (ОГВИ); 2-я группа (n=15) — мыши, инфицированные одновременно с 1-й группой той же дозой вируса в том же объеме. Мышам этой группы давали ежедневно в течение 3 недель иммуномодулятор пидотимод в объеме 0,025 мг/л per os (в перерасчете на массу тела животного); контрольная группа (n=15) состояла из мышей, которым внутрибрюшинно вводили 0,2 мл 0,9 % физиологического раствора.

Для исследования использовали ткани тимуса, легких, головного мозга, печени, почек, селезенки экспериментальных животных с последующим их патолого-морфологическим анализом. Отбор материалов и органов осуществляли в динамике на 1, 3, 6, 9, 11 сутки с момента инфицирования. Мышей выводили из опыта эфирным наркозом в соответствии с этическими правилами оработе с лабораторными животными. Сыворотку крови замораживали и хранили в рефрижераторе (-40 °С).

Анализ цитокинов в сыворотках проводили с помощью коммерческих наборов FlowCytomix (Bender MedSystems) в соответствии с инструкцией изготовителя на проточном цитофлуориметре EPICS XL (Beckman Coulter). В образцах сыворотки в одной параллели анализировали содержание IL-1α, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p70, IL-13, IL-17, IL-18, IL-22, IFNγ и TNFα. Анализ результатов (построение калибровочных кривых и расчет концентраций цитокинов в исследованных образцах) проводили с помощью программы FlowCytomix Pro2.3 (Bender MedSystems).

Образцы органов (легких, печени, головного мозга, почек) обрабатывали по общепринятой методике [3]. Серийные срезы толщиной 4 мкм окрашивали гематоксилином–эозином по методу Ван Гизона. Органы животных фиксировали в 10 % растворе нейтрального формалина и по стандартной методике заливали в парафиновые блоки. Микроскопировали и фотографировали срезы с помощью светооптического микроскопа Axiostar plus (Zeiss).

В качестве иммуномодулятора был использован перепарат имунорикс (пидотимод) производства Доппель Фармацеутици С.Р.Л. Препарат давали в подобранной нами ранее нетоксичной дозе 0,025 мг/л per os (в перерасчете на массу тела животного).

Оценка противовирусной эффективности in vivo используемого лекарственного препарата осуществлена в соответствии с требованиями Фармакологического государственного комитета Российской Федерации [6].

Статистическую обработку результатов проводили с использованием корреляционного анализа. Достоверность различий показателей определяли с помощью t-критерия Стьюдента.

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление