Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2011, № 4

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Врачу общей практики

Номер 4'2011

Роль цитокинов в патогенезе хронической инфекции, вызванной вирусом Эпштейна — Барр

Т.В. Горейко, Н.М. Калинина, Л.Б. Дрыгина

В работе представлены данные исследования показателей интерферонового звена иммунной системы в периферической крови у больных хронической инфекцией, вызванной вирусом Эпштейна — Барр (ХИВЭБ) (n=345). Группа пациентов с ХИВЭБ была сформирована на основании комплексной оценки характерных жалоб, данных анамнеза, клинико-лабораторного исследования. Была изучена взаимосвязь содержания в сыворотке, спонтанной и индуцированной продукции IFNα и IFNγ с различными сочетаниями антител к антигенам ВЭБ. Установлены связи между стадиями жизненного цикла ВЭБ и изменениями показателей врожденного и адаптивного иммунитета. Выявлены изменения в субпопуляционном составе лимфоцитов и продукции интерферонов, которые характерны для Th2 типа иммунного ответа, не эффективного при вирусной инфекции. (Цитокины и воспаление. 2011. Т. 10. № 4. С. 96–100.).

Ключевые слова: вирус Эпштейна — Барр, хроническая инфекция, вирусный капсидный антиген (VCA), ядерный антиген (EBNA-1), ранний антиген (EA), интерферон.

Патогенетическое воздействие вируса Эпштейна — Барр (ВЭБ) заключается в инфицировании клетки человека, восприимчивой к данному вирусу, индуцировании в ней способности к бесконечному делению, с наследованием в каждой дочерней клетке вирусного генома [6, 8].

Пожизненной персистенции ВЭБ в клетках хозяина при активном иммунном ответе способствует «латентная» репликация вируса. Но благодаря эффективному контролю основных факторов противовирусного иммунитета (цитотоксические T-лимфоциты (CTL), натуральные киллерные (NK) клетки, Th1-зависимые механизмы иммунного ответа), хроническая активная форма болезни регистрируется нечасто. Развитие хронической активной формы болезни обусловлено дисбалансом в показателях иммунной системы и ее неспособностью элиминировать вирус из организма [7, 9]. В свою очередь, вирусные белки, способствующие латенции вируса, провоцируют иммунопатологические процессы.

Цитокиновая регуляция, лежащая в основе естественного иммунитета, имеет одно из основных значений при инфекции, вызванной ВЭБ (ИВЭБ) [1, 2]. Механизм, связанный с синтезом IFN 1-го типа, сразу после инфицирования клетки, обеспечивает реализацию противовирусной защиты. Известно, что IFN 1-го типа являются основными противовирусными медиаторами врожденного иммунитета и необходимы для дифференцировки Т-лимфоцитов. Они индуцируют экспрессию костимуляторных молекул на дендритных клетках, которые необходимы для их оптимального взаимодействия с CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитами [4]. IFN 1-го типа обладают прямым внутриклеточным противовирусным действием за счет блокирования транскрипции ДНК вируса. Также они подавляют пролиферацию клеток, предотвращая распространение вируса, активируют NK клетки, усиливают экспрессию молекул MHC I класса на антиген-представляющих клетках, что приводит к активации специфического распознавания вируса Т-лимфоцитами. IFN 1-го типа регулируют развитие специфичных субпопуляций Th, участвуют в развитии и пролиферации В-лимфоцитов, секреции иммуноглобулинов (Ig) и переключении синтеза IgМ на IgG на В-лимфоцитах [4, 5]. Наблюдается блокирование продукции IFNγ NK клетками при ИВЭБ, хотя цитотоксичность данных клеток усиливается. С.А. Кетлинский и соавт. [4] объясняют конкурентные взаимоотношения между IFNα и IFNγ изменением в цитоплазме уровней молекул, которые участвуют в передаче сигналов [4]. Уже на первом этапе инфицирования ВЭБ формируется адекватный местный противовирусный иммунный ответ [3, 10]. Однако, при значительном количестве инфекционного агента с одной стороны, недостаточностью факторов местной иммунной защиты, с другой, в комплексе с другими неблагоприятными факторами происходит дальнейшее развитие инфекции.

Цель настоящего исследования — охарактеризовать интерфероновое звено иммунной системы и выявить связи между параметрами специфического гуморального и клеточного звеньев при ХИВЭБ.

Материалы и методы

Работа выполнена на базе клиники № 1 ФГУЗ «Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины имени А.М. Никифорова» МЧС России (ВЦЭРМ). Обследование больных проводили при их информированном согласии, с соблюдением этических норм в соответствии с требованиями Независимого этического комитета при ВЦЭРМ.

Исследовали 345 пациентов с ХИВЭБ, которые проходили обследование и лечение в клинике ВЦЭРМ с 2008 по 2010 гг. Возраст обследованных пациентов — от 22 до 69 лет (средний возраст — 39,0±11,7 года). Женщины составляли 57 % (n=197), мужчины — 43 % (n=148).

Пациентов с ХИВЭБ включали в исследование на основании комплексной оценки характерных жалоб, данных анамнеза, клинико-лабораторных показателей.

В исследование не включали пациентов с наличием симптомов острой ИВЭБ и атипичных лимфоцитов в крови, а также имеющих сопутствующие аутоиммунные заболевания, клинические проявления и наличие лабораторных маркеров ВИЧ 1-го и 2-го типов, вирусных гепатитов, онкологических заболеваний, больных после химио- или лучевой терапии.

При обследовании пациентов применяли клинико-анамнестический и лабораторные (общеклинический, иммунологический, иммунохимический) методы с последующим обобщением данных собственных исследований, сравнительным анализом используемых методов диагностики ВЭБ, статистической обработкой полученных материалов.

Исследование клеточного звена иммунитета включало определение абсолютного и относительного количества отдельных популяций лимфоцитов. Фенотипирование лимфоцитов проводили путем маркировки с помощью моноклональных антител фирмы «Beckman Coulter» (США) и последующего учета результатов с помощью проточной цитофлуориметрии на аппарате FACScan («Beckman Coulter»).

Из параметров цитокинового звена иммунитета определяли содержание в сыворотке IFNα (реагенты ООО «Протеиновый контур», Санкт-Петербург) и IFNγ (реагенты ООО «Цитокин», Санкт-Петербург), их спонтанную и индуцированную продукцию. В качестве индукторов для клеток крови использовали вирус болезни Ньюкастла с инфекционным титром 8 lg ЭИД/0,2 мл в объеме 10 мкл на лунку (для индукции IFNα), фитогемагглютинин и вирус болезни Ньюкасла с инфекционным титром 8 lg ЭИД/0,2 мл в объеме 10 мкл на лунку (для индукции IFNγ).

Забор крови для исследования субпопуляционного состава лимфоцитов, спонтанной и индуцированной продукции IFN проводили с помощью Vacuette «Greiner Bio-One» (Австрия) с литий-гепарином в качестве антикоагулянта. Пробирку переворачивали несколько раз (для перемешивания с антикоагулянтом) и исследовали в течение 8 ч с момента взятия.

Обнаружение антител к антигенам ВЭБ в сыворотке крови проводили иммуноферментным методом с использованием коммерческих диагностических тест-систем «ВектоВЭБ-VCA-IgM» (ЗАО «Вектор-Бест», г. Новосибирск) для выявления IgM к вирусному капсидному антигену (VCA) ВЭБ. Антитела класса IgG к ядерному антигену (EBNA-1) и раннему антигену (EA) ВЭБ выявляли с помощью тест-системы «ВектоВЭБ-NA-IgG» и «ВектоВЭБ-EA-IgG» производства ЗАО «Вектор-Бест» (г. Новосибирск); антитела класса IgG к VCA ВЭБ — с помощью диагностической иммуноферментной тест-системы «ДС-ИФА-АНТИ-ВЭБ-VCA-G» (ООО НПО «Диагностические системы», Нижний Новгород). Так как в настоящее время не существует Международного стандарта серопозитивности по антителам к ВЭБ (т.е. нет референтной сыворотки с антителами к антигенам ВЭБ), то результаты теста были выражены в форме отношения, называемого индексом позитивности (ИП), который позволял оценить наличие или отсутствие определяемых специфических антител в сыворотке пациента. Для расчета ИП использовали следующую формулу:

ИП = Опио / (ОПок + cut-off),

где ОПио — оптическая плотность исследуемого образца;

ОПок — оптическая плотность отрицательного контроля;

cut-off — уровень отсечения, рекомендованный фирмой-производителем.

Результат оценивали как положительный (+) при ИП больше 1,1.

Объектом исследования служили образцы сыворотки. Взятие крови для анализа осуществляли из локтевой вены утром натощак в вакуумные пробирки Vacuette «Greiner Bio-One» (Австрия) с активатором образования сгустка для ускорения свертывания крови и гелем, обеспечивающим разделение сыворотки и сгустка после центрифугирования. Сыворотку крови получали по общепринятой методике.

Результаты исследований оценивали согласно общепринятым методам статистического анализа. Компьютерную обработку полученных данных, в том числе, их представление в виде графиков, проводили с использованием прикладных программ Microsoft Excel 2007, Statistica 6.0. Учитывая широкий спектр исследуемых показателей, применяли различные статистические методы согласно поставленной задаче, что позволило выявить достоверные различия между сравниваемыми группами и ряд корреляций между признаками.

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление