Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2011, № 4

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 4'2011

Бромелаин повышает иммуномодулирующую активность полисахаридов высших базидиальных грибов

Е.В. Воробейчиков, В.Г. Конусова, М.М. Шамцян, А.С. Симбирцев

В условиях in vitro проведена оценка иммуностимулирующего действия экстрактов пищевых базидиальных грибов на функциональную активность нейтрофилов крови человека, определяемую методом люминолзависимой хемилюминесценции (ЛЗХЛ) при различных концентрациях протеолитического фермента бромелаина. Установлено, что экстракты отдельных видов пищевых базидиальных грибов и их сочетания стимулируют ЛЗХЛ периферической крови человека. Этот эффект усиливается при добавлении к экстрактам грибов бромелаина. Определен оптимальный интервал концентраций бромелаина (3,0–15,0 мг/мл), при котором повышается иммуностимулирующая активность экстрактов пищевых базидиальных грибов. Сочетание β-D-глюканов и бромелаина является перспективным для создания препаратов иммуностимулирующего действия. (Цитокины и воспаление. 2011. Т. 10. № 4. С. 31–36.)

Ключевые слова: пищевые базидиальные грибы, бета-D-глюканы, иммуностимулирующая активность, фермент бромелаин.

Полисахариды высших базидиальных грибов, представленные в основном β-D-глюканами, наряду с такими веществами как липополисахариды, липотейхоевые кислоты, пептидогликаны бактерий, являются классическими «патоген-ассоциированными структурами» (РАМP), распознающимися врожденной системой иммунитета человека и животных [1, 3]. РАМP вызывают активацию системы врожденного иммунитета практически немедленно без предварительной пролиферации, необходимой для реализации реакций адаптивного иммунитета, что делает перспективным их использование в качестве иммуностимуляторов [3, 11]. Однако в отличие от РАМP микробного происхождения. β-D-глюканы пищевых грибов не токсичны, не вызывают осложнений и проявляют иммуностимулирующую активность при различных путях введения [9, 12, 14].

Протеолитический фермент растительного происхождения бромелаин улучшает фармакодинамические эффекты ряда лекарственных веществ и сам обладает иммуномодулирующей активностью, подтверждаемой исследованиями in vitro и in vivo [6, 10]. Вместе с тем, не изучено влияние бромелаина на иммуностимулирующую активность полисахаридов базидиальных грибов, что не позволяет определить целесообразность комбинированного применения этих веществ для создания иммунобиологических препаратов патогенетической направленности.

Целью исследования была оценка в условиях in vitro иммуностимулирующего действия экстрактов пищевых базидиальных грибов на активность фагоцитарной реакции нейтрофилов крови человека при различных концентрациях протеолитического фермента растительного происхождения бромелаина.

Материалы и методы

Изучение фагоцитарной реакции клеток крови проводили с помощью метода люминолзависимой хемилюминесценции (ЛЗХЛ), позволяющего определять функциональную активность клеток периферической крови, в основном нейтрофильного ряда, по интенсивности продукции свободнорадикальных форм кислорода [13].

Для исключения неспецифической активации клеток, связанной с процессом выделения нейтрофильных клеток, все исследования проведены на цельной донорской крови, получаемой путем пункции локтевой вены. В качестве стабилизатора применяли гепарин (20 МЕ/мл).

Для проведения метода ЛЗХЛ использовали реагенты:

1. Люминол(«Serva») — 5-амино-1,2,3,4-тетрагидро-1,4-фталазиндион, гидразид 3-аминофталевой кислоты. Для приготовления базового раствора навеску 1,77 мг люминола растворяли в 10 мл диметилсульфоксида (ДМСО). Базовый раствор хранили при +4 °С. Перед исследованием базовый раствор люминола разводили стерильным раствором Хэнкса в 10 раз. 2. Стерильный раствор Хэнкса («Биолот», Санкт-Петербург).

Исследуемые препараты

1. Препарат зимозан («Sigma»). Приготовление раствора зимозана: 10 мг порошка зимозана растворяли в 10 мл 0,9 % NaCl. Для получения гомогенной взвеси раствор зимозана кипятили в течение 30 мин, затем дважды центрифугировали при 1200 об/мин, после чего аликвотировали по 0,5 мл в микропробирки, которые хранили при -18 °С в течение 1 месяца.

2. Фермент бромелаин (Bromelain SGMV) производства фирмы «Meizhou Hengrun Biology Industry» (Китай). Использовали раствор фермента в концентрациях: 0,05, 0,50, 5,0, 10,0, 15,0, 20,0, 30,0, 40,0 и 50,0 мг/мл.

3. Экстракт гриба вешенки обыкновенной (Pleurotus ostreatus), получен-ный на кафедре технологии микробиологического синтеза Санкт-Петербургского государственного технологического института (технического университета), Россия.

4. Экстракт гриба шиитаке (Lentinus edodes) производства КНР.

5. Экстракт гриба рейши (Ganoderma lusidum) производства КНР.

Приготовление растворов грибных полисахаридов: 1,0 мг грибного экстракта растворяли в 1,0 мл стерильного раствора Хэнкса. Регистрацию хемилюминесценции осуществляли с помощью хемилюминометра Victor-2 фирмы Рribori Оу (Финляндия).

Проведение реакции люминолзависимой хемилюминесценции

В лунки белых непрозрачных 96-луночных плат («Costar») вносили 20 мкл цельной донорской крови, 20 мкл растворов исследуемых препаратов, 40 мкл раствора люминола в концентрации 10-4 М. Раствором Хэнкса доводили объем реакционной взвеси до 200 мкл. Все исследования проводили в трех параллелях.

Платы помещали в термостатируемую кювету хемилюминометра при температуре 37,0 °C. Исследование проводили в течение 1 ч, регистрируя импульсы через каждые 3 мин. Результаты реакции выражали интеграционным показателем «светосуммой» — количеством импульсов в секунду, накапливаемых в течение эксперимента.

Обработку результатов исследования проводили с помощью методов регрессионного и дисперсионного анализа, представленного в статистических пакетах программ Statgraphics Plus и SPSS for Windows [2, 4, 5].

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление