Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер 2 номер
3 номер 4 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2012, № 1

Подписаться на 2018 год

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 1'2012

Оценка противовирусной активности препарата пидотимод при герпетической инфекции в эксперименте на клеточных культурах

И.А. Тузанкина, И.А. Мальчиков, Ю.В. Григорьева, С.Ю. Медведева, И.А. Ольков, М.А. Болков

Проведена оценка цитотоксичности и противовирусной активности иммуномодулирующего препарата пидотимод. В результате проведенных исследований получены данные о том, что указанный препарат не токсичен для клеточных культур в максимально переносимой концентрации менее 25 мкг/мл, и в данном разведении способен задерживать развитие цитопатического действия вируса простого герпеса на клеточную культуру Vero invitro. (Цитокины и воспаление. 2012. Т. 11. № 1. С. .)

Ключевые слова: пидотимод, вирус простого герпеса (ВПГ), клеточные культуры, максимально переносимая концентрация (МПК), токсичность, цитотоксичность, противовирусная активность.

В настоящее время вирусные инфекции являются наиболее распространенным этиологическим фактором инфекционных заболеваний человека. Среди них высокое внимание уделяется вирусу простого герпеса (ВПГ), поскольку известно, что он вызывает латентные и хронические инфекции, которые влияют на течение других заболеваний и, в целом, на качество жизни людей. Для лечения вирусных инфекций часто применяют иммуномодулирующие препараты. Перспективным иммуномодулирующим препаратом, рекомендованным ВОЗ при лечении вирусных инфекций, является пидотимод, в отношении которого заявлено, что он обладает и противовирусной активностью. Однако механизм противовирусного действия препарата до сих пор не определен.

В решении проблемы направленного подавления репродукции возбудителей инфекционных заболеваний большое значение имеет поиск профилактических и лекарственных препаратов, характеризующихся низкой токсичностью и широким спектром противовирусного действия. Учитывая, что вирусы являются строго внутриклеточными паразитами, одним из основных требований, предъявляемых к антивирусным ингибиторам, является избирательное подавление репродукции вируса без побочного действия на жизненные функции клеток хозяина.

Как известно, оценку токсичности лекарственных препаратов на первом этапе доклинических исследований проводят в культуре клеток и на лабораторных животных. Как правило, в процессе исследования токсичности соединений исследуют влияние различных концентраций препарата на морфологию клеток. Однако, в связи с тем, что различные типы и линии клеток неодинаково чувствительны к воздействию противовирусных препаратов, оценку их эффективности нередко проводят с использованием нескольких типов и линий клеток [2, 5]. Это позволяет более достоверно осуществлять оценку токсичности существующих и новых лекарственных соединений.

Следует отметить, что большинство токсических агентов действует на клетку путем вмешательства в молекулярные механизмы гомеостаза. Это действие может выражаться в целом наборе эффектов, которые включают изменения фундаментальных клеточных реакций, определяющих, в свою очередь, функции конкретного органа-мишени. Мембраны клеток являются закономерной мишенью повреждающего действия токсикантов, а увеличение проницаемости плазматической мембраны, приводящее к деструктивным изменениям, является универсальным механизмом цитотоксичности. Поэтому наиболее простым и доступным методом оценки цитотоксичности является визуальное наблюдение за состоянием клеток с помощью светового микроскопа при малом увеличении.

Исходя из вышесказанного, целью нашего исследования стала оценка токсичности и противовирусной активности препарата пидотимод на культуре клеток при герпетической инфекции.

Материалы и методы

При определении цитотоксичности тестируемого препарата и определении его влияния на вирусную активность были использованы перевиваемые культуры клеток почек зеленых мартышек Vero-E6, почки эмбриона свиньи (СПЭВ), а также диплоидная культура клеток ЛЭЧ 4-(81) с плотностью 200–250 тыс./мл. В эксперименте инфицировались только клетки культуры Vero-E6.

В качестве ростовой среды и среды поддержания использовали полусинтетическую среду (ПС-4) на растворе Хенкса, содержащую 7,5 и 2 % сыворотки крупного рогатого скота, соответственно. По окончании формирования сплошного монослоя клеток ростовую среду удаляли, вносили свежую питательную среду, содержащую различные концентрации исследуемых препаратов, и помещали в термостат для наблюдения в течение 3–5 суток при температуре 37,0±0,5 °С. С помощью светового микроскопа наблюдали за состоянием монослоя клеток, регистрируя развитие частичной или полной деструкции монослоя клеток, повреждение отдельных клеток, образование клеточного синцития. Контролем являлись пробирки с монослоем, в которые была внесена поддерживающая среда без препарата.

В качестве тестируемого препарат был выбран имуномодулятор имунорикс (пидотимод) производства Doppel Farmaceutici, S.R.L. (Италия) [3]. Оценка его противовирусной эффективности invitro осуществлена в соответствии с требованиями Фармакологического государственного комитета Российской Федерации [4].

Для реакции иммунофлуоресценции были использовали наборы реагентов производства НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи (Москва): флуоресцирующие иммуноглобулины к антигену ВПГ. Мазки обрабатывали по общепринятой методике [6]. Просмотр препаратов проводили на люминесцентном микроскопе «Люмам МБИ-4» при 900-кратном увеличении. Положительный результат регистрировали, если в препарате содержалось не менее трех клеток с флуоресцирующими включениями. Интенсивность свечения при развитии герпетической инфекции оценивали по 4-х балльной шкале для определения активности инфекционного процесса [1, 7]. Статистическую обработку результатов проводили с использованием корреляционного анализа. Достоверность различий показателей определяли с помощью t-критерия Стьюдента.

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!


Начата подписка на 2018 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление