Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2012, № 1

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 1'2012

Изучение влияния местного применения рекомбинантного человеческого интерлейкина-1β на репарацию язвенных повреждений слизистой оболочки желудка

Е.А. Варюшина, Г.В. Александров, Т.А. Сазонова, А.С. Симбирцев

Интерлейкин (IL)-1 — один из ключевых цитокинов развития воспалительного и иммунного ответов. IL-1 может регулировать заживление повреждений слизистой оболочки желудка и оказывать влияние на процессы воспаления и репарации in vitro и in vivo. Целью данного исследования стало изучения местного действия IL-1β на заживление язвенных поражений желудка в эксперименте. Язвы СОЖ индуцировали местной аппликацией уксусной кислоты, IL-1β вводили в желудок после образования язв. Курсовое введение IL-1β в дозе 100 нг/мл приводило к уменьшению площадей язв СОЖ. Данные планиметрического исследования подтверждались гистологическим анализом биоптатов язв СОЖ. Подсчет макрофагов в срезах показал, что наблюдалась тенденция к увеличению количества макрофагальных клеток под действием IL-1β. После применения IL-1β было обнаружено значительное увеличение общего количества нейтрофилов и числа активных нейтрофилов в подслизистой основе СОЖ по сравнению с группой плацебо. Оценка количества лейкоцитов и подсчет формулы периферической крови не выявили различий между группами, получавшими IL-1β или плацебо. Таким образом, местное применение IL-1β приводило к усилению репаративных процессов в СОЖ. (Цитокины и воспаление. 2012. Т. 11. № 1. С. 64–69.)

Заживление повреждений слизистой оболочки желудка (СОЖ) регулируется многими факторами, центральную роль в нем играют цитокины. Значительную роль в процессе репарации повреждений СОЖ играет интерлейкин (IL)-1. IL-1 является одним из ключевых провоспалительных цитокинов, обладает широким спектром активностей и рецепторами практически на всех клетках организма [2]. Основными источниками IL-1 в области язвы желудка являются моноциты/макрофаги, а также фибробласты в дне язвы [8]. На ранних стадиях воспаления под действием IL-1 происходит индукция продукции основных хемотактических факторов для нейтрофилов — IL-8 и макрофагального воспалительного белка 2 (MIP-2), а также фактора некроза опухоли альфа (TNFα), и активация функций лейкоцитов, опосредованная этими медиаторами. Нейтрофилы первыми мигрируют в раневой очаг и, в первую очередь, обеспечивают очищение очага воспаления от микробов. Затем в воспалительном очаге появляются макрофаги, которые становятся основным источником цитокинов и ростовых факторов. IL-1 стимулирует выработку ростовых факторов, необходимых на разных этапах репарации повреждений СОЖ, а также коллагена I и III типов [8].

IL-1 способен изменять биологическую активность практически всех клеточных типов эпителия желудка in vitro. В культуре клеток наблюдается дуализм действия IL-1, который является как стимулятором, так и ингибитором продукции соляной кислоты, что может оказывать влияние на процесс репарации СОЖ [3, 11]. Эти эффекты IL-1 опосредуются специфическими рецепторами к IL-1 на поверхности практически всех типов эпителиальных клеток [6, 7, 12].

В ряде работ показано значение IL-1β в процессах репарации и регенерации желудочного эпителия. Так, при внутрибрюшинном введении IL-1 обладает мощным антисекреторным и антиопорожняющим эффектом и оказывает значительное протективное воздействие при индукции язвы желудка [6]. IL-1 предотвращает некроз СОЖ, вызванный этанолом, и предохраняет СОЖ от эрозии после введения аспирина, увеличивает синтез простагландина Е2 (ПГЕ2) слизистой желудка на 111 %. Внутривенное введение IL-1β больным с язвами желудка продемонстрировало высокую эффективность препарата [1]. Однако в литературе отсутствуют данные о влиянии местного использования IL-1 на репарацию поражений СОЖ. В связи с этим, целью данного исследования стало изучения местного действия IL-1β на заживление язвенных поражений желудка в эксперименте.

Материалы и методы

Эксперименты проведены на самках крыс породы Wistar (питомник «Рапполово», Россия) массой 200 г. Модель язвы у крыс, вызванной местной аппликацией кислоты, была выполнена в соответствии с методикой [10]. За сутки до опыта крыс лишали корма, но оставляли свободный доступ к воде. Под эфирным наркозом вскрывали брюшную полость, на желудок накладывали пинцет с кольцами диаметром 6 мм на концах браншей. В образовавшуюся полость с помощью иглы вводили, а затем откачивали 60 % уксусную кислоту. Преимущество данного метода в том, что он стандартизует площадь и силу поражения и предотвращает массированное поражение СОЖ. Затем на разрез в брюшной стенке накладывали швы, крысы получали доступ к воде и корму. День операции обозначали как 1-й день опыта.

Рекомбинантный человеческий IL-1β (ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России) растворяли в 4 % растворе соды и вводили через желудочный зонд в объеме 1 мл. Предварительные эксперименты in vitro показали, что в данном растворе IL-1β сохраняет свою активность на время, достаточное для опыта. Раствор соды без препарата использовали в качестве плацебо. IL-1β применяли в двух дозах: 10 или 100 нг/мл. Использовали две схемы введения IL-1β: однократное, когда препарат применяли один раз на 3-и сутки после индукции язв, или курсовое, когда IL-1β вводили ежедневно по одному разу в день (всего три введения) на 3-и, 4-е и 5-е сутки после операции. В динамике производили забор крови из хвоста. На 6-е сутки после операции крыс усыпляли летальной дозой эфира, желудки вырезали, промывали физиологическим раствором, наполняли их 5 мл 10 % формалина, перевязывали пищевод и двенадцатиперстную кишку и фиксировали 2 ч. Затем желудок вскрывали по большой кривизне, фотографировали цифровой камерой, изображения переносили на компьютер, калибровали и измеряли площадь язв с помощью программы Image J.

Для гистологического исследования иссекали область поражения с участком интактной ткани. Биоптаты фиксировали в формалине и заливали в парафин. Готовили срезы, проходившие через центральную часть язвы, и окрашивали гематоксилином–эозином. Срезы изучали в световой микроскоп DMLB (Leica, Германия), микрофотографии получали с помощью цифровой камеры DC 300 (Leica, Германия). Для морфометрических исследований препараты фотографировали, калибровали и измеряли максимальную ширину язвенных дефектов с использованием программы Image J.

Для гистохимических исследований биоптаты фиксировали в 4 % формальдегиде, отмывали в фосфатно-солевом буфере (рН 7,2 7,4), затем в буфере с 20 % сахарозы и замораживали в OCT (Sakura, Япония) в жидком азоте. Изготавливали криостатные срезы толщиной 6 мм на криостате CM 1510-1 (Leica, Германия), срезы монтировали на стекла Super Frost Plus (Mentzel, Германия), высушивали на воздухе, при необходимости хранили при -20 °С. Для выявления нейтрофилов проводили гистохимическую реакцию на миелопероксидазу (МПО) с использованием 3,3'- диаминобензидин тетрагидрохлорида (Fluka, Швейцария) по стандартной методике. Продукцию эндогенной перекиси водорода выявляли как описано ранее [5]. Цитоплазма положительных клеток окрашивалась в коричневый цвет. Для подсчета макрофагов проводили реакцию выявления неспецифической эстеразы с использованием 1-нафтилацетата (Serva, Германия) и прочного синего B (Sigma, Англия) в модификации G. Gomori (1952). Положительные клетки имели черное окрашивание в цитоплазме. Ядра клеток докрашивали гематоксилином Каррацци («Биовитрум», Россия) и препараты заключали в глицерин–желатину. Подсчитывали среднее количество клеток в поле зрения при увеличении в 400 раз, при этом просматривали, в среднем, по 5 срезов каждого биоптата, учитывали клетки отдельно в собственной пластинке и в подслизистой основе СОЖ.

Оценку количества лейкоцитов и подсчет формулы периферической крови проводили три раза в динамике. Общее количество лейкоцитов крови подсчитывали в камере Горяева с красителем Тюрка. Лейкоцитарную формулу крови подсчитывали на мазках, окрашенных по методу Романовского — Гимза, под микроскопом с использованием масляной иммерсии.

При проведении статистической обработки подсчитывали среднее значение и ошибку среднего (M±m). Группы сравнивали с использованием t-теста Стьюдента и критерия Манна — Уитни.

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление