Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2012, № 1

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 1'2012

Влияние холестерина и агонистов PPAR на продукцию TNFα, TGFβ и IL-10 в макрофагах в динамике зимозанового перитонита у мышей

М.И. Душкин, О.М. Долганова, М.И. Часовских, Я.Ш. Шварц

Холестерин стимулировал продукцию TNFα и TGFβ, но угнетал продукцию IL-10 в макрофагах, полученных на ранних и поздних стадиях зимозан-индуцированного перитонита. Неожиданным оказалось, что агонист PPARγ розиглитазон повышал синтез TNFα и TGFβ на 1-е сутки воспаления. Агонист PPARα безафибрат, агонист PPARβ/δ GW0742 и роcиглитазон повышали продукцию TGFβ и IL-10 только на 14-е сутки. На 7-е сутки после введения зимозана все три агониста индуцировали повышение уровня TNFα, а безафибрат и росиглитазон угнетали продукцию TGFβ. Таким образом, холестерин оказывал провоспалительное влияние на макрофаги на протяжении всего периода зимозанового воспаления, в то время как эффект агонистов PPAR изменялся в зависимости от фазы воспалительной реакции, что, вероятно, отражает изменения внутриклеточного уровня PPAR в макрофагах в динамике воспаления. (Цитокины и воспаление. 2012. Т. 11. № 1. С. 80–85.)

Ключевые слова: агонисты PPAR, холестерин, цитокины, макрофаги, воспаление.

Эндогенные лиганды рецепторов, активируемых пролифераторами пероксисом (PPAR), и холестерин играют важную роль в регуляции иммунного ответа в динамике воспаления, выступая как модуляторы в сложной сети взаимосвязанных сигналов, направленных на формирование фенотипа и функциональной активности макрофагов. Как известно, сенсоры жирных кислот PPAR и их эндогенные лиганды участвуют в регуляции липидного обмена и одновременно выполняют функцию контроля врожденного и приобретенного иммунного ответа [4]. В нормальных условиях агонисты PPAR проявляют противовоспалительное действие, стимулируя сумоилирование PPAR, которое обеспечивает заякоривание комплексов PPAR с корепрессорами в области сайтов связывания транскрипционных факторов NF-κB и АР-1, препятствуя экспрессии и продукции цитокинов. В модели острого перитонита, вызванного введением зимозана, нами было показано, что на ранних этапах воспаления происходит угнетение экспрессии и ДНК-связывающей активности PPAR в воспалительных макрофагах [1]. Ранее в исследованиях, проведенных в основном на перевиваемых линиях макрофагов, показана способность синтетических лигандов PPAR подавлять экспрессию и продукцию провоспалительных цитокинов [10]. Однако их влияние на секрецию цитокинов в макрофагах при воспалении в условиях подавления активности ядерных рецепторов остается неизученным.

Три изоформы PPAR и две изоформы Х-рецепторов печени LXR могут взаимно активировать друг друга в результате наличия отвечающих элементов в промоторных последовательностях генов PPAR и LXR и стимулировать экспрессию генов, контролирующих содержание холестерина в макрофагах [4]. Классическая активация макрофагов (фенотип М1) характеризуется не только подавлением функций PPAR и LXR, но и активацией синтеза холестерина и ростом его внутриклеточной концентрации [3]. Хотя роль макрофагального холестерина в активации воспалительных процессов широко представлена в литературе, недостаточно данных о его прямом влиянии на секрецию цитокинов в макрофагах в динамике воспаления.

Цель работы состояла в исследовании влияния агонистов PPARα безафибрата, PPARγ росиглитазона и PPARβ/δ GW0742 и холестерина на продукцию TNFα, TGFβ и IL-10 в макрофагах, полученных в ранние (1-е и 3-и сутки) и поздние (7-е и 14-е сутки) после развития у мышей абдоминального воспаления, индуцированного зимозаном А.

Материалы и методы

В экспериментах использовали мышей-самцов линии C57Bl/6, содержавшихся на стандартной диете в виварии Института клинической иммунологии СО РАМН (г. Новосибирск).Асептическое воспаление вызывали внутрибрюшинным введением зимозана А («Sigma», США) в дозе 80 мг/кг массы тела в 0,5 мл 0,05 М фосфатного буфера, содержащего 0,9 % NaCl (PBS). Эмульсию холестерина («Sigma-Aldrich») в PBS получали после ультразвуковой обработки взвеси в PBS и вводили внутрибрюшинно в дозе 2 г/кг массы тела за 30 мин до введения зимозана. Контрольным мышам внутрибрюшинно вводили эквивалентную дозу холестерина в 0,2 мл PBS без введения зимозана. Животных декапитировали через 1, 3, 7 и 14 суток после введения зимозана. Каждая группа включала 6 животных.

Перитонеальные макрофаги получали из перитонеального лаважа и культивировали в 24-луночных планшетах Costar (США) в концентрации 1×106 клеток в 1 мл среды RPMI-1640 c добавлением 10 мМ HEPES («Sigma-Aldrich»), 2 мМ L-глутамина («Sigma-Aldrich»), 100 мкг/мл гентамицина и 10 % эмбриональной телячьей сыворотки (ISN) во влажной атмосфере с 5 % СО2 при 37 ºС в течение18 ч в присутствии 5 мкМ синтетических агонистов PPAR. В качестве агонистов PPARα использовали безафибрат («Sigma-Aldrich»), PPARγ — росиглитазон («Cayman Chemical») и PPARβ/δ — GW0742 («Cayman Chemical»). Предварительно холестерин и агонисты PPAR разводили в абсолютном спирте и растворы вводили в культуральную среду в объеме 10 мкл спирта/мл среды. Супернатанты клеточных культур и перитонеальный лаваж хранили в замороженном состоянии при -60 ºС. После инкубации и отбора среды в планшетных лунках определяли концентрацию клеточного белка методом Бредфорда.

Определение концентрации цитокинов TNFα, TGF-1β1 и IL-10 в супернатантах и перитонеальном лаваже проводили с использованием наборов для твердофазного иммуноферментного анализа фирмы «R&D Systems Inc.» (США) в соответствии с методикой, предложенной производителем.

Все полученные данные представлены в виде средней и стандартной ошибки средней. Достоверность различий (р<0,05) сравниваемых средних значений оценивали с помощью t-критерия Стьюдента, используя статистический пакет Statgraphics.

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление