Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер 2 номер
3 номер 4 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2012, № 1

Подписаться на 2018 год

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 1'2012

Экспрессия маркеров адгезии CD62L, CD44 и CXCR4 на NK-клетках при онкологических заболеваниях

Ю.В.Перфильева,Н.Абдолла, Е.А.Кустова, Н.Т.Уразалиева, С.Х.Баишева,А.Т.Аубакирова,Н.Н.Беляев,Г.К.Закирьянова

Проведен сравнительный анализ экспрессии молекул адгезии CD44, CD62L, CXCR4 на циркулирующих натуральных киллерных (NK) клетках у здоровых доноров и онкологических больных. Показано, что у онкологических больных, при общем увеличениии содержания NK-клеток в периферической крови, снижается процент NK-клеток, экспрессирующих на своей поверхности маркер CD62L, отвечающий за роллинг клеток на эндотелии сосудов. В отличие от здоровых доноров у NK-клеток больных раком наблюдали нарушение процесса интернализации рецептора CXCR4 в ответ на воздействие SDF-1. В статье обсуждается один из возможных механизмов нарушения миграции NK-клеток периферической крови онкологических больных в строму опухоли. (Цитокины и воспаление. 2012. Т. 11. № 1. С. 86–90.)

Ключевые слова: натуральные киллерные клетки, онкологическое заболевание, L-селектин, CD44, СХСR4.

Ключевые слова: натуральные киллерные клетки, онкологическое заболевание, L-селектин, CD44, СХСR4.

Натуральные киллерные (NK) клетки составляют третью по численности популяцию лимфоидных клеток. Большая часть NK-клеток локализована в периферической крови, лимфатических узлах, селезенке и костном мозге [7], но после получения различных сигналов они способны мигрировать к месту развития иммунного ответа. И хотя многочисленные исследования подтвердили способность NK-клеток распознавать и уничтожать раковые клетки invitro, цитотоксический потенциал клеток не всегда реализуется invivo. Иммуногистохимические исследования показывают, что NK-клетки, при достаточно высоком их содержании в крови онкологических больных [1], не обнаруживаются в соответствующем большом количестве в ткани прогрессирующих новообразований, за исключением некоторых ренальных карцином [9, 14]. Степень инфильтрации опухоли NK-клетками имела прогностическое значение при карциноме желудка, колоректальной карциноме и карциноме легких [9, 14]. Так, более высокий уровень NK-клеточной инфильтрации коррелировал с лучшим прогнозом, подтверждая, что для эффективного противоопухолевого ответа NК-клетки должны быть локализованы в месте опухоли [9, 14].

Миграция иммунокомпетентных клеток к тканям-мишеням — сложный многоэтапный процесс, который включает в себя каскад последовательных взаимодействий между лейкоцитами и клетками эндотелия: роллинг в потоке крови, адгезию к эндотелиальным клеткам, трансмиграцию из сосуда в ответ на хемотактический сигнал к очагу его происхождения. Роллинг лейкоцитов опосредуется адгезивными молекулами из семейства селектинов: Р-селектином и Е-селектином, которые экспрессируются на поверхности клеток эндотелия, и L-селектином (CD62L), который экспрессирутся на поверхности лейкоцитов. Кроме того, исследования показали, что связывание L-селектина со своим лигандом glycosylation-dependent cell adhesion molecule-1 (GlyCAM-1) ведет к увеличению аффинности интегрина lymphocyte function-associated Ag 1 (LFA-1). LFA-1 отвечает за адгезию лимфоцитов к клеткам эндотелия сосудов. Таким образом, L-селектин-зависимый сигнальный путь задействован не только в роллинге, но его активация также способствует миграции лимфоцитов из кровеносных сосудов в ткань [13].

Значительная роль молекулы CD44 в клеточной миграции была показана для многих типов клеток, включая зрелые Т-клетки, В-клетки, гранулоциты, макрофаги. СD44 отвечает за связывание с компонентами тканевого матрикса (коллагеном, фибронектином, гиалуронаном, ламинином), обеспечивая миграционную активность клеток [4]. Биологическая функция CD44 связана также с активацией лимфоцитов [12].

На последнем этапе хоуминга лимфоцитов к тканям-мишеням, в том числе, пораженным опухолью у онкологических больных, решающую роль играют хемокины и их рецепторы, в частности, трансмембранный рецептор CXCR4, связывающийся со специфическим лигандом, молекулой stromal-derived factor (SDF-1). В норме SDF-1 вырабатывается стромальными клетками многих тканей. Экспрессия SDF-1, как и его рецептора, повышается при гипоксии и механических травмах, что приводит к усиленной миграции в зоны повреждения СD34+ клеток-предшественников [11]. В последнее время появляется все больше экспериментальных доказательств того, что не только нормальные клетки организма, но и опухолевые клетки способны секретировать SDF-1 [2]. Обнаружена секреция SDF-1 многими опухолями (рак легких, почек, печени, простаты, щитовидной железы, глиобластома и др.) [10]. SDF-1, вырабатываемый раковыми клетками, может быть хемоаттрактантом для Т-клеток и опосредовать Т-клеточный противоопухолевый ответ [6].

Maghazachi A.A.и его лаборатория показали, что CXCR4 в норме экспрессируется на 57 % циркулирующих NK-клеток [8]. Вопрос об экспрессии CXCR4, а также адгезивных молекул CD62L и CD44 на поверхности NK-клеток онкологических больных остается открытым.

Цель исследования: дать сравнительную характеристику экспрессии маркеров адгезии (CD44, CD62L, CXCR4) NK-клеток периферической крови онкологических больных и здоровых доноров (ЗД).

Материалы и методы

В работе использованы образцы периферической крови 14 ЗД и 22 первичных операбельных онкологических больных, находившихся на лечении в КазНИИ онкологии и радиологии МЗ РК. У 68 % больных диагностирован рак легкого II, III стадии. У остальных больных выявлены другие формы злокачественных заболеваний (рак эндометрия, средостения, почек, пищевода, гортани, околоушной слюнной железы). Диагноз заболеваний устанавливали на основании характерных клинических признаков и лабораторных исследований по общепринятым критериям (КазНИИ онкологии и радиологии МЗ РК). Формирование контрольной группы проводили с максимально возможным соответствием экспериментальной группе по возрасту (онкологические больные в возрасте 25–68 лет и ЗД 26–64 лет) и гендерному составу (мужчины —60 %, женщины — 40 %). Забор крови осуществлял квалифицированный медицинский персонал с информированного согласия пациентов. Периферическую кровь собирали натощак из локтевой вены в объеме 10 мл в стерильные пробирки с антикоагулянтом ЭДТА.

Для получения NK-клеток цельную периферическую кровь наслаивали на Histopaque-1077 (Sigma-Aldrich, Германия) и центрифугировали 20 мин при 1400 g при 20 °С. Мононуклеарные клетки интерфазного кольца отмывали 20-кратным объемом среды RPMI-1640 (Sigma, Германия), окрашивали антителами NK Cell Isolation Kit human (Miltenyi Biotech, Германия) и путем негативной селекции на иммуномагнитном сепараторе Vario MACS (Myltenei Biotech, Германия) выделяли обогащенную фракцию NK-клеток. Чистоту клеток подтверждали проточной цитофлуориметрией.

Оценку фенотипических характеристик NK-клеток проводили на проточном цитофлуориметре Facs Calibur (BD Bioscience, США). Клетки метили моноклональными антителами к CD56, CD3, CD44, CD62L, CXCR4 (BD Bioscience, США), конъюгированными с флуоресцентными красителями, согласно прилагаемым к ним инструкциям. При цитоплазматическом окрашивании CXCR4 клетки после мечения поверхностных маркеров фиксировали, затем проводили пермеабилизацию cогласно прилагаемой к набору для внутриклеточного мечения инструкции фирмы-производителя. Антитела к CXCR4, меченные фикоэритрином (РЕ), добавляли к клеточному осадку, инкубировали 30 мин при 4 °С и после отмывки анализировали на проточном цитофлуориметре.

Для оценки изменений поверхностной и цитоплазматической экспрессии CXCR4 после воздействия SDF-1 (PeproTech, Израиль) выделенные иммуномагнитной сепарацией NК-клетки (2×106 кл/мл) инкубировали с SDF-1 (1000 нг/мл) в RPMI-1640 при 37 °С и 5 % СО2 в течение разного времени, затем после отмывки проводили мечение поверхностных и цитоплазматических молекул CXCR4 антителами и анализировали на проточном цитофлуориметре.

Полученные данные обрабатывали методами математической статистики, используя прикладную программу Microsoft Excel. Вычисляли среднюю арифметическую, среднюю квадратическую ошибку средней арифметической и достоверность различия средних (р), используя функцию ТТЕСТ и метод связанных выборок.

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!


Начата подписка на 2018 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление