Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер 2 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2012, № 1

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 1'2012

Особенности продукции интерферона γ при туберкулезе легких

Т.Ю. Салина, Т.И. Морозова

Цель работы — поиск новых критериев диагностики и оценки характера течения туберкулезного процесса на основе изучения продукции интерферона γ (IFNγ). Изучали продукцию IFNγ у 34 больных активным туберкулезом легких в разных биологических субстратах (сыворотке крови, супернатантах культур периферических мононуклеарных клеток и неразделенной крови) в зависимости от особенностей течения туберкулезного процесса. Установлено, что у больных тяжелым и осложненным течением туберкулезного процесса наблюдается значительное угнетение индуцированной специфическими антигенами микобактерий туберкулеза (M. bovis, H37Rv, ESAT-6) продукции IFNγ в культурах мононуклеарных клеток или цельной крови. Изучение продукции IFNγ может быть полезно для понимания патогенеза туберкулеза и оценки характера течения туберкулезного процесса. (Цитокины и воспаление. 2012. Т. 11. № 1. С. 96–100.)

Ключевые слова: туберкулез, интерферон гамма, диагностика.

В иммунной защите от туберкулезной инфекции велико значение Т-клеточного иммунитета. Основную роль берут на себя СD4+ Т-клетки, которые, по данным ряда исследователей, могут контролировать более 90 % внутриклеточных микобактерий туберкулеза [5, 6, 9, 12]. IFNγ — продукт активированных Т-лимфоцитов и принципиальный медиатор макрофагальной активности и устойчивости к внутриклеточным патогенам [3, 9, 15]. Он обладает большим спектром противомикробного действия, стимулирует экспрессию антигенов тканевой совместимости классов I и II, усиливает цитотоксические реакции, опосредованные Т-лимфоцитами и NK-клетками [13]. Многочисленными экспериментальными исследованиями показано, что недостаточная продукция IFNγ ведет к неспособности организма ограничить рост и размножение внутриклеточных микобактерий [4, 9, 11]. Мыши, лишенные гена, кодирующего продукцию IFNγ, не способны активировать макрофаги и бороться с туберкулезной инфекцией [2]. Однако несмотря на большое число научных исследований в этой области, роль IFNγ в человеческом организме остается сложной и недостаточно изученной проблемой [5, 7, 8, 10]. Нам представляется актуальным изучение особенностей продукции IFNγ в разных биологических субстратах у больных туберкулезом во взаимосвязи с клиническими проявлениями болезни.

Цель работы — поиск новых критериев диагностики и оценки характера течения туберкулезного процесса на основе изучения продукции IFNγ.

Материалы и методы

Обследованы 34 пациента (10 мужчин, 24 женщины) в возрасте от 19 до 75 лет с впервые выявленным, преимущественно инфильтративным туберкулезом легких (61,8 %). Пациенты были распределены на 2 группы в зависимости от особенностей течения туберкулезного процесса. 1-ю группу (n=16) составили больные с благоприятно протекающим туберкулезом, с ограниченным поражением легочной ткани и без выраженных симптомов интоксикации. У всех пациентов 1-й группы распространенность туберкулезного процесса не превышала 1–2 сегмента, деструкции в легочной ткани выявлены у 4 (25 %), бактериовыделение — у 3 (18,8 %) пациентов. Слабо выраженный интоксикационный синдром наблюдали у 7 (43,8 %) человек, бронхолегочные проявления — у 6 (37,5 %). Во 2-ю группу (n=18) были включены пациенты с тяжелым прогрессирующим течением туберкулезного процесса, распространенным поражением легочной ткани и выраженным интоксикационным синдромом. Распространенные и деструктивные процессы в легочной ткани с бактериовыделением были у всех пациентов этой группы (100 %). Интоксикационный синдром (слабость, лихорадка, потливость, потеря массы тела) выявлен у 16 (88,9 %) человек, бронхолегочный синдром — у 18 (100 %) человек. У 16 (88,9 %) пациентов 2-й группы было осложненное течение туберкулезного процесса в виде геморрагического синдрома, экссудативного плеврита, легочно-сердечной и дыхательной недостаточности, внелегочных локализаций туберкулеза. Группу контроля составили 17 здоровых лиц, положительно реагирующих на туберкулин.

У всех пациентов определяли продукцию IFNγ твердофазным иммуноферментным методом (тест-система ООО «Цитокин», Cанкт-Петербург) в разных биологических субстратах (сыворотке крови, супернатантах культур мононуклеарных клеток и цельной неразделенной периферической крови). Супернатанты культур мононуклеарных клеток получали путем краткосрочного (24 ч) культивирования мононуклеаров, выделенных из периферической венозной крови на градиенте плотности фиколла урографина (#rho;=1,077 г/см3, при 200 g). Культивирование клеток осуществляли в среде RPMI (Flow Laboratories), содержащей 10 % инактивированной нагреванием эмбриональной телячьей сыворотки, 2 мМ глютамина и по 100 ЕД/мл пенициллина и стрептомицина при t=37 °С в атмосфере повышенной влажности и СО2. Изучали спонтанную и индуцированную продукцию IFNγ. В качестве специфического стимулятора использовали М. bovis (BCG), предварительно культивированные на среде Левенштейна — Йенсена, в рабочей концентрации 50 мкг/мл.

Супернатанты культур цельной крови получали путем культивирования в течение 48 ч неразделенной гепаринизированной венозной крови, разведенной в 10 раз указанной выше средой. Культивирование осуществляли в 96-луночных планшетах в течение 48 ч. Изучали спонтанную и индуцированную специфическими антигенами H37Rv и ESAT-6 продукцию IFNγ. Использовали рабочие концентрации антигенов 10 и 15 мкг/мл, соответственно. Антиген H37Rv, полученный из НИИ фтизиопульмонологии ММА им. И.М. Сеченова, представлял собой суспензию гамма-облученной биомассы вирулентного штамма M. tuberculosis [1]. Антиген ESAT-6 — новый высоко специфический пептид, продукт метаболической активности микобактерий, синтезирующийся в раннюю и активную фазу туберкулезной инфекции [14], разработан Институтом биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова. При определении индуцированной антигенами продукции рассчитывали разность между величиной оптической плотности образца в ответ на стимулятор и уровнем спонтанной продукции (Δ BCG, Δ H37Rv, Δ ESAT-6).

Количественный учет результатов реакции оценивали на многоканальном оптическом компараторе марки «Линкей» при длине волны 450 нм. Концентрацию IFNγ определяли по калибровочной кривой, построенной по результатам титрования стандарта рекомбинантного IFNγ, и выражали в пг/мл.

Статистическую обработку результатов исследования проводили с помощью компьютерных программ Microsoft Excel и Statistica. Использовали методики описательной статистики (среднее арифметическое (М), ошибку средней арифметической (m), интервал колебаний, медиану, моду). Сравнение двух независимых групп, подчиняющихся нормальному распределению, осуществляли с помощью t-критерия Стьюдента, а не подчиняющихся нормальному распределению — с помощью теста Вилкоксона. В качестве критического уровня достоверности был принят критерий 0,05.

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление