Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2012, № 1

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Врачу общей практики

Номер 1'2012

Роль медиаторов воспаления у доношенных новорожденных с дыхательными расстройствами, находящихся на искусственной вентиляции легких

М.В. Дударева, Л.П. Сизякина, И.В. Дударев

В бронхоальвеолярном лаваже 36 новорожденных с мекониально-аспирационным синдромом и респираторным дистресс-синдромом исследовали уровни цитокинов IL-1β, IL-6, IL-8, TNFα, TGFβ1, RANTES. Полученные данные свидетельствуют о важной роли механизмов локальной защиты в течении и исходе дыхательных расстройств у новорожденных. (Цитокины и воспаление. 2012. Т. 11. № 1. С. 123–127.)

Ключевые слова: новорожденные, мекониально-аспирационный синдром, респираторный дистресс-синдром, провоспалительные и противовоспалительные цитокины.

Ключевые слова: новорожденные, мекониально-аспирационный синдром, респираторный дистресс-синдром, провоспалительные и противовоспалительные цитокины.

Дыхательная недостаточность у новорожденных может быть обусловлена не только синдромом аспирации мекония, но и нарушением регуляции дыхания центрального происхождения (очаги поражения мозга и оболочек, родовая травма, гипоксически-ишемические изменения в центральной нервной системе, часто при родоразрешении путем кесарева сечения) [4].

Известно, чтоважная роль в иммунных процессах принадлежит цитокинам, они ответственны за развитие местных защитных реакций в тканях с участием различных типов клеток крови, эндотелия, эпителиев и соединительной ткани. На местном уровне цитокины регулируют все последовательные этапы развития воспаления и адекватность ответа на внедрение патогена. При этом необходимо, чтобы воспалительная реакция, как защитная реакция организма, протекала в тех темпе и объеме, которые соответствовали бы степени повреждения. Активация клеток, усиление продукции провоспалительных цитокинов (IL-1, IL-6, TNFα) и хемокинов необходима в начальных фазах воспаления, однако она становится проблемной, если степень активации перестает быть адекватной, когда первоначально защитный механизм перерастает в патологический [2].

Нарушение регуляции является условием патологических состояний и болезней [5]. Так, чрезмерное воспаление, сопровождающееся избыточной продукцией и секрецией агрессивных радикалов и молекул, может превратиться в патологический процесс, приводящий к массивным повреждениям клеток и тканей организма. В этих случаях цитокины играют роль патогенетических факторов развивающихся заболеваний. В связи с этим система противовоспалительных (деактивирующих и ингибирующих) цитокинов также необходима и физиологически оправдана для жесткого контроля и в случае необходимости для негативной регуляции воспалительного процесса, не допускающей гиперпродукции провоспалительных цитокинов. Дефицит противовоспалительных цитокинов и/или их рецепторов приводит к развитию иммунодефицита, способствующего формированию очага хронического воспаления, аутоиммунных процессов, истощению функциональной активности фагоцитов [1, 13].

В патологических условиях противовоспалительные цитокины могут или обеспечивать недостаточный контроль провоспалительной активности при иммуноопосредованных болезнях, или чрезмерно компенсировать и подавлять иммунный ответ и воспаление, подвергая организм риску системной инфекции [10].

Гиперпродукция цитокинов приводит к развитию системной воспалительной реакции, вовлечению отдаленных органов и систем, а дальнейшее нарастание их концентрации может служить причиной ряда патологических состояний, в частности, септического шока и полиорганной недостаточности [2]. Так, по данным Boehringer N. и др., TNFα играет ключевую роль в остром воспалении и может приводить к разным формам легочного повреждения [8]. Многие авторы полагают, что IL-8 является одним из наиболее важных цитокинов в патофизиологии острых легочных повреждений, усиливающим воспалительный каскад. Роль провоспалительных и противовоспалительных цитокинов в патогенезе мекониально-аспирационного синдрома (МАС) и респираторного дистресс-синдрома (РДС) у доношенных новорожденных недостаточно исследована.

Отсутствие методики точного определения характера воспалительного процесса insitu в клинике новорожденных ограничивает патогенетическое обоснование назначения различных групп препаратов у новорожденных с МАС и РДС.

Существенным дополнением в изучении дыхательных расстройств стал бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ) и последующие иммуноферментные и цитологические исследования. В основу метода положено то, что клетки лаважной жидкости довольно точно отражают клеточный состав респираторной ткани легких, мелких бронхов и бронхов [3, 9]. В настоящее время разработана адекватная методика проведения БАЛ у новорожденных, однако работы, посвященные исследованию БАЛ у доношенных новорожденных с РДС и МАС, единичны и посвящены в основном недоношенным новорожденным с РДС.

Материалы и методы

Иммунологическое обследование детей проводили в объединенной клинико-диагностической лаборатории Ростовского НИИ акушерства и педиатрии с использованием стандартных тестов в соответствии с разработанной там же схемой иммунологического обследования, рекомендованной ВОЗ. Исследование было одобрено локальным этическим комитетом института. Всем пациентам, вошедшим в исследование, в процессе нахождения в отделении реанимации, осуществлялось динамическое клинико-лабораторное и иммунологическое обследование. Определение содержания цитокинов и альвеолярных макрофагов (АМ) в БАЛ выполнено у 36 доношенных новорожденных: у 16 с МАС и у 20 с РДС. Исследование БАЛ проводили сразу после поступления детей в отделение реанимации и в динамике (на 3 и–5-е сутки и на 20-е сутки заболевания).

Количественное определение содержания цитокинов в сыворотке крови и БАЛ проводили твердофазным иммуноферментным методом согласно рекомендациям фирмы-производителя с применением пероксидазы хрена в качестве индикаторного фермента. Определяли IL-1β, IL-6, IL-8, TNFα, TGFβ1, RANTES с использованием тест-систем фирм Biosource (США), Bender Medsystems (Австрия), R&D Systems (США).

Учет реакции проводили на многофункциональном программируемом счетчике для иммунологических исследований с компьютером и программным обеспечением Wallac 1420 Multilabel Counter (Victor-2) (Финляндия); количественную оценку результатов — методом построения калибровочной кривой, на которой отражена зависимость оптической плотности (ОП) от концентрации исследуемого цитокина. Результаты выражали в пг/мл.

Чтобы избежать выброса цитокинов лейкоцитами крови exvivo, использовали специально разработанную методику забора материала. У новорожденных набирали 1 мл венозной крови в пробирку Vacutainer для получения плазмы с разделительным гелем и ЭДТА в качестве антикоагулянта (Becton Dickinson, США), центрифугировали 3 мин при 5 000 об/мин при 4 °С, и полученную плазму использовали для анализа. Оптическую плотность определяли при длине волны 450 нм.

Выделение АМ проводили в 36 пробах БАЛ, полученного у новорожденных, находящихся на искусственной вентиляции легких (ИВЛ). Для выделения АМ избран градиент фиколла–верографина с ρ=1,048 г/мл. Плотность раствора перед использованием контролировали на рефрактометре. В центрифужную (пластиковую) пробирку наливали по 2 мл смеси фиколла–верографина и наслаивали взвесь клеток БАЛ (плотность суспензии 2×106 кл/мл) в объеме 2 мл. Сепарацию клеток производили при комнатной температуре центрифугированием при 1500 об/мин в течение 20 мин. Слой АМ в виде полосы белого цвета над сепарирующим раствором отсасывали пастеровской пипеткой и дважды отмывали раствором Хенкса в течение 10 мин при 1500 об/мин, затем ресуспендировали. Идентификацию клеток производили после окраски по Романовскому — Гимза под светооптическим микроскопом.

При определении статистической обоснованности различия исследуемых групп применяли критерий Манна — Уитни для независимых групп и критерий Вилкоксона для связанных групп. В расчет принимали случаи при максимальном уровне ошибки первого рода <0,05.

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление