Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2012, № 4

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 4'2012

Роль TNF-рецепторного пути реализации апоптоза в клетках линии Jurkat с участием газовых трансмиттеров

Л.А. Таширева, Е.Г. Старикова, Т.С. Прохоренко, О.А. Васильева, В.В. Новицкий, Н.В. Рязанцева

Проанализирована способность газовых трансмиттеров оксида азота, монооксида углерода и сульфида водорода влиять на митохондриальный и TNF-опосредованный пути запуска апоптоза Jurkat клеток. Установлено, что все изучаемые газы увеличивают количество клеток со сниженным митохондриальным трансмембранным потенциалом по сравнению с интактной культурой. Было показано, что донор монооксида углерода CORM-2 повышает готовность Т-лимфобластных клеток вступить в рецептор-опосредованный апоптоз, однако продукция соответствующего лиганда не изменяется и апоптоз остается не реализованным. Донор оксида азота NOC-5 достоверных изменений в системе лиганд–рецептор не вызывает. NaHS (донор сульфида водорода) снижает продукцию TNFα, не влияя на экспрессию комплементарного рецептора. Результаты исследования показывают, что проапоптотическое действие газов в отношении клеток линии Jurkat опосредовано митохондриальным вариантом запуска апоптоза. (Цитокины и воспаление. 2012. Т. 11. № 4. С. 30–33.)

Ключевые слова: апоптоз, газовые трансмиттеры, TNF-alpha, TNFR1, митохондрии.

Одним из приоритетных направлений фундаментальных исследований является оценка роли газовых трансмиттеров (оксида азота, монооксида углерода и сульфида водорода) в регуляции клеточных функций. Установлено, что, помимо участия в поддержании тонуса сосудов и нейротрансмиссии, данные вещества являются участниками воспалительного процесса. Так, оксид азота обладает способностью модулировать пролиферацию Т-клеток, продукцию цитокинов и апоптоз in vivo и in vitro [5]. Монооксид углерода ингибирует липополисахарид-активированный синтез цитокинов [7]. В различных моделях воспаления сульфид водорода проявлял как про-, так и антивоспалительные свойства [15].

Важную роль в обеспечении адекватного течения воспалительного процесса играет программированная гибель иммунокомпетентных клеток. Апоптоз, или программированная смерть клеток является естественным процессом, представляющим собой основной компонент эмбриогенеза, морфогенеза и роста тканей. В норме в сформировавшемся организме апоптоз является механизмом ликвидации В- и Т-лимфоцитов после прекращения действия на них стимулирующего действия соответствующих цитокинов при завершении иммунных реакций [3].

Ранее нами был продемонстрирован проапоптотический эффект доноров NO, CO и H2S в отношении клеток линии Jurkat [1, 2]. Данные клетки представляют собой лимфобластную стадию дифференцировки Т-лимфоцитов, обладают способностью синтезировать ряд цитокинов и могут быть использованы как модель для изучения Т-лимфоцитов [6]. Известно, что проапоптотическое действие газов опосредовано их способностью нарушать функционирование митохондриальных белковых комплексов [10]. Однако существуют данные, что газы могут влиять на рецепторный путь реализации апоптоза. Так, оксид азота увеличивает экспрессию Fas-рецептора в клетках рака яичника, сульфид водорода повышает продукциюTNFα, IL-1β и IL-6 в клетках моноцитарной клеточной линии [15].

В данной работе будет проанализировано влияние газов NO, CO и H2S на функционирование митохондрий и продукцию TNFα и соответствующего рецептора клетками линии Jurkat. Установление вклада TNF-зависимого пути в проапоптотическое действие газов позволит ответить на вопрос о возможности использования данных веществ в качестве специфических модуляторов апоптоза иммунокомпетентных клеток при воспалении.

Материалы и методы

В работе были использованы клетки линии Jurkat, представляющие собой иммортализованные T-лимфоциты (Российская коллекция клеточных культур позвоночных Института цитологии РАН, Санкт-Петербург). Клетки инкубировали в течение 24 ч в атмосфере 5 % CO2 при температуре 37 ºСв полной питательной среде с добавлением доноров оксида азота (NOC-5) («Sigma», USA) и монооксида углерода (CORM-2 (Ru(CO)3Cl2 димер)) («Sigma», USA) в проапоптотических концентрациях 100 и 50 мкМ, соответственно. Экспозиция клеток с донором сульфида водорода (NaHS) («Sigma», USA) в конечной концентрации 10 мМ составляла 15 мин.

Число клеток с признаками апоптоза и клеток со сниженным уровнем потенциала митохондриальных мембран (∆ψ) определяли с помощью проточной цитофлуориметрии (Facs CantoII («Beckman Dickinson», USA)) с использованием наборов «ANNEXIN V FITC» («Abcam», USA) и «MitoScreen» («BD Pharmingen», USA), соответственно. Полученные результаты выражали в процентах (отношение числа клеток, связавших аннексин V на поверхности мембраны, или клеток со сниженным митохондриальным трансмембранным потенциалом к общему числу клеток).

Содержание клеток, презентирующих на своей поверхности мембранную форму рецептора к TNFα 1-го типа TNFRI (CD120), определяли методом лазерной проточной цитофлуориметрии (Facs CantoII («Beckman Dickinson», USA)). Клетки окрашивали стандартными моноклональными антителами к данному рецептору, меченными ФИТЦ («Immunotech», France), согласно протоколу фирмы производителя в течение 30 мин. Результаты исследования выражали в процентах (отношение числа клеток, презентирующих на своей поверхности TNF-рецептор, к общему числу клеток).

Определение концентрации TNFα проводили в супернатантах культур интактных клеток линии Jurkat и после воздействия на них соответствующих доноров газов. Процедуру иммуноферментного анализа выполняли в соответствии с инструкцией производителя тест-системы («R&D», USA). Оптическую плотность полученного окрашенного раствора, пропорциональную концентрации определяемого вещества, регистрировали колориметрически с помощью фотометра для микропланшетов «Multiscan EX» («ThermoLabSystems», Finland) при длине волны 450 нм. Калибровочную кривую строили с использованием среды, используемой для культивирования клеток («0 доза») и стандартных растворов с известной концентрацией. Результаты проведенного исследования выражали в нг/мл.

Статистический анализ проводили с использованием программного обеспечения SPSS v.11.0 (SPSS, Chicago, USA). Для каждой выборки вычисляли средневыборочные характеристики. Проверку нормальности распределения количественных показателей проводили с использованием критерия Шапиро — Уилка. В случае отсутствия согласия данных с нормальным распределением для оценки различий между зависимыми выборками применяли непараметрический критерий Вилкоксона. Для оценки достоверности различий независимых выборок использовали ранговый критерий Манна — Уитни. Различия считались достоверными при уровне значимости р<0,05.

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление