Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2012, № 4

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 4'2012

Афобазол подавляет функциональную активность Т-лимфоцитов в системе in vitro

Ф.Г. Разумная, М.Х. Салимгареева, Р.С. Ямиданов,Л.Ф.Азнабаева, В.А. Вахитов, С.В. Сибиряк

В системе in vitro изучено влияние афобазола ((5-этокси-2-[2-(морфолино)-этилтио]) бензимидазола дигидрохлорида) (0,1–100 мкг/мл) на индуцированный моноклональными антителами анти-CD3 и ФГА митогенез лимфоцитов периферической крови здоровых доноров, а также спонтанную и индуцированную ФГА продукцию Т-клеточных цитокинов. Установлено, что афобазол подавляет митогенный ответ Т-лимфоцитов. В низких концентрации (0,1 мкг/мл) афобазол угнетает пролиферацию, в основном, CD3+CD8+ цитотоксических/супрессорных Т-лимфоцитов, в концентрации 10 мкг/мл афобазол подавляет митогенез CD3+CD4+ Т-хелперных клеток, а в высокой концентрации (100 мкг/мл) угнетает митогенез всех субпопуляций Т-клеток. Афобазол не изменяет спонтанной продукции Т-клеточных цитокинов, но ингибирует индуцированную ФГА секрецию IL-2, IFNg и IL-4. Продукция IL-2 дозозависимо ингибируется в присутствии всех концентраций препарата в культуре, секреция IFNg ингибируется в присутствии 0,1 и 100 мкг/мл афобазола, а продукция IL-4 ингибируется только в присутствии 0,1 и 10 мкг/мл афобазола. (Цитокины и воспаление. 2012. Т. 11. № 4. С. 45–49.)

Ключевые слова: афобазол, Т-лимфоциты, митогенный ответ, продукция цитокинов.

Многие фармакологические препараты — производные бензимидазола — проявляют выраженную иммунотропную активность, которая может не только вносить существенный вклад в терапевтический эффект, но и определять особенности нежелательных лекарственных реакций [1, 4, 5, 9]. Афобазол (5-этокси-2-[2-(морфолино)-этилтио]бензимидазола дигидрохлорид), разработанный в НИИ фармакологии РАМН им. В. В. Закусова, является селективным анксиолитиком и нейропротектором [6, 7]. Механизм психонейротропной активности афобазола связан с регуляцией активности GABAA-рецепторов и способностью увеличивать уровень некоторых регуляторных нейропептидов (BDNF) в структурах мозга [8, 10]. В то же время, ряд работ предполагает прямое действие афобазола на иммунокомпетентные клетки [2, 3, 18]. В этой связи иммунофармакологическая характеристика афобазола, в том числе и в системах in vitro,представляет несомненный интерес.

Настоящая работа посвящено выяснению влияния афобазола на функциональную активность лимфоцитов периферической крови здоровых доноров в системе in vitro.

Материалы и методы

Объектом исследования были мононуклеары периферической крови 20 здоровых доноров-добровольцев (9 мужчин и 11 женщин, возраст — 20–35 лет). Все доноры были поставлены в известность о проводимом исследовании и дали согласие на участие в нем. Кровь получали путем венепункции в стерильных условиях в утренние часы, в качестве антикоагулянта использован 5 % ЭДТА-К3 (Sigma).

Мононуклеары выделяли стандартным методом градиентного центрифугирования (Histopague 1.077, Sigma). После двукратного отмывания средой RPMI-1640 (Sigma), клетки ресуспендировали в обогащенной глутамином среде RPMI-1640, содержащей 10 % эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС) (Sigma) и 50 мкг/мл гентамицина сульфата (Sigma). Концентрация клеток составляла 1 × 106 клеток/мл.

Для оценки пролиферативной активности лимфоцитов клетки культивировали в течение 72 часов в лунках 48-луночных планшет (Costar) (по 5 × 105 клеток) при 37 °С в атмосфере, содержащей 5 % CO2. В качестве митогенов использовали моноклональные антитела к CD3 (НПЦ «МедБиоСпектр», г. Москва) в концентрации 2,5 мкг/мл и фитогемагглютинин-P (ФГА-P, Difco) в концентрации 10 мкг/мл. Афобазол (субстанцию (5-этокси-2-[2-(морфолино)-этилтио]бензимидазола дигидрохлорида) разводили средой RPMI-1640 и использовали в диапазоне концентраций от 0,1 до 100 мкг/мл (0,33–330 мкмоль/литр). Препарат добавляли в культуру одновременно с митогенами.

Пролиферативную активность оценивали стандартным радиометрическим методом. За 6 часов до окончания культивирования в лунки вносили по 1 мкКи 3H-тимидина. По окончании инкубации клетки переносили на нитроцеллюлозные фильтры с помощью сборщика клеток. Радиоактивность измеряли на сцинтилляционном мультианализаторе Hidex (Finland).

Для оценки субпопуляционной структуры митотически активных лимфоцитов после инкубации клетки однократно отмывали средой RPMI-1640, ресуспендировали в растворе CellWash (BD) и окрашивали моноклональными антителами анти-CD3-FITC(IgG1)/анти-CD19-PE(IgG1), анти-CD3-FITC(IgG1)/анти-CD4-PE(IgG1), анти-CD3-FITC(IgG1)/анти-CD8-PE(IgG1) (IOTest, Beckman Coulter). Проточную цитофлуориметрию проводили на цитометре FACS Calibur (BD). Анализ данных осуществляли в рамках программы FCS Express V3 Research Edition (Denovosoftware).

Для оценки продукции цитокинов мононуклеары инкубировали 24 часа в полной среде культивирования без стимулятора (спонтанная продукция) или в присутствии ФГА-P (индуцированная продукция). После инкубации супернатанты замораживали и хранили при -70 °С до проведения анализа. Уровень цитокинов в супернатантах определяли стандартным твердофазным иммуноферментным методом. Для определения уровня IL-2 использовали тест-систему Human IL-2 ELISAKit (Biosource, USA), для определения уровней IFNg и IL-4 — тест-системы производства ООО «Протеиновый контур» (Санкт-Петербург). Постановку метода осуществляли согласно рекомендациями фирмы-производителя. Результаты анализировали на планшетном фотометре MultiscanPlus (Labsystems). Расчет концентраций цитокинов осуществляли в рамках программного обеспечения регистрирующего прибора.

Статистическe. обработкe результатов производили с помощью программы Statistica 6.0 для Windows. Использовали параметрические (критерий Стьюдента для сопряженных признаков, pSt) и непараметрические (критерий Вилкоксона, pW) критерии различия.

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление