Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер 2 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2013, № 1

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 1'2013

Морфологическая и иммунологическая характеристика системного воспалительного ответа у овариэктомированных крыс Вистар

А.М. Косырева, О.В. Макарова

Исследовали морфофункциональное состояние органов иммунной системы, печени, легких и уровня продукции про- и противовоспалительных цитокинов при системном воспалительном ответе (СВО) у самок крыс Вистар после овариэктомии. СВО моделировали внутрибрюшинным введением липополисахарида (ЛПС) E. coli в дозе 1,5 мг/кг через 52 суток после хирургической овариэктомии. По сравнению с крысами с физиологическим уровнем половых гормонов, развитие СВО на фоне овариэктомии характеризуется увеличением уровня кортикостерона, прогестерона, многократным повышением содержания эндотоксина. В легких овариэктомированных крыс на 1-е сутки после введения ЛПС наблюдаются более выраженные реактивные изменения, характеризующиеся увеличением числа нейтрофилов. При СВО динамика изменений показателей морфофункционального состояния тимуса у овариэктомированных крыс и самок с физиологическим уровнем половых гормонов была сходной. По сравнению с некастрированными самками в селезенке овариэктомированных крыс развитие СВО отличается только реакцией герминативных центров лимфоидных узелков в виде их многократного расширения. После овариэктомии развитие СВО сопровождается увеличением IL-6 и IFNγ при снижении уровня IL-2, IL-4, TNFα. Полученные данные следует учитывать при разработке подходов к лечению инфекционно-воспалительных заболеваний у женщин с посткастрационным синдромом и физиологической менопаузой. (Цитокины и воспаление. 2013. Т. 12. № 1–2. С. 78–82.)

Ключевые слова: овариэктомия, системный воспалительный ответ, липополисахарид, иммунная система, цитокины.

По данным клинических исследований, по сравнению с мужчинами у женщин реже развиваются острые септические состояния, что, по-видимому, связано с уровнем половых стероидов и полиморфизмом генов, сцепленных с X-хромосомой, которые модулируют развитие иммунного ответа [3, 10, 12]. Повышение уровня смертности от септических осложнений у лиц старше 50 лет исследователи связывают со снижением содержания эстрогенов и андрогенов в крови [3]. У женщин в этом возрасте наступает менопауза, сопровождающаяся изменением баланса половых гормонов, что коррелирует с повышением числа септических осложнений и показателей смертности от инфекционно-воспалительных заболеваний по сравнению с женщинами репродуктивного возраста [5, 7]. В эксперименте показано, что после овариэктомии — широко используемой модели посткастрационной менопаузы — увеличивается показатель смертности от сепсиса у мышей и крыс по сравнению с самками с физиологическим уровнем эстрогенов [13, 15]. На моделях in vitro показано влияние половых гормонов на продукцию активированными липополисахаридом (ЛПС) моноцитами крови провоспалительных цитокинов TNFα, IL-1β и IL-6 [14]. Однако в литературе отсутствуют работы по оценке морфофункциональных изменений иммунной системы и органов-мишеней для ЛПС — печени и легких — в комплексе с изучением продукции про- и противовоспалительных цитокинов при системном воспалительном ответе (СВО) на фоне овариэктомии.

Поэтому целью работы была морфологическая и иммунологическая характеристика СВО у овариэктомированных крыс Вистар.

Материалы и методы

Исследования проведены на 51 половозрелой самке крыс Вистар, массой тела 220–250 г (питомник «Столбовая»). При работе с экспериментальными животными руководствовались приказом Минздрава СССР № 755 от 12.08.1977 г. Животных содержали по 7 особей в клетке при естественном освещении, температуре 20–22 °С. Доступ к воде и пище был свободным.

Овариэктомию самок крыс Вистар (n=23) проводили под эфирным наркозом. Через 52 дня после кастрации кастрированным (n=15) и интактным (n=18) животным внутрибрюшинно вводили ЛПС E. coli штамма O26:B6 («Sigma», USA) в высокой дозе 1,5 мг/мл, которая вызывает развитие СВО. Животных выводили из эксперимента на 1-е (n=18) и 7-е сутки (n=15) после введения ЛПС. Выбор сроков забоя определялся тем, что на 1-е сутки после введения ЛПС развиваются выраженные патологические изменения органов–мишеней, а на 7-е наблюдается их обратное развитие [2]. Животным контрольной группы (самки в фазе проэструса: n=10) и группы сравнения (самки кастрированные: n=8) внутрибрюшинно вводили физиологический раствор. Фазу эстрального цикла определяли по кольпоцитограмме.

Кровь забирали из шейных вен, центрифугировали при 200 g в течение 20 мин, отбирали сыворотку, замораживали ее при температуре –70 °С и хранили в течение 2 мес. В сыворотке крови твердофазным иммуноферментным методом оценивали содержание прогестерона, кортикостерона («Assay designs», USA), с помощью хромогенного LAL-теста определяли уровень эндотоксина («HBT», USA). С целью оценки тяжести поражения печени в сыворотке крови определяли активность индикаторных ферментов АсАТ и АлАТ (КФ 2.6.1.1). Использовали наборы реактивов «DiaSys» («Diagnostic Systems GmbH», Germany).

Проводили забор тимуса, селезенки, печени и легких. Органы иммунной системы и печень фиксировали в растворе Буэна в течение 24 ч, легкие — в жидкости Карнуа в течение 2 ч, заливали в парафин, готовили гистологические срезы, окрашивали их гематоксилином и эозином. В гистологических срезах объемную плотность функциональных зон тимуса и селезенки оценивали под световым микроскопом с помощью сетки Г.Г. Автандилова [1]. Ширину субкапсулярного слоя тимуса измеряли в микрометрах при ув. ×640. На гистологических препаратах легких проводили подсчет количества нейтрофилов в межальвеолярных перегородках в стандартном поле зрения площадью 25 тыс. мкм2. Выраженность патологических изменений в печени оценивали слепым методом полуколичественно в баллах по шкале: 0 баллов — дистрофических изменений нет; 0,5 балла — дистрофические изменения менее 30 % гепатоцитов; 1 балл — дистрофические изменения 30–60 % гепатоцитов; 2 балла — дистрофические изменения более 60 % гепатоцитов; 3 балла — дистрофия 100 % гепатоцитов; 4 балла — единичные в препарате очаговые некрозы; 5 баллов — обширные некрозы.

Для индукции синтеза и секреции цитокинов суспензию клеток селезенки в концентрации 106/мл культивировали 20 ч в 1 мл полной ростовой среды с добавлением конканавалина А (5 мкг/мл) в 24-луночных культуральных планшетах при 37 °С и 5 % СО2. Среда для культивирования состояла из RPMI 1640 (ПанЭко) с 5 % инактивированной телячьей эмбриональной сыворотки, 2 мМ l-глутамина и 50 мкг/мл гентамицина. По окончании инкубации надосадочную жидкость хранили в течение 2 месяцев при –70 °С. С помощью твердофазного иммуноферментного метода (тест-системы «eBioscience», Ausrtia) в ней определяли концентрацию цитокинов IL-2, IL-4, IL-6, IL-12, фактора некроза опухоли α (TNFα) и интерферона γ (IFNγ).

Полученные данные подвергали статистической обработке. Достоверность различий определяли с помощью параметрических и непараметрических критериев (Statistica 7.0, SigmaStat). Различия считали достоверными при p<0,05.

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление