Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер 2 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2013, № 4

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 4'2013

Изучение динамики экспрессии цитокинов в ходе иммунотерапии у больных эритемой кольцевидной центробежной Дарье

Е.В. Сорокина, Н.К. Ахматова, В.Г. Хоменков, Э.А. Ахматов

Изучали экспрессию провоспалительных и противовоспалительных цитокинов в сыворотке и клетках у больных эритемой кольцевидной центробежной (ЭКЦ) и динамику базальных уровней провоспалительных и противовоспалительных цитокинов в ходе иммунотерапии. Были обследованы 15 взрослых пациентов с ЭКЦ. Лечение больных вакциной «Иммуновак-ВП-4» способствовало достоверному повышению уровней сывороточного IFNγ, IL-2, в то время как Кагоцел приводил к повышению IL-5. Различия интенсивности влияния терапии на динамику уровней сывороточных цитокинов наиболее выражены в отношении IFNγ: Иммуновак-ВП-4 обладал наиболее высокой активностью к индукции данного цитокина. Включение иммуномодуляторов в комплекс терапевтических и профилактических мероприятий у больных ЭКЦ способствует активации врожденного и адаптивного иммунитета, способствуя усилению противовирусного ответа. (Цитокины и воспаление. 2013. Т. 12. № 4. С. 80–86.)

Ключевые слова: кольцевидная центробежная эритема, цитокины, Иммуновак-ВП-4, Кагоцел.

Эритема кольцевидная центробежная Дарье (ЭКЦ) — полиэтиологичный дерматоз — редко встречающееся заболевание с недостаточно хорошо изученным патогенезом. Наибольшее число гипотез концентрируются вокруг взаимодействия между воспалительными клетками, их медиаторами и неизвестным антигеном, диффундирующим через кожу. Причина наибольшего числа случаев ЭКЦ неизвестна. В зарубежной литературе на сегодняшний день существует только 2 масштабных исследования, посвященных изучению этиологических факторов и гистологических признаков заболевания: это исследование 66 клинических случаев и 73 гистологических [4, 6, 13]. Возможна ассоциация с аутоиммунными болезнями, эндокринными нарушениями, беременностью [2, 8]. В литературе описаны случаи возникновения дерматоза после применения медикаментов, однако лекарства обычно не индуцируют эти высыпания [2, 9]. Описаны клинические случаи возникновения ЭКЦ после контакта с металлом [2]. Отмечается взаимосвязь между возникновением периодических эритематозных высыпаний и врожденным дефицитом лактатдегидрогеназы [10]. Все чаще в литературе встречаются наблюдения паранеопластической формы ЭКЦ [1, 11]. Несмотря на то, что роль инфекционных заболеваний в патогенезе ЭКЦ Дарье общепризнана, исследования, посвященные выявлению непосредственной связи формирования этой патологии с инфекционными агентами, немногочисленны. В публикациях описано возникновение ЭКЦ Дарье на фоне герпесвирусных инфекций [3, 5, 7]. Данные об особенностях функционирования иммунной системы у больных ЭКЦ в литературе отсутствуют. К настоящему времени в арсенале клиницистов имеются лишь препараты симптоматической терапии для контролирования течения ЭКЦ. Поэтому активное выявление триггерного фактора и, по возможности, его устранение, может повысить эффективность терапевтических мероприятий. А более глубокое и детальное изучение этиопатогенеза заболевания позволит систематизировать данные, полученные в ходе гистологических и иммунологических исследований, и приблизиться к пониманию взаимодействия и кооперации клеток в иммунном ответе и взаимосвязи между особенностями функционирования врожденного и адаптивного иммунитета и рецидивирующим торпидным течением ЭКЦ [12].

Целью данного исследования явилось изучение экспрессии провоспалительных и противовоспалительных цитокинов в сыворотке и клетках у больных ЭКЦ и динамики базальных уровней провоспалительных и противовоспалительных цитокинов в ходе иммунотерапии.

Материалы и методы

В период исследования с 2005 по 2012 г. под наблюдением находились 15 больных ЭКЦ Дарье в возрасте от 16 до 52 лет. Длительность заболевания варьировала от 3 месяцев до 20 лет. Рецидивам эритемы предшествовали воспалительные заболевания ЛОР-органов, ОРВИ у 5 больных. В ходе проведения лабораторного исследования методом ДНК-диагностики у 3 больных идентифицировали вирус Эпштейна — Барр (ВЭБ) и вирус герпеса HHV-6 в секрете слюнных желез, у одного больного ВЭБ и вирус герпеса простого HSV1, у трех больных только ДНК ВЭБ, причем исследование сыворотки крови у этих больных иммуноферментным методом (ИФМ) выявило специфические антитела класса IgM к капсидному антигену ВЭБ (VCA), высокие титры антител класса IgG к капсидному белку, раннему антигену (early antigen (EA)) и ядерному антигену (Epstein — Barr virus nuclear antigen (EBNA)), что указывает на реактивацию хронической ВЭБ-инфекции. Таким образом, у 7 больных были выявлены клинические и лабораторные признаки активации герпесвирусных инфекций.

Всем больным с ЭКЦ в начале исследования и в динамике лечения было проведено определение уровней цитокинов в сыворотке крови и внутриклеточно.

Определение уровня цитокинов в сыворотках/плазме крови больных проводили твердофазным иммуноферментным методом с использованием тест-систем фирмы «Biosource» (Австрия) согласно инструкции производителя.

Определение уровня внутриклеточных цитокинов. В лунки 24 луночного культурального планшета вносили по 2 мл разведенной (1:2) крови в среде RPMI-1640 (НПП «ПанЭко»). Для стимуляции индукции цитокинов добавляли фитогемагглютинин (ФГА) 10 мкг/мл (НПП «ПанЭко»). Планшеты инкубировали 30 мин при 37 °С в атмосфере с 5 % СО2. После инкубации в лунки добавляли по 4 мкл Brefeldin A (BioLegend, USA) (до конечной концентрации 10 мкг/мл) и помещали в CO2-инкубатор при 37 °С на ночь. Из каждой лунки удаляли по 1 мл жидкости, осадок перемешивали и окрашивали PE- или FITC-мечеными моноклональными антителами (МКА) к поверхностным клеточным антигенам.

Мембранное окрашивание проводили с использованием моноклональных антител к CD8 согласно инструкции производителя (BioLegend). Вносили 3–5 мкл антител в лунку круглодонного иммунологического планшета, затем добавляли 50 мкл взвеси клеток и инкубировали 20 мин в темном месте при комнатной температуре. Добавляли 100 мкл фосфатного солевого буфера или среды RPMI-1640 и отмывали при 350 g в течение 3–5 мин. Клетки фиксировали 4 % формальдегидом, инкубировали 20 мин при комнатной температуре в темноте и снова отмывали.

Пермеабилизация клеток и лизирование. Фиксированные клетки ресуспендировали в 150 мкл Permeabilization WashBuffer (BioLegend). Отмывали клетки центрифугированием при 350 g 7 мин дважды в 150 мкл пермеабилизирующего буфера.

Окрашивание внутриклеточных цитокинов. Далее в лунки с клетками добавляли по 3–5 мкл МКА к цитокинам и по 40 мкл пермеабилизирующего буфера и инкубировали 20 мин при комнатной температуре в темноте. Центрифугировали дважды при 300–450 g 3–5 мин с добавлением 1 % формальдегида для фиксации. Уровень цитокинов определяли на проточном цитометре FC-500 (Beckman Coulter, USA).

В нашем исследовании в комплексной терапии больных применяли поликомпонентную вакцину «Иммуновак-ВП-4» из антигенов условно-патогенных микроорганизмов, разработанную в НИИВС им. И.И. Мечникова РАМН (разрешена к применению в практике здравоохранения: Приказ МЗ РФ №270 от 17.11.93 г., регистрационное удостоверение №93/270/20). Иммуновак-ВП-4состоит из антигенов Staphylococcus aureus aureus (S. Aureus), Klebsiella pneumoniae, Proteus vulgaris и Escherichia coli. В состав препарата входит ассоциированный с белком наружной мембраны липополисахаридов грамотрицательных микроорганизмов, а также пептидогликан, тейхоевые кислоты и лабильные белковые антигены S. aureus. Вакцину вводили в соответствии с инструкцией по применению назально-подкожным методом, включающим в себя 3 ежедневных интраназальных введения и последующие 8–10 подкожных инъекцийс интервалом 3–4 дня, начиная с дозы 0,05 мл на первую инъекцию, 0,1 мл — на вторую и 0,2–0,4 млпри последующих введениях препарата. Также применяли противовирусный и иммуномодулирующий препарат «Кагоцел», индуктор синтеза интерферона (ООО «НИАРМЕДИК ПЛЮС», г. Москва).

Обследуемые больные были ранжированы на 3 группы в зависимости от проводимой терапии. 1-я группа (основная) включала 6 больных, которые получали иммунотерапию вакциной «Иммуновак-ВП-4» на фоне базисной терапии. 2-я группа (сравнения) включала 4 больных, которые получали иммунотерапию препаратом «Кагоцел» также на фоне базисной терапии. 3-я группа (контрольная) получала только базисную терапию без применения иммуномодуляторов. 4-я группа включала 15 здоровых доноров (8 мужчин и 7 женщин) в возрасте 18-48 лет. Базисная терапия включала назначение ациклических нуклеозидов, антибиотики (по показаниям), применение наружных средств.

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление