Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2013, № 4

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 4'2013

Роль тканевых свободнорадикальных реакций и TNF-зависимого апоптоза в развитии рака шейки матки, индуцированного вирусом папилломы человека

З.Ф. Хараева, Е.В. Михальчик, М.В. Супрун, О.А. Сижажева, Л.Г. Коркина

Исследованы концентрации лигандов апоптоза в цервикальном канале и свободно-радикальные показатели в тканях биоптатов шейки матки женщин с предраковыми и раковыми заболеваниями на фоне папилломавирусной инфекции. Показано, что развитие опухоли сопровождается инфильтрацией окружающих тканей нейтрофилами. Результатом повышения местного образования супероксидного радикала и пероксида водорода нейтрофилами является усиление нитрозилирования белков (один из показателей оксидативного стресса) на стадии, предшествующей злокачественной трансформации. Несмотря на рост активности миелопероксидазы, свидетельствующий об инфильтрации ткани нейтрофилами, и продуктов нитрозильного стресса, не обнаружено увеличения активности ферментов, способных разлагать пероксид водорода (каталазы и глутатионпероксидазы) в тканях, прилегающих к зоне опухолевой трансформации. Отсутствие увеличения концентрации основных TNF-зависимых лигандов апоптоза свидетельствует о том, что развивающийся оксидативый стресс в тканях не приводит к инициации процессов апоптоза. (Цитокины и воспаление. 2013. Т. 12. № 4. С. 30–36.)

Ключевые слова: рак шейки матки, свободные радикалы, вирус папилломы, апоптоз.

Рак шейки матки (РШМ) занимает ведущее место в структуре женской онкологической заболеваемости и смертности [1]. По данным ВОЗ, ежегодно в мире регистрируется около 450 тыс. новых случаев рака шейки матки [1, 2]. В последние годы в человеческой популяции отмечен рост заболеваемости раком шейки матки среди женщин молодого и среднего возраста с особенно заметным повышением заболеваемости в группе до 29 лет, составляющим 2,1 % в год [3]. В 2008 г. немецкий ученый Харальд цур Хаузен (Harald zur Hausen) получил нобелевскую премию в области медицины за открытие связи вируса папилломы человека (ВПЧ) с развитием рака шейки матки у женщин [13]. Процесс трансформации ВПЧ-инфицированных клеток в раковые долгий: в среднем, от 5 до 11 лет [3, 6]. Длительной персистенции ВПЧ способствует его способность ускользать от иммунного надзора. Хотя ВПЧ инфицирует базальные клетки, репликация вируса и сборка вирусных частиц происходит в дифференцированных клетках поверхностного слоя эпителиальных клеток, вирус реплицируется и выходит из клеток, не вызывая воспаления [8]. На сегодняшний день не существует лекарственного препарата, способного уничтожить или удалить из организма папилломавирус. Основным физиологическим путем удаления вирусинфицированных и трансформированных клеток без повреждения соседних тканей и клеток является апоптоз [7]. Известно, что ВПЧ за счет антиапоптического белка р53 блокируют запуск программированной смерти клетки, но, в то же время, примерно у 20–25 % вирус элиминируется из организма [13]. Одним из путей регуляции процессов апоптоза являются свободные радикалы [11]. Так как в настоящее время разработаны различные пути воздействия на процессы радикалообразования, изучение и уточнение взаимосвязи радикалообразования и апоптоза в случае папилломавирус-ассоциированных поражений шейки матки откроет методы профилактики и терапии заболеваний папломавирус-ассоциированных заболеваний шейки матки.

Цель работы состояла в оценке показателей тканевых свободнорадикальных реакций и интенсивности и особенностей регуляции TNF-зависимого апоптоза у пациенток с папилломавирус-ассоциированными предраковыми (лейкоплакия, эктопия, CIN I, CIN II) и раковыми заболеваниями шейки матки (CIN III).

Материалы и методы

Под наблюдением находились 3 группы пациенток (табл. 1): 1-я — с диагностированной ВПЧ-инфекцией низкого онкогенного риска (10-й, 13-й типы); 2-я — с предраковыми заболеваниями шейки матки (дисплазия (CIN) I–II степени, на фоне выявленной ВПЧ высокого онкогенного риска (ВПЧ16, 18); 3-я группа — с раком шейки матки (CIN III) на фоне выявленной ВПЧ высокого онкогенного риска (ВПЧ16, 18). Расширенную кольпоскопиюпроводили с помощью кольпоскопа «Leisegang» (Германия) при увеличении в 15 раз с целью выявления и конкретизации изменений эпителиального покрова шейки матки, для документирования кольпоскопических картин использовали видеоприставку. Цитологическое исследование мазков с экзо- и эндоцервикса проводили по Папаниколау (Pap-smear-test). У всех пациенток ВПЧ-инфекция (10-й, 13-й, 16-й, 18-й типы) была подтверждена ПЦР-анализом. Больных, подвергнутых ранее любому виду противовирусной и противоопухолевой терапии, и пациенток, имевших серьезные сопутствующие заболевания других систем организма, в исследование не включали.

Оценку показателей тканевых свободно-радикальных реакций проводили в образцах биоптатов, полученных при обследовании до применения комплексного лечения. Ткань биоптата получали из пограничной области (5 мм) с патологически измененными тканями при наличии предраковых и раковых изменений и помещали в 0,1 М К-фосфатный буфер (рН 7,4) и на холоде гомогенизировали в ручном стеклянном гомогенизаторе Поттера. У женщин с ВПЧ низкого онкогенного риска (1-я группа) при кольпоскопическом исследовании не было выявлено патологически измененных участков. Полученную суспензию клеток центрифугировали при 900 g в течение 40 минут на холоде, надосадочную жидкость отделяли и использовали для проведения биохимических тестов. Оценку белка в супернатантах гомогенатов проводили методом Лоури. Оценку содержания нитратов и нитритов проводили с использованием набора «Nitrate/nitrite Assay Kit Colorimetric» («Sigma», 23479), согласно инструкциям производителя. Содержание нитротирозина измеряли иммуноферментным методом с использованием набора реактивов «Nitrotyrosine ELISA» («Northwest/AMS Biotechnology», UK). Активность ферментов оценивали методами спектрофотометрии: миелопероксидазы (МПО) — по реакции с орто-дианизидином (при 560 нм), каталазы — по прямой реакции с пероксидом водорода (при 240 нм), глутатионпероксидазы — по реакции с GSH в присутствии трет-бутилгидроперекиси (при 412 нм). Оценку эффектов гомогенизированных биоптатов в системе Фентона проводили методом хемилюминесценции, которую инициировали добавлением 17,7 мкМ FeSO4 к 0,01 М К-фосфатному буферу, содержащему 17,7 мкМ пероксида водорода и 0,2 мМ люминола. Образцы гомогенатов добавляли из расчета 1 мг белка/1 мл пробы и оценивали эффект в процентах от величины ответа в контрольных пробах (без гомогенатов).

Для изучения в цервикальном отделяемом уровня маркеров апоптоза — сывороточного растворимого Fas-рецептора (sFAS), TNF-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL), TNFα — использовали иммуноферментный анализ (реагенты «Bender Medsystems»).

Статистическую обработку проводили с использованием пакета программы «Statistica for Windows». Результаты представляли как М±m, где М — среднее арифметическое, m — ошибка среднего. Достоверность различий между группами оценивали с помощью критерия Вилкоксона для связанных величин и U-теста или t-критерия Стьюдента для несвязанных величин. Достоверным считали отличие при p<0,05. Для определения корреляционных связей использовали коэффициент линейной корреляции Пирсона (r).

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление