Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер 2 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2013, № 4

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 4'2013

Показатели иммунного ответа при иммунизации животных вакциной против клещевого энцефалита в сочетании с цитокинами

Ж.И. Авдеева, С.Е. Акользина, Н.А. Алпатова, Н.В. Медуницын

Использование цитокинов в качестве адъювантов повышает эффективность иммунизации экспериментальных животных против клещевого энцефалита. Наибольшая активность выявлена при одновременном введении вакцины и следующих препаратов цитокинов (рекомбинантного человеческого (рч)): рчIL-1β, рчIL-2, рчTNFα, имунофана, гибридного белка неотима, либо комплекса цитокинов, включавшего рчTNFα, рчIL-1β, рчIL-2, которые усиливали иммуногенность вакцины против клещевого энцефалита на 15–58%. В группах животных, иммунизированных вакциной на фоне введения исследуемых цитокинов, отмечено повышение протективной активности вакцины и возрастание количественного содержания Т- и В-лимфоцитов селезенки и усиление антигенспецифической пролиферации лимфоцитов, что свидетельствует об активации специфического клеточного иммунного ответа под влиянием цитокинов. (Цитокины и воспаление. 2013. Т. 12. № 4. С. 38–42.)

Ключевые слова: цитокины, адъюванты, клещевой энцефалит, иммунный ответ.

Вопросы регуляции иммунного ответа как в норме, так и при патологии являются чрезвычайно важными для клинической иммунологии. В настоящее время разрабатываются новые подходы к созданию медицинских препаратов, обладающих иммуномодулирующей активностью, на основе эндогенных медиаторов иммунной системы. К ним могут быть отнесены такие природные соединения как цитокины, биологическая активность которых известна [2, 3, 6, 8, 9]. Направление по использованию цитокинов в качестве иммуноадъювантов для оптимального формирования поствакцинального иммунитета является перспективным. Имеются сообщения по использованию ряда цитокинов (IL-1, IL-2, IFNγ, GM-CSF и др.) при вакцинации против гепатита А, гепатита В, бешенства, малярии, герпеса и других инфекций [1, 2, 5, 7, 10, 12–14, 17]. Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что цитокины могут быть использованы в качестве иммуноадъювантов при вакцинации, обеспечивая активацию вакцинального процесса. Вопросы повышения эффективности вакцинопрофилактики особенно значимы для лиц с иммунодефицитным состоянием. Иммуноадъюванты на основе эндогенных медиаторов, воздействуя на цитокиновый профиль, изменяют развитие иммунного ответа преимущественно по клеточному или гуморальному типу. Стимуляция того или иного вида иммунного ответа может быть достигнута путем использования определенных цитокинов, которые, стимулируя синтез эндогенных цитокинов, оказывают влияние на развитие антигенспецифического иммунного ответа [4, 11, 15, 16].

Цель настоящей работы заключалась в изучении влияния рекомбинантных цитокинов человека (рч), таких как IL-1β, IL-2, TNFα, IFNα, IFNγ, а также рекомбинантного белка тимозина α1, гибридного белка неотима и имунофана на показатели клеточного и гуморального иммунного ответа экспериментальных животных при иммунизации вакциной против клещевого энцефалита в сочетании с цитокинами.

Материалы и методы

Экспериментальные исследования по изучению адъювантных свойств цитокинов проведены на 1320 мышах линии Balb/c массой 14–16 г. Животные получены из Центрального питомника лабораторных животных РАМН «Биомодель».

В работе использованы следующие препараты рекомбинантных цитокинов человека: беталейкин (рчIL-1β), ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России (Санкт-Петербург); ронколейкин (рчIL-2), ООО «БИОТЕХ» (Санкт-Петербург); альнорин (рчTNFα), гаммаферон (рчIFNγ) и реаферон (рчIFNα), НИКТИ БАВ ГНЦ ВБ «Вектор» (г. Бердск).

Использовали также препараты тимозин-α1 человека рекомбинантный (рчTα) и гибридный белок неотим, состоящий из рчTNFα и рчTα (Тα-TNF-Тα), НИИ прикладной микробиологии (г. Оболенск); имунофан, НПП «БИОНОКС» (г. Москва).

Все указанные препараты условно объединены под термином «цитокины».

В работе использована инактивированная культуральная вакцина клещевого энцефалита (ВКЭ) производства ИПВЭ им. М.П. Чумакова РАМН (Москва).

Исследования проведены с использованием стандартной модели на мышах линии Balb/c, схема введения вакцины соответствовала схеме, применяемой для контроля качества вакцины по показателю иммуногенной активности.

Опытные группы животных были иммунизированы вакциной на фоне одновременного введения цитокинов. Контрольным группам животных вводили ВКЭ без цитокинов.

ВКЭ вводили внутрибрюшинно в разведениях 1:10, 1:32, 1:100, 1:320 трехкратно с интервалом в одни сутки в объеме 0,5 мл. Каждая группа, соответствовавшая одному из разведений вакцины, включала 10–15 мышей. Цитокины применяли либо в виде монопрепаратов, либо комплекса отдельных цитокинов в следующих дозах из расчета на 1 мышь: рчIL-1β — 10 нг, рчIL-2 — 100 МЕ, рчTNFα — 5–10 ЕД, рчIFNγ — 2000 ЕД, рчIFNα — 10000 ЕД, рчTα — 1 мкг, неотим — 1 мкг, имунофан — 0,05 мкг. Цитокины вводили мышам подкожно в объеме 0,5 мл.

На девятый день после окончания иммунизации животным вводили внутрибрюшинно заражающую дозу вируса клещевого энцефалита (тест-штамм «Абсеттаров»).

Эффективность иммунизации экспериментальных животных ВКЭ, используемой как в сочетании с препаратами цитокинов, так и без цитокинов, оценивали по следующим показателям:

– процент выживших животных в группах, соответствовавших разведениям вакцины;

– величина предельного разведения вакцины, обеспечивавшая 50% выживаемость животных при заражении вирусом клещевого энцефалита (ПР50), рассчитанная по методу Reed-Muench [15];

– величина минимальной иммунизирующей дозы ВКЭ, защищавшая 50% животных (МИД50) при заражении вирусом клещевого энцефалита (МИД50 вычисляли по формуле 0,5:ПР50, где 0,5 — обьем разовой дозы вакцины).

Для изучения влияния цитокинов на развитие поствакцинального иммунитета проводили оценку состояния клеточного и гуморального иммунного ответа экспериментальных животных, иммунизированных ВКЭ на фоне введения препаратов цитокинов. Состояние клеточного иммунного ответа оценивали по количественному содержанию Т- и В-лимфоцитов (Лф) в селезенке и их функциональной активности, тестируемой в реакции бласттрансформации с митогеном (фитогемагглютинином (ФГА)) и специфическим антигеном. Содержание Лф определяли цитотоксическим тестом с использованием специфических антител. Селезенки мышей были взяты через 8 суток после заключительного введения препаратов, т. е. в те сроки, когда оценивали устойчивость животных к вирусу клещевого энцефалита.

Гуморальную форму иммунного реагирования экспериментальных животных, иммунизированных ВКЭ, оценивали по содержанию в сыворотке крови гемагглютинирующих антител. Титр антител определяли в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) с использованием коммерческого диагностикума вируса клещевого энцефалита (НИИВС, г. Томск). Сыворотки крови мышей линии Balb/c отбирали через 8 дней после последнего введения препаратов. Каждый испытуемый образец сыворотки представлял собой пул сывороток, полученный от четырех мышей одной группы. Тестирование проводили микрометодом РТГА с 2-кратным разведением сывороток и одной дозой антигена, соответствовавшей 8 АЕ, при температуре 4 °С. Реакцию учитывали через 18–20 часов.

Статистическую обработку данных проводили с использованием стандартного пакета статистических программ. Достоверность уровня различия сравниваемых величин оценивали с помощью t-критерия Стьюдента.

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление