Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2014, № 2

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 2'2014

Влияние синтетического производного аллобетулинола на гуморальный и клеточный иммунные ответы

А.Е. Касторнова, К.Л. Крышень, Д.Д. Бекетова, М.Н. Макарова, В, Г. Макаров

Полусинтетические тритерпеноиды олеананового типа обладают высокой биологической активностью, улучшенными фармакокинетическими показателями, и действуют как многофункциональные (мультитаргетные) агенты на разных уровнях регуляции организма. Для определения иммуномодулирующих свойств у нового синтезированного тритерпеноида олеананового ряда — 3-O-пропионат аллобетуленола (19β,28-эпокси-18α-олеанан-3β-ил пропионат) (АН-12) — было проведено исследование в отношении действия на гуморальный и клеточный иммунный ответы. Выраженность гуморального иммунитета оценивали путем определения в сыворотке крови титра антител. Оценку клеточного иммунного ответа проводили в реакции гиперчувствительности «замедленного» типа и пролиферативной активности Т- и В-лимфоцитов при курсовом введении исследуемого вещества (ИВ). Оценку функциональной активности Т-лимфоцитов проводили с помощью анализа спонтанной и индуцированной продукции цитокинов IL-4 и IFNγ. В реакции бласттрансформации лимфоцитов ИВ регулировало спонтанную и индуцированную продукцию цитокинов, отвечающих за развитие B-клеточного иммунного ответа (IL-4), сдвигая соотношение Th1/Th2 в сторону Th2. Отмечено дозозависимое повышение титра антител, причем увеличение концентрации антител в 4–8 раз по сравнению с контрольной группой. Таким образом показано, что 3-О-пропионат аллобетуленола стимулирует гуморальный иммунный ответ, что важно использовать в профилактике и лечении энтеровирусных инфекций у детей. (Цитокины и воспаление. 2014. Т. 13. № 2. С. 34–38.)

Ключевые слова: гуморальный иммунный ответ, клеточный иммунный ответ, титр антител, гиперчувствительность «замедленного» типа, реакция бласттрансформации.

В последние годы в мире наметилась тенденция активизации энтеровирусной инфекции, о чем свидетельствуют постоянно регистрируемые эпидемиологические подъемы заболеваемости среди детей [3].

Особенности иммунной системы детского организма в зависимости от возраста накладывают отпечаток на клиническое течение, исход болезни и характер иммунологического реагирования. Причем действие самого патологического фактора в период роста и развития может привести к декомпенсации в системе, что делает детский возраст группой риска в плане формирования иммунных дисфункций [2]. На первой неделе заболевания для детей 3–6 и 13–17 лет характерен Th2-иммунный ответ, а для 7–12 лет — Th2/Th1. К третьей неделе энтеровирусного менингита для пациентов 3–6 и 7–12 лет типичен Th1/Th2 иммунный ответ, а для 13–17 лет сохраняется Th2 тип [2].

В настоящее время широко применяются иммуномодуляторы, действующие на клетки моноцитарно-макрофагальной системы, активизирующие специфические и неспецифические факторы защиты организма. В медицинской практике применяется ряд препаратов тритерпеновой природы для лечения воспалительных и инфекционных заболеваний, а именно кислота глицирризиновая и ее соли, кислота олеаноловая, азиатикозид, кислота глицирретовая (эноксолон) и ее соли, натрия карбеноксолон и эсцин [4, 8–10].

Показано, что многие полусинтетические тритерпеноиды олеананового типа обладают высокой биологической активностью, улучшенными фармакокинетическими показателями, и действуют как многофункциональные (мультитаргетные) агенты на разных уровнях регуляции организма. QS-21 (стимулон) — природный олеанановый сапонин — используется в качестве иммунологического адъюванта для лечения различных видов рака. QS-21 получают из коры мыльного дерева (Quillaja saponaria) или синтетическим путем [6, 7].

Аллобетуленол (аллобетулин, аллобетулинол) представляет собой тритерпеновый моноспирт олеананового ряда с молекулярной формулой C30H50O2, содержит в своей структуре скелет олеанана, гидроксильную группу при С-3 положении с β-конфигурацией и 19β,28-эпокси группу. Аллобетуленол получен впервые в 1922 г. химическим путем, он крайне редко встречается в природных источниках [1].

Следует подчеркнуть, что аллобетуленол является перспективной тритерпеновой платформой промышленного масштаба в поиске новых лекарств путем химической модификации. Его синтетические аналоги проявляют широкий спектр биологического действия, а именно противовирусную, иммунотропную, антибактериальную, противогрибковую, противовоспалительную, цитотоксичную, антифидантную (подавляющую питание насекомых), гликогенфосфорилаза-ингибирующую активность [5].

В нашем исследовании объектом являлся тритерпеноид олеананового ряда – 3-O-пропионат аллобетуленола (19β,28-эпокси-18α-олеанан-3β-ил пропионат), синтезированный на кафедре фармацевтической химии Санкт-Петербургской химико-фармацевтической академии д. х. н., проф. Абышевым А.З. Целью работы было выявление иммуномодулирующих свойств у нового вещества в отношении гуморального и клеточного иммунных ответов.

Материалы и методы

Животные. В работе были использованы мыши-самцы линии Balb/c весом 18–20 г, полученные из питомника лабораторных животных РАМН «Рапполово». Животных содержали в стандартных условиях в соответствии с «Руководством по содержанию и использованию лабораторных животных» и с Правилами, утвержденным МЗ СССР 06.07.73 г., по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев). Животных содержали в стандартных условиях вивария (при естественном освещении, температуре воздуха +18–22 °С и влажности 50–70 %) в поликарбонатных клетках фирмы Charles River Laboratories Inc., тип 3H, со стальными решетчатыми крышками с кормовым углублением. Эксперименты проводили согласно протоколу испытаний, который был одобрен биоэтической комиссией.

Способ введения и выбор доз. В тестах по определению титра антител, гиперчувствительности замедленного типа и активности Т-хелперов исследуемое вещество (ИВ) АН-12 вводили подкожно мышам в область холки в дозах 0,1, 1, 10 и 50 мг/кг в объеме 200 мкл. Реакцию бласттрансформации лимфоцитов ставили на спленоцитах мышей в дозах 1 и 10 мг/кг. Растворителем для ИВ служил 100 % диметилсульфоксид (ДМСО) (ООО «Тульская фармацевтическая фабрика», Россия).

Анализ гуморального иммунного ответа. Титр антител определяли на 8-й день после иммунизации мышей внутрибрюшинным введением эритроцитов барана (5×107 ЭБ/мышь) и введением на протяжении семи дней ИВ. Контролем служили мыши, иммунизированные эритроцитами барана и получавшие ДМСО по той же схеме.

Реакцию гемагглютинации с ЭБ и определение титра антител выполняли в 96-луночных круглодонных планшетах для иммунологических реакций («Медполимер», Россия). Готовили двукратные разведения исследуемой сыворотки в двух повторах в объеме 100 мкл. За титр принимали последнее разведение, при котором еще наблюдался положительный результат.

Анализ клеточного иммунного ответа. Для оценки влияния ИВ на клеточный иммунный ответ использовали реакцию гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) у мышей. При постановке реакции ГЗТ раствор динитрохлорбензола (ДНХБ) (Sigma-Aldrich, USA) в ДМСО вводили двукратно: для сенсибилизации и разрешения. На 1-й день исследования сразу после введения тестируемых веществ животным проводили однократную инъекцию 2 % раствора ДНХБ в ДМСО подкожно в межлопаточную область для сенсибилизации организма в объеме 200 мкл. Разрешение осуществляли на 7-й день исследования, животным проводили инъекцию 0,05 мл 0,1 % раствора ДНХБ в 50 % ДМСО в подушечку «опытной» лапы (задняя правая). В «контрольную» лапу (задняя левая) вводили 0,05 мл стерильного физиологического раствора. Результаты реакции регистрировали путем определения массы «опытной» и «контрольной» лап и расчета индекса реакции для каждого животного по формуле:

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление