Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер 2 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2014, № 2

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 2'2014

Синтез ангиогенных и ангиостатических СXС-хемокинов и их рецепторов в синовиальной оболочке при ревматоидном артрите

Д.А. Жебрун, Арег. А.Тотолян, А.Л. Маслянский, А.Г. Титов, А.П. Патрухин, А.А. Костарева, И.С. Гольцева

Целью работы было исследование внутрисуставной экпрессии ангиогенных и ангиостатических CXC-хемокинов и их рецепторов в синовиальной оболочке больных ревматоидным артритом (РА). Методом количественной ПЦР в реальном времени обнаружены различия в характере экспрессии мРНК нескольких СXС-хемокинов и их рецепторов в ревматоидном синовиуме по сравнению с «нормальной» синовиальной оболочкой и синовиальной оболочкой при остеоартрозе. Наиболее выраженное усиление экспрессии при РА обнаружено для CXCL6/GCP-2, CXCL9/MIG and CXCL11/ITAC. Выявлены корреляционные зависимости между экспрессией определенных хемокинов и рецепторов и некоторыми клиническими (индекс DAS28, ВАШ), а также лабораторными показателями (РФ, C-реактивный белок). (Цитокины и воспаление. 2014. Т. 13. № 2. С. 39–44.)

Ключевые слова: ревматоидный артрит, хемокины, экспрессия, ангиогенез, синовиальная оболочка.

Этиология ревматоидного артрита (РА), одного из наиболее распространенных аутоиммунных заболеваний, на сегодняшний день остается неизвестной. Одним из особенностей РА является гипертрофия синовиальной оболочки, ее инвазивный рост и деструкция костной и хрящевой тканей [5]. Внутри паннуса идет активный процесс ангиогенеза, в котором участвует огромное количество медиаторов, таких как цитокины, молекулы клеточной адгезии, факторы роста, матриксные металлопротеиназы, костимуляционные молекулы, хемокины. Последние играют ключевую роль как в нормальных, так и в патологических процессах, протекающих в организме человека: иммунных и воспалительных реакциях, вирусных инфекциях, ангиогенезе, клеточной дифференцировке, продукции коллагена, пролиферации гематопоэтических предшественников, опухолевом росте и метастазировании, онтогенезе центральной нервной системы [4]. Хемокины подразделяются на 4 класса в зависимости от расположения консервативных цистеинов в белковой молекуле: CXC, CC, CX3C и C [15]. В контексте ангиогенеза наибольший интерес представляет класс CXC. Так, к ангиогенным хемокинам относят все хемокины этого класса, содержащие аминокислотную последовательность Глу-Лей-Арг (т.н. ELR+ хемокины): CXCL1/Gro-α, CXCL2/Gro-β, CXCL3/Gro-γ, CXCL5/ENA78, CXCL6/GCP-2, CXCL7/NAP-2, CXCL8/IL-8. К ангиостатическим относятся все ELR-отрицательные: CXCL4/PF4, CXCL9/MIG, CXCL10/IP-10, CXCL11/I-TAC, CXCL13/BCA-1 [12]. Рецепторы для CXC класса, как и для хемокинов других классов, представляют собой белки с 7 трансмембранными доменами, сопряженные с Gбелком. Сейчас известно 7 различных рецепторов для CXC хемокинов [8]. Основными продуцентами CXC-хемокинов в синовиальной оболочке (СО) являются макрофаги, фибробласты; эндотелиоциты также могут их синтезировать. Так, изолированные синовиальные макрофаги конститутивно синтезируют CXCL8/IL-8, а синовиальные фибробласты начинают синтезировать CXCL8/IL-8 в ответ на воздействие IL-1α, IL-1β, липополисахарида и фактора некроза опухоли (TNFα) [13]. Механизмы индукции ангиогенеза хемокинами CXC-класса могут быть совершенно различными. Так, например, IL-8 прямо вызывает миграцию и пролиферацию эндотелиальных клеток через рецептор CXCR2 [6], тогда как CXC12/SDF-1 продуцируется при гипоксии и стимулирует образование VEGF, а также вызывает миграцию эндотелиальных предшественников [10]. Ангиостатические хемокины этого класса могут образовывать так называемую регуляторную петлю с VEGF: VEGF стимулирует выработку CXCL10/IP-10, а, с другой стороны, CXCL10/IP-10 подавляет VEGF-индуцированный ангиогенез [3]. Несмотря на очевидную важность изучения патологических процессов именно внутри ревматоидного синовиума, большинство результатов получено с использованием сыворотки крови, клеточных культур или моделей артрита у животных. Эти подходы не могут полностью выявить, что в действительности происходит в пораженном суставе in vivo. Целью данной работы стало определение паттерна внутрисуставной экпрессии ангиогенных и ангиостатических CXC-хемокинов и их рецепторов при РА.

Материалы и методы

Пациенты. Общее количество пациентов составило 65 человек. Все пациенты проходили стационарное лечение в ФГБУ «ФЦСКЭ имени В.А. Алмазова» Минздрава России, СПб ГУЗ «Городской гериатрический медико-социальный центр», а также в СПб ГУЗ «Городская туберкулезная больница № 2». В основную группу вошли 28 пациентов с РА, в группу сравнения – 22 пациента с остеоартритом (ОА). При ОА основным патологическим процессом является поражение суставного хряща, тогда как признаки гипертрофии синовиума и ангиогенеза существенно менее выражены, чем при РА, или не присутствуют вообще. В контрольную группу («норма») были включены 15 человек с травмами суставов в анамнезе, при отсутствии на момент проведения исследования признаков активного воспалительного процесса по лабораторным показателям (нормальные значения СОЭ, C-реактивного белка (СКЗ), количества лейкоцитов в анализе крови), а также при отсутствии синовита артроскопически. В этом случае полученная СО считалась условно «нормальной». Для оценки активности РА был использован композитный индекс DAS28, учитывающий число болезненных суставов из 28 возможных (ЧБС28), число припухших суставов из 28 возможных (ЧПС28), скорость оседания эритроцитов (СОЭ) и общую оценку состояния здоровья по 100-миллиметровой визуальной аналоговой шкале (ВАШ). Для оценки функциональной способности пациента был использован опросник состояния здоровья (HAQ – Health Assessment Questionnaire); также активность РА оценивали рентгенологически (стадии по Штейнброкеру) [2]. Определяли следующие лабораторные показатели: концентрации ревматоидного фактора (РФ) (ИФА, Orgentec, Германия; иммунотурбидиметрия на анализаторе OLYMPUS, Япония), концентрация антител к циклическому цитруллинированному пептиду (АЦЦП) (ИФА, Euroimmun AG, Германия). Характеристика групп представлена в табл. 1.

Биоптаты СО отбирались хирургом при плановом оперативном вмешательстве (ревизионная артроскопия, диагностическая артроскопия, эндопротезирование, артроскопическая синовэктомия). На проведение данного исследования было получено согласие Этического комитета ФБУН «Санкт-Петербургский НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера». В течение нескольких минут после взятия материала образцы СО замораживали в жидком азоте для предотвращения деградации РНК и хранили в нем до этапа выделения РНК. Выделение РНК из СО проводили методом гуанидинтиоцианат-фенол-хлороформной экстракции с использованием тризола (TRIzol® Reagent, Invitrogen) согласно инструкции производителя. Контроль качества выделенной РНК проверяли на биоанализаторе Agilent (Agilent Technologies, Inc, США) с использованием чипов RNA Nano Chips (Agilent Technologies, Inc, США), как описано ранее [1]. После обработки образцов РНК ДНКазой (Fermentas) проводили реакцию обратной транкрипции с использованием набора Revertaid (Fermentas) для синтеза первой цепи кДНК согласно инструкции производителя. Далее на кДНК проводили количественную ПЦР в реальном времени на приборе ABI7500 (Applied Biosystems, Сингапур) с использованием наборов компании Синтол (Москва). Определяли экспрессию мРНК двенадцати СXС-хемокинов и пяти рецепторов: CXCL1/Gro-α, CXCL2/Gro-β, CXCL3/Gro-γ, CXCL5/ENA78, CXCL6/GCP-2, CXCL7/NAP-2, CXCL8/IL-8, CXCL9/MIG, CXCL10/IP-10, CXCL11/I-TAC, CXCL12/SDF-1, CXCL13/BCA-1, CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4 и CXCR5. Для детекции продуктов амплификации использовали системы флуоресцентных зондов TaqMan (Синтол). Специфические праймеры и флуоресцентные зонды подбирали с помощью программ NCBI/Primer-BLAST и Primer Express 3.0. Последовательности праймеров и зондов опубликованы ранее [1]. Анализ результатов проводили по методу относительного подсчета (метод дельта Ct) с нормализацией по эндогенным референс-генам GAPDH (глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназы) и HPRT (гипоксантин-гуанин фосфорибозилтрансферазы). Статистическую обработку проводили в программе GRAPH Pad Prism 6.0 и MS Excel. Использовали как параметрические (t-тест), так и непараметрические (Манна – Уитни) тесты. Данные исследований представлены в виде медианы и интерквартильного размаха (Ме [Q25;Q75]).

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление