Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер 2 номер
3 номер 4 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2014, № 2

Подписаться на 2018 год

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 2'2014

Половые различия морфофункциональных и иммунологических проявлений синдрома системного воспалительного ответа у десятидневных крыс Вистар

А.М. Косырева, Е.Ю. Симонова, О.В. Макарова, Л.П. Михайлова

Проведена оценка половых различий морфофункциональных изменений тимуса, печени, легких и цитокинового профиля у десятидневных крыс Вистар в динамике развития синдрома системного воспалительного ответа (ССВО). ССВО моделировали внутрибрюшинным введением десятидневным самкам и самцам крыс Вистар ЛПС E. coli штамма О26:В6 в дозе 15 мг/кг. Течение ССВО исследовали на 1-е и 4-е сутки после введения ЛПС. Определяли содержание стероидных половых гормонов в сыворотке крови, эндотоксина, активность аланинаминотрансферазы (АлАТ) и аспарагиновой трансферазы (АсАТ), TGFβ и неоптерина; оценивали уровень продукции конканавалинА-активированными клетками селезенки IL-2, IL-4, IL-6, IFNγ и TNFα. Исследовали морфологические изменения тимуса, печени и легких. Показано, что ССВО у самок и самцов десятидневных крыс Вистар характеризуется увеличением уровня эндотоксина в сыворотке крови, дистрофическими и воспалительными изменениями печени и легких, акцидентальной инволюцией тимуса II–III стадии, снижением уровня продукции IL-2, TNFα, IFNγ. По сравнению с самками, у самцов воспалительные и альтеративные изменения печени были более тяжелыми, что сочетается с более выраженными реактивными изменениями тимуса. По сравнению с самцами у самок на 1-е сутки ССВО в культуральной жидкости клеток селезенки был ниже показатель IL-2 и TNFα, а на 4-е сутки — показатель IFNγ, что отражает более выраженную поляризацию иммунного ответа по Th1-типу у самцов. Таким образом, в препубертатном периоде, характеризующемся отсутствием различий содержания половых стероидов у самок и самцов, течение ССВО имеет ряд особенностей, которые необходимо учитывать в экспериментальных исследованиях и терапии инфекционно-воспалительных заболеваний. (Цитокины и воспаление. 2014. Т. 13. № 2. С. 45–50.)

Ключевые слова: синдром системного воспалительного ответа, половые различия, препубертатный период, крысы.

По данным литературы, у человека и экспериментальных животных в репродуктивном возрасте тяжесть течения инфекционно-воспалительных заболеваний определяется генотипом, зависит от пола и уровня стероидных половых гормонов [6, 13]. Известно, что в препубертатном периоде у человека и экспериментальных животных уровень половых стероидов ниже, чем в репродуктивном возрасте [13]. Watson R.S. и др. выявлена большая частота встречаемости синдрома системного воспалительного ответа (ССВО) и сепсиса у детей первого года жизни и снижение числа случаев развития острого сепсиса к 15–19 годам, что, по-видимому, связано с повышением уровня половых стероидов [15]. Однако Ghuman A.K. и др. не установили половых различий у детей в препубертатном периоде по показателям тяжести течения и смертности от сепсиса [11]. В пубертатном периоде, характеризующемся выраженными различиями содержания половых гормонов, у мальчиков отмечается более высокая частота встречаемости сепсиса [11]. Bindl L. и др. показано, что среди детей 1–12 месяцев жизни сепсис встречается у мальчиков в 2,8 раза чаще, чем у девочек [8]. В возрастном периоде от 1 года до 8 лет частота встречаемости сепсиса у мальчиков снижается, и к 8-ми годам показатели не отличаются от таковых у девочек. В литературе в основном представлены данные о половых различиях частоты развития, тяжести течения и показателях смертности от сепсиса у детей в период полового созревания [5]. В то же время в ней отсутствуют сведения о половых различиях морфофункционального состояния иммунной системы и органов-мишеней при ССВО у животных и человека в препубертатном периоде. Поэтому целью исследования была оценка половых различий морфофункциональных изменений тимуса, печени, легких и цитокинового профиля у десятидневных крыс Вистар в динамике развития ССВО.

Материалы и методы

Исследования проведены на десятидневных крысах Вистар обоего пола (n=51), массой тела 20–25 г. При работе с экспериментальными животными руководствовались приказом Минздрава СССР № 755 от 12.08.1977 г. На проведение эксперимента было получено разрешение биоэтической комиссии ФГБУ «НИИ морфологии человека» РАМН (протокол № 5 от 12.03.2008 г.). Для получения десятидневных крыс использовали 15 половозрелых животных (10 самок и 5 самцов). Продолжительность беременности у самок составляла 21–23 сутки. Потомство одной самки было представлено 6–8 особями.

ССВО моделировали внутрибрюшинным введением липополисахарида (ЛПС) E.coli штамма O26:B6 («Sigma», США) в высокой дозе 15 мг/мл. Предварительно в эксперименте было показано, что при введении десятидневным крысам Вистар ЛПС в дозе 1,5 мг/кг, использованной для моделирования ССВО у половозрелых особей, отсутствовали морфологические проявления ССВО в органах-мишенях: дистрофические изменения и некрозы в печени и интраальвеолярный отек с инфильтрацией межальвеолярных перегородок нейтрофилами в легких. При введении ЛПС десятидневным крысам в более высокой дозе (15 мг/кг) в печени и легких были выявлены морфологические признаки ССВО.

Животных выводили из эксперимента передозировкой диэтилового эфира на 1-е (самцы: n=9, самки: n=10) и 4-е сутки (самцы: n=7, самки: n=8) после введения ЛПС. Крысам контрольной группы (самцы: n=10, самки: n=7) внутрибрюшинно вводили физиологический раствор.

Кровь забирали из шейных вен, центрифугировали при 200 g в течение 20 минут, отбирали сыворотку, замораживали ее при температуре -70 °С и хранили в течение 2 месяцев. В сыворотке крови твердофазным иммуноферментным методом оценивали содержание неоптерина («IBL», Германия), трансформирующего ростового фактора β (TGFβ) («eBioscience», Австрия), общего и свободного тестостерона, эстрадиола и прогестерона («DBC», Канада), с помощью хромогенного LAL-теста — уровень эндотоксина («Hycult Biotech», Нидерланды). С целью оценки тяжести поражения печени в сыворотке крови определяли активность индикаторных ферментов АсАТ и АлАТ (КФ 2.6.1.1). Использовали наборы реактивов «DiaSys» («Diagnostic Systems Gmbh», Германия).

Проводили забор тимуса, печени и легких. Тимус и печень фиксировали в растворе Буэна в течение 24 ч, легкие — в жидкости Карнуа в течение 2 ч, заливали в парафин, изготовляли гистологические срезы, окрашивали их гематоксилином и эозином. В гистологических срезах объемную плотность функциональных зон тимуса оценивали под световым микроскопом методом точечного счета. Ширину субкапсулярного слоя тимуса измеряли в микрометрах при ув. 640. На гистологических препаратах легких проводили подсчет количества нейтрофилов в межальвеолярных перегородках в стандартном поле зрения площадью 25 тыс. мкм2. Площадь некрозов в печени оценивали в программе «Image Scope М» в интерактивном режиме с использованием камеры «Leica DFC290». Измерения проводили на всей площади гистологического препарата, результаты выражали в мкм2.

Для индукции синтеза и секреции цитокинов суспензию клеток селезенки в концентрации 106/мл культивировали 20 ч в 1 мл полной ростовой среды с добавлением конканавалина А (КонА) (5 мкг/мл) в 24-луночных культуральных планшетах при 37 °С и 5 % СО2. Среда для культивирования состояла из RPMI-1640 (ООО «КомпанияПанЭко») с 5 % инактивированной телячьей эмбриональной сыворотки, 2 мМ глутамина и 50 мкг/мл гентамицина. С помощью твердофазного иммуноферментного метода (тест-системы «eBioscience», Австрия) в ней определяли концентрацию интерлейкинов IL-2, IL-4, IL-6, фактора некроза опухоли α (TNFα), интерферона γ (IFNγ).

Полученные данные подвергали статистической обработке. Достоверность различий определяли с помощью параметрических и непараметрических критериев («Statistica 7.0», SigmaStat). Различия считали достоверными при p<0, 05.

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!


Начата подписка на 2018 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление