Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2014, № 2

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 2'2014

Способность пептидов гапонина регулировать цитокинпродуцирующую функцию клеток крови при аденокарциномах желудка

А.В. Соснина, А.И. Аутеншлюс, Н.А. Вараксин, Л.К. Байдакова, Т.В. Ракитина, В.М. Липкин

Цель исследования – изучение влияния пептидов гапонина, фактора, выделенного из клеток линии HL-60, на цитокинпродуцирующую функцию клеток периферической крови и его взаимосвязь с уровнями аутоантител к этим пептидам при аденокарциномах желудка. С помощью иммуноферментного анализа определяли концентрацию цитокинов в супернатантах клеток цельной крови, инкубированных с α- и β-пептидами гапонина, в сыворотке крови определяли уровни аутоантител к этим пептидам. Исследование показало, что α-пептид гапонина повышает продукцию IL-1Ra, IL-6, IL-8, G-CSF и GM-CSF, в то время как β-пептид гапонина – только IL-1Ra, IL-6 и IL-8; α-пептид гапонина повышает продукцию IL-1Ra, IL-6, IL-8, G-CSF и GM-CSF в большей степени, чем β-пептид гапонина. Чем выше уровень аутоантител к α- и β-пептидам гапонина класса М, тем более выражено их влияние на продукцию IL-8 и GM-CSF. Чем выше уровень аутоантител субкласса G2 к α-пептиду гапонина, тем более выражено его влияние на продукцию IL-6 и чем выше уровень аутоантител субкласса G3 к α-пептиду гапонина, тем менее выражено его влияние на продукцию G-CSF клетками периферической крови. Предполагается, что аутоантитела к пептидам гапонина опосредуют воздействие этих пептидов на цитокинпродуцирующую функцию иммунокомпетентных клеток. (Цитокины и воспаление. 2014. Т. 13. № 2. С. 51–55.)

Ключевые слова: цитокины, гапонин, аутоантитела, аденокарциномы.

Введение

Из культуральной среды клеток HL-60 промиелоцитарного лейкоза человека группой сотрудников Института биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН был выделен белок, названный гапонином, с молекулярной массой 20 кДа [1], взаимодействующий с глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназой, ключевым ферментом гликолиза, обладающим также широким спектром неканонических функций [7, 13, 14]. Было выделено 2 формы мРНК, кодирующие пептиды гапонина человека: α-гапонин содержащий 165 аминокислотных остатков [1], и β-гапонин, содержащий 64 аминокислотных остатка. В то же время, последовательности 50 N-концевых аминокислотных остатков у них были одинаковыми. По-видимому, мРНК β-гапонина человека возникает за счет выщипления 3 экзона в гене гапонина в процессе сплайсинга, в результате чего происходит сдвиг рамки считывания и стоп кодон возникает раньше. С помощью антител было обнаружено присутствие эндогенного гапонина в человеческих клеточных линиях различного происхождения: U-87 MG (глиобластома), Hek-293 (эмбриональные клетки почки), PANC-1 (рак поджелудочной железы), MCF7 (рак молочной железы), NCl-H460 (рак легкого), К-562 (миелоидный лейкоз), HL-60 (промиелоцитарный лейкоз). В этих клетках была обнаружена специфическая мРНК, кодирующая гапонин [1, 2].

Было показано, что при аденокарциномах толстой кишки в сыворотке крови повышены уровни антител класса G к α- и β-пептидам гапонина, субкласса G3 к α-пептиду гапонина и снижен уровень антител субкласса G1 к этому пептиду. Уровни антител к пептидам гапонина субкласса G2 были более высокими при большем содержании высокодифференцированных клеток в опухоли [3]. Не исключено, что аутоантитела к пептидам гапонина являются регуляторами их биологических эффектов, которые могут реализовываться в их влиянии на продукцию цитокинов, участвующих в опухолевой прогрессии. Целью исследования явилось изучение влияния пептидов гапонина на цитокинпродуцирующую функцию клеток периферической крови и его взаимосвязь с уровнями аутоантител к этим пептидам при аденокарциномах желудка.

Материалы и методы

Материалом исследования служила периферическая кровь 25 больных с аденокарциномами желудка и 16 условно здоровых лиц без злокачественных новообразований в анамнезе и без обострения инфекционно-воспалительных заболеваний. Для оценки влияния пептидов гапонина (α-пептид и β-пептид: α-пептид молекулярная масса 2,7 кДа соответствует последовательности 29-52 α-гапонина, а β-пептид – молекулярная масса 1,6 кДа соответствует последовательности 51-64 β-гапонина; получены твердофазным пептидным синтезом [4] в лаборатории химии белка Федерального государственного бюджетного учреждения науки Российской академии наук Филиал института биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук), на цитокинпродуцирующую функцию клеток цельной крови, последние инкубировали 24 часа при 37оC в присутствии α- и β-пептидов гапонина в концентрации 2 мкг/мл и без них. В полученных супернатантах клеток определяли уровни IL-1Ra, IL-6, IL-8, G-CSF и GM-CSF с помощью иммуноферментного анализа с использованием наборов реагентов производства ЗАО «Вектор-Бест». Индексы влияния на продукцию цитокинов клетками крови высчитывали следующим образом: ИВ α-Hap равен отношению уровня цитокина в супернатанте клеток, обработанных α-пептидом гапонина, к уровню цитокина в супернатанте клеток, инкубированных без пептидов гапонина; ИВ β-Hap равен отношению уровня цитокина в супернатанте клеток, обработанных β-пептидом гапонина, к уровню цитокина в супернатанте клеток, инкубированных без пептидов гапонина.

Уровни аутоантител классов А, М, G и субклассов G1, G2, G3, G4 к пептидам гапонина определяли в сыворотке крови с помощью иммуноферментного анализа. Концентрация α- и β-пептидов гапонина составила 40 мкг/мл в забуференном изотоническом растворе хлорида натрия. Иммобилизация α- и β-пептидов осуществлялась пассивной сорбцией в лунки планшета для иммуноферментного анализа. После иммобилизации, для предотвращения неспецифической сорбции, лунки планшета обрабатывали 1,5% раствором бычьего сывороточного альбумина (фракция V), затем вносили образцы сывороток указанных выше пациентов. Использовали вторичные моноклональные антитела к иммуноглобулинам человека, меченные пероксидазой хрена, производства ООО «Полигност», Санкт-Петербург. Значения уровней аутоантител определяли по величине коэффициента К, являющегося отношением оптической плотности продукта реакции опытной сыворотки к оптической плотности продукта реакции контрольной сыворотки, представляющей собой лабораторный пул образцов здоровых лиц.

Статистическую обработку данных выполняли с использованием критерия парных сравнений Вилкоксона. Показатели выражены в виде медиан – Me, нижнего и верхнего квартилей (Q1; Q3). Рассчитывали коэффициент ранговой корреляции Спирмена (r). Уровень статистической значимости (p) принимали равным 0,05. Для статистической обработки данных применяли программу Statistica 6.0.

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление