Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2014, № 3

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 3'2014

Половые гистофизиологические различия иммунной системы у новорожденных крыс Вистар

Е.Ю. Симонова, А.М. Косырева, Е.А. Пономаренко

Целью исследования был сравнительный анализ уровня стероидных гормонов в сыворотке крови и гистофизиологических особенностей иммунной системы у новорожденных самцов и самок крыс Вистар. Проводили морфологическое и морфометрическое исследование тимуса, определяли концентрацию стероидных гормонов в сыворотке крови и уровень продукции цитокинов клетками селезенки иммуноферментным методом, проводили иммунофенотипический анализ основных субпопуляций лимфоцитов периферической крови методом проточной цитофлуориметрии. По сравнению с самцами у самок выше уровень эстрадиола в сыворотке крови, выше показатель объемной плотности коркового вещества тимуса, выше уровень продукции клетками селезенки IL-2, IFNγ и TNFα, выше показатели абсолютного и относительного количества Т-хелперов, В-лимфоцитов, CD4+CD8+ Т-лимфоцитов, активированных и регуляторных Т-лимфоцитов в периферической крови и выше показатель иммунорегуляторного индекса (соотношения CD4/CD8). Полученные данные указывают на активацию клеточного и гуморального иммунного ответа у новорожденных самок по сравнению с самцами. (Цитокины и воспаление. 2014. Т. 13. № 3. С. 38–42.)

Ключевые слова: иммунная система, половые различия, крысы Вистар, неонатальный период.

По данным литературы, половые гистофизиологические различия иммунной системы определяются кариотипом и уровнем стероидных половых гормонов [9]. Первая волна активизации биосинтеза и секреции половых гормонов у крыс возникает в эмбриогенезе и завершается через несколько дней после рождения [2]. Эмбриональный подъем продукции эстрогенов и андрогенов половыми железами у крыс происходит на 17–19 день внутриутробного развития [2]. В неонатальном периоде (4 сут после рождения у крыс) наблюдается снижение продукции половых гормонов гонадами, хотя уровень эстрадиола у новорожденных крыс остается высоким в течение 2 сут после рождения [11]. Иммунная система новорожденных особей характеризуется состоянием физиологического иммунодефицита, что выражается в функциональной незрелости клеток иммунной системы [5]. Изучению половых гистофизиологических различий иммунной системы у животных и человека в неонатальном периоде посвящено небольшое число работ, в которых охарактеризованы половые различия субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови и уровня продукции цитокинов иммунокомпетентными клетками [4, 10, 15]. Целью исследования был сравнительный анализ уровня стероидных гормонов в сыворотке крови и гистофизиологических особенностей иммунной системы у новорожденных самцов и самок крыс Вистар.

Материалы и методы

Исследование выполнено на 60 новорожденных самцах и самках крыс Вистар (возраст 1–2 дня). При работе с экспериментальными животными руководствовались приказом Минздрава СССР №755 от 12.08.1977 г.

Новорожденных самцов и самок крыс Вистар выводили из эксперимента передозировкой трихлорметана. Проводили забор тимуса для гистологического исследования. Тимус фиксировали в растворе Буэна, заливали в парафин, после чего изготавливали гистологические срезы, которые окрашивали гематоксилином и эозином. На гистологических препаратах тимуса под световым микроскопом оценивали объемную плотность структурно-функциональных зон методом точечного счета с помощью окулярной сетки Г.Г. Автандилова [1]. Ширину субкапсулярной зоны тимуса измеряли в микрометрах при ув. ×400.

С целью исследования уровня продукции цитокинов из селезенки крыс выделяли ядросодержащие клетки (спленоциты) по методике, описанной в руководстве R.I. Freshney [7]. В культуральной жидкости спленоцитов, активированных конканавалином А (5 мкг/мл), с помощью наборов «Bender MedSystems» определяли концентрации интерлейкина 2 (IL-2), интерлейкина-4 (IL-4), интерлейкина-6 (IL-6), фактора некроза опухолей альфа (TNFα) и интерферона гамма (IFNγ). В сыворотке крови определяли концентрации эстрадиола («Cusabio»), прогестерона («DBC»), тестостерона («DBC») и кортикостерона («IBL»). Измерения проводили с использованием микропланшетного иммуноферментного анализатора Anthos Reader 2010 («Anthos Labtec»).

Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови определяли методом проточной цитофлуориметрии на приборе Cytomics FC 500 («Beckman Coulter»). Абсолютное количество лейкоцитов и лимфоцитов в крови подсчитывали с помощью гематологического анализатора Celltac alpha MEK-6400 («Nihon Kohden»). В качестве антикоагулянта при заборе цельной крови использовали гепарин (50 ЕД/мл).

Для иммунофенотипического анализа основных субпопуляций лимфоцитов использовали антитела фирмы «eBioscience», конъюгированные с FITC (fluorescein isothiocyanate) или РЕ (phycoerythrin): anti-Rat CD3 (маркер Т-лимфоцитов); anti-Rat CD4 (маркер Т-хелперов); anti-Rat CD8a (маркер цитотоксических Т-клеток); anti-Rat CD45R (маркер В-лимфоцитов); anti-Rat CD25 (маркер активированных Т-клеток); аnti-Mouse/Rat Foxp3 (маркер регуляторных Т-клеток). Лизис эритроцитов в образцах цельной крови проводили с помощью раствора OptiLyse C Lysis Solution («Beckman Coulter»). Для выявления субпопуляции регуляторных Т-лимфоцитов использовали специальный набор Foxp3 Staining Buffer Set («eBioscience»). Проводили подсчет абсолютного и относительного количества лимфоцитов различных субпопуляций и иммунорегуляторного индекса (соотношения CD4/CD8).

Проводили статистическую обработку полученных результатов. Цифровые данные проверяли на нормальность распределения с помощью критерия Колмогорова – Смирнова в программе Statistica 7.0. Сравнение данных, подчиняющихся нормальному распределению, проводили с помощью параметрического t-критерия Стьюдента; в противном случае использовали непараметрический U-критерий Манна – Уитни. Для значений измеряемых показателей вычисляли медиану и интерквартильный размах (Med (25%–75%)) или среднее арифметическое и стандартную ошибку среднего (М±SE). Различия считали статистически значимыми при p < 0,05.

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление