Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер 2 номер
3 номер 4 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2014, № 4

Подписаться на 2018 год

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 4'2014

Роль апоптоза и экстратимической миграции в развитии атрофии тимуса при стрессе

И.С. Старская, О.В. Гурова, М.Д. Зассеева, И.В. Кудрявцев, А.В. Полевщиков

Работа посвящена сопоставлению результатов морфологического и цитометрического методов исследования атрофии тимуса беспородных мышей и мышей линии СВА, индуцированной введением 2,5 мг гидрокортизона. Установлено достоверное снижение массы тимуса уже через 24 ч после введения гидрокортизона. До точки 96 ч восстановления массы тимуса не происходит. К точке 48 ч происходит практически полное опустошение коркового вещества тимуса. Использование проточной цитометрии показало, что наиболее подверженными действию гидрокортизона являются double positive (DP-) лимфоциты, уровень апоптоза которых через 24 ч составляет около 67 % DP-клеток. Параллельно, на фоне апоптоза в кортексе наблюдается экстратимическая миграция клеток через лимфатические сосуды. Аналогичный процесс отмечен после иммунизации мышей эритроцитами человека. Обсуждаются возможные механизмы и биологическое значение экстратимической миграции клеток при стрессе. (Цитокины и воспаление. 2014. Т. 13. № 4. С. 29–33 .)

Ключевые слова: стресс, гидрокортизон, атрофия тимуса, апоптоз, экстратимическая миграция.

Согласно классическим представлениям, тимус представляет собой центральный орган иммунной системы позвоночных, в котором происходит дифференцировка и созревание тимоцитов, в результате чего формируется репертуар зрелых аутотолерантных Т-клеток. Важным, но не до конца изученным аспектом иммунобиологии тимуса является высокая чувствительность органа к воздействию различных стрессорных факторов, действие которых приводит к развитию стресс-индуцированной атрофии органа, сопровождающейся снижением массы и объема органа, уменьшением количества клеток, митотических структур, встречающихся в норме, увеличением числа апоптотических клеток и макрофагов [4, 14, 15]. Кроме того, в ходе атрофии в тимусе повышается количество нейтрофилов, тучных клеток, плазматических клеток, а также наблюдается инфильтрация периваскулярного пространства лимфоцитами [12].

Г. Селье первым показал, что стресс-индуцированная атрофия тимуса опосредована действием глюкокортикоидных гормонов (ГК) [15]. Популяция незрелых тимоцитов (double positive (DP-), CD4+CD8+), доля которых составляет 80–90 % от общего количества тимоцитов, особенно чувствительна к повышенной концентрации ГК в крови. По данным литературы, до 90 % незрелых тимоцитов, подавляющую часть которых составляют DP-, погибает путем апоптоза в течение 48–72 ч после введения ГК [8]. Для изучения феномена существуют различные модели индукции атрофии тимуса, включая использование гормонов, ЛПС, облучение, иммобилизацию и некоторые другие. Любой инфекционный процесс также сопровождается атрофией тимуса. Несмотря на длительную историю изучения феномена атрофии тимуса, многие аспекты остаются не до конца изученными. Поэтому цельюработы явилось изучение процесса гидрокортизон-индуцированной атрофии тимуса в сопоставлении результатов гистологического исследования и проточной цитометрии.

Материалы и методы

Объектом исследования были нелинейные белые мыши-самцы массой 20–22 г, а также мыши линии CBA, приблизительный возраст которых составил 6–8 недель. Животных содержали в условиях вивария ФГБНУ «НИИ экспериментальной медицины» при комнатной температуре и нормальной освещенности на стандартном рационе без ограничения доступа к воде и пище.

В качестве модели атрофии тимуса выбрали введение гидрокортизона. Опытным животным перитонеально вводили гидрокортизон («Гедеон Рихтер», Венгрия) в дозе 2,5 мг на мышь в объеме 0,1 мл, а контрольной группе — равный объем 0,14 M раствора NaCl, забуференного фосфатами (ЗФР). Животных умерщвляли через 12, 24, 48, 72, 96 ч с момента введения препаратов методом цервикальной дислокации и сразу же извлекали тимус, одну тимическую долю которого использовали для гистологического анализа, а вторую — для исследования апоптоза с помощью проточной цитометрии.

В части экспериментов через 48 ч после введения гидрокортизона мышам перитонеально вводили 10 % суспензию эритроцитов человека на ЗФР в объеме 0,5 мл на животное. В этом случае животных выводили из эксперимента через 24, 48, 72 и 96 ч после иммунизации.

В ходе всех гистологических исследований фиксацию, пробоподготовку и микроскопирование проводили согласно описанной ранее методике [1]. Срезы окрашивали гемотоксилином–эозином.

Уровень апоптоза в тимусе определяли с помощью набора реагентов FAM FLICA® Poly Caspase Assay Kit («Immunochemistry», США) с использованием проточного цитофлуориметра Navios™ (Beckman Coulter, США) в соответствии с протоколом изготовителя. Для выявления основных популяций тимоцитов за 15 минут до завершения инкубации вносили антитела против антигенов CD4, CD8, CD45, конъюгированных с флуорохромами PE/Cy5, PE/Cy7, APC/Cy7, соответственно («BioLegend», США). Окраску антителами производили в соответствии с инструкцией. Математическую обработку цитофлуориметрических данных проводили при помощи программ «Navios Software v.1.1» и «Kaluza™ v.1.2» («Beckman Coulter», США).

В работе использовали вычисление средних арифметических и ошибок средних. Для каждой выборки оценивали соответствие распределения нормальному. Сравнение выборок производили с помощью параметрического Z-критерия. Во всех экспериментах различие между контролем и опытом считали статистически достоверным при p<0,05.

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!


Начата подписка на 2018 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление