Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2015, № 1

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 1'2015

Экспрессия мембраносвязанных рецепторов к TNFα на моноцитах при атопическом дерматите и ревматоидном артрите

А.А. Альшевская, Ю.А. Лопатникова, Н.С. Шкаруба, О.А. Чумасова, А.Э. Сизиков, О.Л. Круглеева, В.М. Непомнящих, Ф.Ф. Васильев, С.В. Сенников

Фактор некроза опухоли альфа (TNFα) играет важную роль при ревматоидном артрите (РА) и атопическом дерматите (АД). Моноциты активно участвуют в воспалительных процессах при данных нозологиях, и эффекты TNFα на них в значительной мере зависят от количества экспрессируемых специфических рецепторов. Цель работы: оценка экспрессии мембраносвязанных рецепторов к TNFα 1-го и 2-го типов на интактных и активированных моноцитах по проценту позитивных клеток и плотности экспрессии рецепторов на клетках при различных иммунопатологиях. Материалы и методы.Объектом исследования являлись мононуклеарные клетки, выделенные из цельной периферической крови больных ревматоидным артритом и больных АД и культивированные в течение 24 ч в присутствии и отсутствие липополисахарида (ЛПС). Анализ фенотипических характеристик проводили методом проточной цитометрии. Для определения абсолютного количества рецепторов TNFα 1-го и 2-го типов использовали калибровочные частицы BD Quantibrite™ PE Beads. Результаты. Плотность экспрессии рецепторов на поверхности моноцитов у больных как АД, так и РА выше по сравнению со здоровыми донорами и является показателем, отражающим реакцию клеток при активации в зависимости от состояния здоровья и стадии заболевания. Заключение. При воспалительных заболеваниях различной этиологии формируются изменения в системе мембраносвязанных рецепторов к TNFα на поверхности клеток, реализуемые через изменения не только процента позитивных клеток, но и плотности экспрессии рецепторов, что отражает различные варианты регуляции биологических свойств цитокина таргетными клетками. (Цитокины и воспаление. 2015. Т. 14. № 1. С. 18–23.)

Ключевые слова: фактор некроза опухоли альфа, мембраносвязанные рецепторы, плотность экспрессии рецепторов, ревматоидный артрит, атопический дерматит.

Среди факторов, определяющих развитие и протекание воспалительных процессов у больных с различными нозологиями, особое место занимает система провоспалительных цитокинов. Фактор некроза опухоли (TNFα) — плейотропный цитокин, играющий важную роль в процессах воспаления и формирования защитных реакций организма, регуляции апоптоза и некроза клеток, стимуляции фагоцитарной и цитотоксической активности клеток [12, 13]. Благодаря этим свойствам, он является одним из ключевых регуляторов, определяющих равновесие между тем, будет ли воспаление проходить на местном уровне или станет системным, и активно участвует в развитии и протекании заболеваний с различным иммунонопатогенезом. Ревматоидный артрит (РА) характеризуется хроническим системным аутоиммунным воспалением соединительной ткани и сопровождается преимущественным поражением периферических суставов с развитием в них эрозивно-деструктивных изменений и анкилозирования, в то время как для атопического дерматита (АД) характерным является хроническое аллергическое воспаление с преимущественным поражением кожи с инфильтрацией дермы эозинофилами и тучными клетками [7, 9]. Для каждого из этих заболеваний показана высокая вовлеченность TNFα на всех стадиях патологического процесса [1, 5, 14, 15], что обусловливает в ряде случаев при терапии этих патологий использование препаратов-ингибиторов данного цитокина, однако система регуляции биологических эффектов TNFα при РА и АД до сих пор остается во многом неясной.

Реализация биологических свойств TNFα возможна только после связывания со специфическими рецепторами (TNFR1 и TNFR2) [4, 8]. Клеточные эффекты, обеспечиваемые различными вариантами взаимодействия рецепторов и цитокина, приводят к реализации двух основных групп биологических функций медиатора TNFα: к активации клеточной гибели (проапоптотические пути) или активации «защитных» пролиферативных и воспалительных эффектов. Исследования последних лет показывают, что уровень, интенсивность и вариабельность оказываемых цитокинами эффектов будет зависеть не только от стандартно определяемого процента клеток, экспрессирующих данные рецепторы, но и от плотности экспрессии рецепторов на клетках целевых субпопуляций [2, 6, 11]. Кроме того, для оценки способности иммунокомпетентных клеток реагировать в условиях смоделированной ситуации активации провоспалительных реакций важно оценивать и изменения в показателях экспрессии рецепторов в ответ на действие активаторов.

Таким образом, целью нашей работы стала оценка экспрессии мембраносвязанных рецепторов к TNFα 1-го и 2-го типов на интактных и активированных моноцитах по проценту позитивных клеток и плотности экспрессии рецепторов на клетках при хронических воспалительных заболеваниях с разным иммунопатогенезом.

Материалы и методы

Объектом исследования являлись мононуклеарные клетки (МНК), выделенные из цельной периферической крови больных РА и больных АД, проходивших лечение в ревматологическом и аллергологическом отделениях Клиники иммунопатологии НИИФКИ, соответственно. Кровь забирали дважды: при поступлении в состоянии обострения заболевания и перед выпиской в случае эффективного ответа на терапию и клинического улучшения состояния. Для сравнения использовали данные по контрольной группе из 150 условно здоровых доноров (ОГУЗ «Новосибирский центр крови»), полученные ранее в нашей лаборатории [10]. Исследование проведено с добровольного информированного согласия всех больных и условно-здоровых доноров, одобрено локальным этическим комитетом НИИФКИ СО РАМН (протокол № 52 от 23.06.2010 г.).

МНК выделяли стандартно из венозной крови путем центрифугирования в градиенте плотности (ρ=1,077 г/л) фиколла–урографина («Pharmacia Fine Chemicals», Швеция) [3]. МНК собирали с интерфазы и отмывали в среде RPMI-1640 («Биолот», Россия) дважды; для последующей оценки клетки культивировали в конечной концентрации 5 млн. клеток/мл в среде RPMI-1640 («Биолот», Россия) с добавлением 10 % эмбриональной телячьей сыворотки («Hyclone»), гентамицина 80 мкг/мл («Синтез»), 2 мМ L-глутамина (ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор»), Hepes («Sigma»), 5×10-5 М меркаптоэтанола («Sigma») в 96-луночном планшете («TPP», Швейцария) в течение 24 часов в инкубаторе во влажной атмосфере при температуре 37 ºС и концентрации СО2 5 % в отсутствии и присутствии LPS (штамм E. coli O55:B5) (в конечной концентрации 200 нг/мл).

Оценку фенотипических характеристик проводили методом проточной цитометрии (цитофлуориметр «FACSAria» («Becton Dickinson», США)) с использованием антител FITC-меченных anti-CD14 (клон 61D3) («eBioscience», США), anti-hTNFRI-PЕ и anti-hTNFRII-PЕ («R&D Systems», США). Для определения абсолютного количества рецепторов TNFα 1-го и 2-го типов использовали калибровочные частицы «BD Quantibrite™ PE Beads».

Статистическую обработку данных производили с использованием программного обеспечения «Statistica 7.0» («StatSoft», США). Данные представлены в виде медианы и межквартильного интервала, сравнение независимых выборок с определением достоверности отличий проводили с использованием критерия Манна — Уитни и непараметрического дисперсионного рангового критерия Краскелла — Уоллиса с множественным сравнением медиан. Достоверность стимуляции в спонтанных и стимулированных культурах и изменений в зависимых выборках устанавливали с помощью критерия Вилкоксона (отличия считали достоверными при p<0,05). Корреляции между исследуемыми параметрами устанавливали с использованием коэффициента корреляции Пирсона (при p<0,05).

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление