Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер 2 номер
3 номер 4 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2015, № 1

Подписаться на 2018 год

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 1'2015

Морфологические особенности макрофагов и их цитокинового профиля в регенерации скелетной мышечной ткани при пластике аллогенным губчатым биоматериалом

А.И. Лебедева, С.А. Муслимов, Е.М. Гареев, Д.А. Щербаков

Выявлено, что при регенерации скелетной мышцы с использованием аллогенного губчатого биоматериала происходит усиленная миграция CD68+-макрофагов. Число провоспалительных макрофагов (IL-1+, TNFα+) значительно превышает таковое противовоспалительных (TGFβ1+), вследствие чего происходит восстановление дефекта мышечным регенератом. Гистологическими, иммуногистохимическими и электронно-микроскопическими методами исследования показано, что в группе животных без использования биоматериала в процессе заживления дефекта наблюдается дефицит CD68+-клеток и признаки их функциональной незрелости. Количество TGFβ1+-макрофагов значительно превосходит долю макрофагов с провоспалительной направленностью, в результате чего происходит образование рубца с дальнейшим перерождением в жировую ткань. (Цитокины и воспаление. 2015. Т. 14. № 1. С. 27–33.)

Ключевые слова: скелетная мышца, цитокины, макрофаг, аллогенный биоматериал.

Известно, что при травме скелетных мышц развивается воспаление, пролиферативная фаза которого в большинстве случаев заканчивается формированием грубоволокнистого рубца [1]. Одним из способов предупреждения фиброза и стимуляции репаративной регенерации при травмах является использование биоматериалов различного происхождения. Биоматериалы «Аллоплант» изготавливаются из аллогенной кадаверной волокнистой соединительной ткани. Показано, что они после имплантации постепенно резорбируются, а продукты распада (коллаген, протеогликаны) являются хорошей средой для пролиферации и дифференциации клеток различных линий [2]. Весомую роль в резорбции биоматериала и оптимизации межклеточных взаимодействий выполняют клетки системы мононуклеарных фагоцитов. Успех регенерации мышечной ткани зависит от фенотипа макрофагов и их секреторной активности, которая носит дуалистический характер [11, 13]. Целью исследования явилось определение роли макрофагов и их цитокинового спектра при регенерации скелетной мышечной ткани при имплантации аллогенного губчатого биоматериала (АГБ).

Материалы и методы

Для исследования использовали половозрелых аутбредных крыс линии Wistar обоего пола массой от 0,18 до 0,2 кг. Животные были получены из питомника лабораторных животных Рапполово РАМН. Работу проводили с соблюдением «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных» (приказ Минвуза от 13 ноября 1984 г. №724). В контрольной серии (n=36) производили выделение икроножной мышцы и пяточного сухожилия, а также малоберцового нерва, который не повреждали. В икроножной мышце моделировали дефект длиной 3–4 мм, который ушивали викрилом. В опытной серии (n=36) в аналогичный дефект укладывали АГБ соответствующих размеров и фиксировали викрилом. Все биоматериалы были обработаны по оригинальной технологии «Аллоплант», разработанной в ФГБУ «Всероссийский центр глазной и пластической хирургии МЗ РФ» (Патент РФ на изобретение №2189257, ТУ 9398-001-04537642-2011). Животных выводили из опыта путем инсуфляции летальной дозы паров фторотана. Забор аутопсийного материала проводили через 3, 7, 14, 30, 60 и 90 сут. после эксперимента. Кусочки ткани фиксировали в 10 %-ном растворе нейтрального формалина, обезвоживали в серии спиртов возрастающей концентрации и заливали в парафин по общепринятой методике. Гистологические срезы готовили на микротоме «LEICA RM2145» (Германия), которые окрашивали гематоксилином и эозином, по Ван Гизону, по Маллори. Для иммуногистохимических исследований парафиновые срезы толщиной 4 мкм окрашивали с помощью иммуногистостейнера «Leica Microsystems Bond™» (Германия). В качестве первичных антител применяли антитела к: CD68, TGFβ1, TNFα, IL-1α («Santa Cruz Biotechnology», США) в разведении 1:300. Для демаскировки использовали непрямую стрептавидин-биотиновую систему детекции «Leica BOND» («Novocastra™», Германия). Оценку специфичности реакции проводили при окрашивании срезов без первичных антител. Подсчет клеток производили в 20 полях зрения каждого образца (n=6) при увеличении ×400. Исследование и визуализацию препаратов проводили с использованием микроскопа «Leica DMD108» (Германия) со специализированным программным обеспечением управления настройками и захвата изображения. Для электронно-микроскопического исследования кусочки тканей фиксировали в 2,5 %-ном растворе глютаральдегида, приготовленного на какодилатном буфере (рН 7,2–7,4) с дофиксацией в 1 %-ном растворе OsO4 на том же буфере. Материал обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации и заливали в эпон-812 по общепринятой методике. Предварительно готовили полутонкие срезы толщиной 1 мкм, и окрашивали их толуидиновым синим на 2,5 %-ном растворе безводной соды. На данных срезах выбирали участки для электронно-микроскопического исследования. Полутонкие и ультратонкие срезы готовили на ультратоме «ЕМ UС7» («Leica», Германия). Ультратонкие срезы контрастировали 2 %-ным водным раствором уранилацетата, цитратом свинца по Рейнольдсу и изучали в трансмиссионном микроскопе «JEM-1011» («Jeol», Япония) при ускоряющем напряжении 80 kV. Для обработки числовых данных использовали параметрический дисперсионный анализ по Р. Фишеру при помощи критерия Fd и непараметрический (ранговый) дисперсионный анализ по Краскелу — Уоллесу с использованием для сравнения отдельных выборок рангового критерия Манна — Уитни [5].

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!


Начата подписка на 2018 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление