Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2015, № 1

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 1'2015

Полиморфные варианты генов цитокинов (IL1B, IL1RN, TNFA и IL6) у курящих мужчин с раком легкого

Л.А. Гордеева, С.А. Мун, Е.Н. Воронина, А.Д. Магатина, В.А. Титов, Васильченко И.Л., Н.Е. Вержбицкая, С.Е. Рогожина, И.А. Вафин, М.Л. Филипенко

Изучали ассоциации цитокиновых генов IL1B (rs1143634, rs16944), IL1RN (VNTR, интрон 2), TNFA (rs1800629)и IL6 (rs1800795) с разными гистологическими формами рака легкого (РЛ) у курящих мужчин. Обнаружено, что курение является неотъемлемым фактором риска развития всех гистологических форм РЛ у мужчин. Полиморфные локусы генов TNFA (rs1800629)и IL6 (rs1800795) ассоциированы с риском развития мелкоклеточного РЛ у курильщиков. Связь полиморфизмов генов IL1B (rs1143634, rs16944) и IL1RN (VNTR, интрон 2) с РЛ у курящих мужчин не выявлена. (Цитокины и воспаление. 2015. Т. 14. № 1. С. 50–56.)

Ключевые слова: рак легкого, курение, цитокины, генетический полиморфизм, ассоциация.

Курение является одним из ведущих внешних факторов развития рака легкого (РЛ) у человека. Известно, что иммунный ответ на опухолевые антигены контролируется разными цитокинами. Медиаторы и продукты воспаления могут способствовать инициации канцерогенеза, стимулировать опухолевую прогрессию, влиять на микроокружение опухоли, а также изменять ответ опухоли на терапевтические вещества и гормоны [4]. Кроме того, при РЛ выявлены характерные особенности иммунных реакций на химические канцерогены окружающей среды и эндогенные стероиды, принимающие участие в процессах инициации и промоции канцерогенеза. Предполагается, что образование антител к этим низкомолекулярным соединениям также контролируется цитокинами [8].

В настоящее время с помощью современных молекулярно-генетических методов выявлены полиморфные варианты генов многих цитокинов. Установлено влияние отдельных аллельных вариантов на скорость транскрипции, стабильность или качество мРНК, а также активность белковых продуктов их экспрессии [3, 7]. Это послужило основанием для изучения влияния полиморфных вариантов генов цитокинов на развитие РЛ у курящих мужчин.

Цель исследования — изучение ассоциаций полиморфных вариантов генов IL1B (rs1143634, rs16944), IL1RN (VNTR, интрон 2), TNFA (rs1800629)и IL6 (rs1800795) с разными гистологическими формами РЛ у мужчин.

Материалы и методы

Выборки. В исследование были включены 514 мужчин в возрасте старше 50 лет — жители Кемеровской области русской этнической группы.

Исследуемую группу (больные РЛ) составили 320 мужчин с диагнозом РЛ, поступившие на лечение в Кемеровский областной клинический онкологический диспансер за период 2010–2013 гг. Диагноз первичный РЛ в каждом случае был подтвержден морфологически, рентгенологически и эндоскопически. Средний возраст мужчин в группе составил 57,5±3,54 (SD) года. Распределение больных по морфологическим формам РЛ с учетом возраста и курения представлено в табл. 1. Удельный вес курящих в общей группе составил 94,7 %, средний стаж курения был 37,1±8,5 года.

В группу сравнения (контроль) были включены условно здоровые мужчины (194 человека), не болеющие РЛ, большая часть которых (54,6 %) была донорами Кемеровского областного центра крови. Средний возраст мужчин в этой группе составил 56,7±6,24 (SD) года. Удельный вес курящих составил 60,3 %, средний стаж курения был 27,2±12,5 года (см. табл. 1).

Работу проводили с соблюдением принципов добровольности и конфиденциальности в соответствии с требованиями 9 Федерального закона от 27.07.06 г. «О персональных данных» №152-53. Все обследуемые лица дали письменное информированное согласие на участие в исследовании.

Генотипирование. Выделение ДНК из лимфоцитов периферической крови проводили с помощью метода фенол-хлороформной экстракции с последующим осаждением этанолом, образцы ДНК хранили при -20 °C.

В работе исследовали содержащие однонуклеотидные замены (SNP) полиморфные варианты генов: IL1B +3953C→T (rs1143634), IL1B -511 C→T (rs16944), TNFA-308 G→A (rs1800629) и IL6 -174 G→C (rs1800795), а также минисателлитный маркер во 2 интроне гена IL1RN, характеризующийся различным числом тандемных повторов (VNTR). Тест-системы для молекулярно-генетического анализа данных полиморфных вариантов были разработаны в Институте химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН (г. Новосибирск).

Генотипирование полиморфных локусов TNFA (rs1800629) и IL1B (rs16944) проводили с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени (Real Time) с использованием конкурирующих TaqMan-зондов, комплементарных полиморфным участкам ДНК, с помощью RT-амплификатора CFX-96 («Bio-Rad Laboratories», США). Каждый образец амплифицировали с использованием пары специфических праймеров и двух зондов (табл. 2), несущих «гаситель» на 3'-конце и флуоресцентных красителей (FAM и R6G) на 5'-конце. Результаты интерпретировали исходя из анализа графиков накопления флуоресценции.

Типирование полиморфных вариантов генов IL1B (rs1143634) и IL6 (rs1800795) проводили с помощью сайт-специфической рестрикции ферментом TaqI (ООО «СибЭнзим», г. Новосибирск) продуктов ПЦР с последующей детекцией в электрофорезе. Полиморфный вариант гена IL1RN (VNTR интрона 2) определяли с помощью электрофоретического разделения продуктов амплификации. VNTR аллели в гене IL1RN, обозначали следующим образом: аллель IL1RN*1 содержал четыре тандемных повтора по 86 н. п.; аллель IL1RN*2два тандемных повтора; аллель IL1RN*3 — пять тандемных повтора; аллель IL1RN*4 — три тандемных повтора. Детальное описание методики генотипирования полиморфных вариантов приведено в работе [2].

Статистическая обработка данных. Соответствие частот генотиповполиморфных вариантов исследуемых генов равновесию Харди — Вайнберга проверяли по критерию χ2. Вычисление проводили с помощью программы «DeFinetti» на сайте Института генетики человека (Мюнхен, Германия, http://ihg.gsf.de/cgi-bin/hw/hwa1.pl). В этом случае и при использовании других критериев нулевую гипотезу отвергали при p≤0,05.

Методом «случай–контроль» проводили попарное сравнение частот курящих и некурящих мужчин во всех группах, а также частот аллелей и генотипов исследуемых цитокинов с помощью двустороннего точного теста Фишера и критерия χ2 (программа MedCalc version 9.01.1, http://www.medcalc.be). Результаты обсуждали при наличии тенденции отличий между выборками при 0,05≤p≤0,1.

Силу ассоциации анализируемых признаков определяли с помощью величины отношения шансов (OR (Odds Ration)): OR=(a×d)/(b×c), где a — частота аллеля/генотипа в выборке мужчин с РЛ; b — частота аллеля/генотипа в контрольной выборке; c — сумма частот остальных аллелей и генотипов в выборке мужчин с РЛ; d — сумма частот остальных аллелей и генотипов в контроле. Для OR рассчитывали доверительный интервал (CI) при 95 % уровне значимости. Коэффициент OR высчитывали только для статистически значимых экспериментальных результатов.

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление