Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер 2 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2015, № 3

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 3'2015

Исследование острого и хронического воспаления при ишемии мозга на модели изолированных нейтрофилов

Э.Ю. Соловьева, О.А. Баранова, А.В. Чеканов, О.М. Панасенко, Д.Т. Чипова, Л.Б. Тлапшокова, И.В. Мячин, А.Н. Карнеев, А.И. Федин

Исследование посвящено изучению развития воспалительной реакции у больных с ОНМК (острым нарушением мозгового кровообращения, инсультом) и ХИМ (хронической ишемией мозга) на примере изолированных нейтрофилов и фермента миелопероксидазы (МПО). При помощи методов хемилюминесценции нейтрофилов и иммуноферментного анализа показано, что уровень клеточной активности нейтрофилов прямо коррелирует с клиническим исходом в госпитальном периоде у больных ОНМК. Также продемонстрирован высокий уровень хронического воспаления у больных с ХИМ. Определение количества МПО в плазме крови может служить важным прогностическим фактором у больных инсультом. (Цитокины и воспаление. 2015. Т. 14. № 3. С. 60–64.)

Ключевые слова: ишемия мозга, воспаление, нейтрофилы, цитокины, миелопероксидаза.

Под широким термином «инсульт» подразумевают состояния, вызванные окклюзией кровеносного сосуда или кровоизлиянием из сосуда, снабжающего мозг кровью [8]. С возрастанием продолжительности жизни число пациентов с инсультом продолжает увеличиваться, создавая существенную социально-экономическую проблему, так как 80 % выживших пациентов после инсульта до конца жизни имеют ограниченные возможности. Более чем в 80 % случаев инсульт является ишемическим (ИИ); эти случаи характеризуются окклюзией кровеносного сосуда из-за тромба или эмболии [4].

На сегодняшний день существует множество публикаций, где подробно рассматривается сложный ишемический каскад после инсульта [9]. В краткой и сильно упрощенной форме можно выделить три фазы в ходе прогрессирования мозгового инфаркта. Острая фаза начинается в период времени от нескольких минут до нескольких часов после начала инсульта, когда сокращение мозгового кровотока нарушает ионный гомеостаз. Это ведет к повышению внутриклеточных концентраций кальция и стимуляции выделения глутамата, вызывая эксайтотоксичность и распространение депрессии по области ишемии [3, 5]. Под действием осмотического градиента вода переходит во внутриклеточное пространство, и клетки набухают. Возникающий вазогенный отек может оказывать отрицательное влияние на реперфузию и вызывает повышение внутричерепного давления, сдавление сосудов и вклинение [3]. Возникновение свободных радикалов (СР), особенно при наличии реперфузии, может вести к повреждению мембран, митохондрий и ДНК, а как следствие — к нарушению фолдинга белков и дисфункции ферментов. В ходе второй, подострой фазы (от нескольких часов до нескольких дней после ишемии) развивается апоптотический и нейровоспалительный ответ как следствие стимулирующего влияния острой фазы [3, 7]. Высокие внутриклеточные концентрации кальция, возникшие в острую фазу, ведут к избыточной активации нескольких протеолитических ферментных систем. Наконец, в ходе хронической фазы, которая может продолжаться до нескольких месяцев после ИИ как такового, окончательная степень поражения будет определяться процессами восстановления и регенерации [5]. Хотя это покажется странным, реперфузия после окклюзии может обострить поражение нейронов ввиду повышенной продукции СР и более сильного воспалительного ответа [10]. С другой стороны, быстрое восстановление кровоснабжения жизненно важно, так как оно может спасти нейроны пенумбры от необратимого поражения, поскольку энергетический метаболизм и ионные градиенты на клеточных мембранах вернутся к нормальным значениям [4]. Регуляция более поздних событий, таких как воспаление, могла бы привести к успешной нейропротективной терапии [3]. Однако в клинических испытаниях противовоспалительные препараты пока не показали ожидаемых результатов [6, 10]. Предположительно, такие расхождения указывают на то, что нейровоспалительный ответ после инсульта является не только пагубным, и что без этого ответа повреждение было бы еще больше. Воспаление приводит к гибели клеток в острый период, но на более поздней стадии оно может помочь привести организм в равновесие [2]. Или, напротив, хроническое воспаление также может вызвать повреждение тканей. Поэтому важно понять негативные и нейропротективные воздействия всех компонентов нейровоспалительного ответа в различные моменты времени после ИИ.

Возвращаясь к вопросу о том, что использование традиционных факторов риска позволяет оценить вероятность сердечно-сосудистых катастроф лишь в половине случаев, а дальнейшее исследование факторов воспаления и эндотелиальной дисфункции (в частности, уровень NO в плазме крови) при ишемии мозга может быть использовано в качестве дополнительных маркеров оценки как угрозы развития инсульта, прогрессирования хронической цереброваскулярной патологии, так и эффективности лечебных стратегий, нами была поставлена задача изучить уровень лейкоцитарной активности и вклад миелопероксидазы (МПО) в острейшей стадии инсульта.

Материалы и методы

В исследование были включены 85 человек: 75 больных с нарушением мозгового кровообращения и группа из 10 условно здоровых лиц. Группа больных включала 55 пациентов с острым нарушением мозгового кровообращения (ОНМК) и 20 пациентов с хронической ишемией мозга (ХИМ). Каждая группа больных включала 10 пациентов с сахарным диабетом 2-го типа. Возраст больных составлял от 49 до 78 лет (средний — 61,2±8,8 лет). Давность инсульта не превышала 48 часов.

Количественное определение МПО и исследования провоспалительных цитокинов (IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, TNFα) с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) проводили в соответствии с протоколом по стандартной методике, с использованием набора реагентов «Bender MedSystems» (Австрия). Кровь забирали утром натощак, центрифугировали при 1200 g, полученную плазму разливали в пластиковые пробирки объемом 1,5 мл и замораживали при -20 °С. В качестве антикоагулянта использовали гепарин.

Для исследования фагоцитарной активности исходных нейтрофилов использовали метод хемилюминесценции (ХЛ), вспышку ХЛ регистрировали при комнатной температуре на хемилюминометре «SmartLum 5773» («ИНТЕРОПТИКА-С», Россия). Стандартный образец содержал: среду Хенкса (0,42 мМ Na2HPO4, 20 мМ KH2PO4, 137 мМ NaCl, 2,7 мМ KCl, 5 мМ D-глюкозы), буфер активации (1 мМ Са2+ и 0,5 мМ Mg2+, рН 7,4), нейтрофилы (150 тыс. клеток), и 10 мкМ люминола. Результат представляли в виде светосуммы за первые 25 минут, начиная с момента добавления буфера активации и/или в присутствии или в отсутствие активатора нейтрофилов — 5 мкг/мл форболмиристатацетата (ФМА).

Статистическую обработку результатов проводили с использованием пакета прикладных программ «Statistica 8.0.» («StatSoft», США). В качестве критерия достоверности использовали статистический критерий Манна — Уитни для двух несвязанных групп и Краскела — Уоллиса ANOVA для трех и более несвязанных групп. Достоверными принимали значения при р<0,05.

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление