Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2016 год
1 номер 2 номер
3 номер 4 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2016, № 3

Подписаться на 2018 год

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Обзоры

Номер 3'2016

Опыт регистрации биоподобных препаратов моноклональных антител. Сообщение 2. Доклинические исследования

Ж.И. Авдеева, А.А. Солдатов, Н.А. Алпатова, Ю.В. Олефир, В.А. Меркулов, В.П. Бондарев, В.Д. Мосягин

В обзоре приведена информация об опыте регистрации первых биоаналогичных (биоподобных) лекарственных препаратов («biosimilars») на основе моноклональных антител. В июне 2013 г. Комитет по лекарственным препаратам для медицинского применения (CHMP) Европейского медицинского агентства по лекарственным средствам (ЕМА) рекомендовал для лицензирования препараты Remsima и Inflectra как биоподобные препараты, содержащие инфликсимаб. Инфликсимаб — химерные моноклональные антитела, которые способны с высокой степенью аффинности связывать растворимые и трансмембранные формы фактора некроза опухолей альфа. Препарат на основе таких антител был впервые лицензирован в ЕС в августе 1999 года под наименованием Remicade. Препараты Remsima и Inflectra являются...являются подобными оригинальному препарату Remicade®/Ремикейд®. Приведены сведения о результатах, полученных при проведении сравнительных исследований по изучению фармакологических свойств, фармакокинетических параметров, а также результатов токсикологических исследований. Представлены результаты анализа данных по оценке физико-химических характеристик, биологической активности и доклинических исследованиях препаратов, свидетельствующих о высокой степени подобия между разработанным и оригинальным (референтным) препаратами. Этап доклинического сравнительного исследования предшествует последующим сравнительным клиническим исследованиям. (Цитокины и воспаление. 2016. Т. 15. № 3–4. С. 221–229.)

Ключевые слова: моноклональные антитела, «biosimilars», биоаналогичные (биоподобные) препараты, доклинические исследования, фармакологические свойства, фармакокинетические исследования, токсикологические исследования.

Биотехнологические лекарственные препараты успешно применяются в клинической практике. С целью выпуска более широкого спектра высокоэффективных лекарственных препаратов и облегчения вывода препарата на фармацевтический рынок крупные производители после окончания срока действия патентной защиты на оригинальные препараты разрабатывают биологические препараты, характеризующиеся высокой степенью подобия/сходства с оригинальным препаратом.

Первым препаратом моноклональных антител (МкАТ), разработанным для клинического использования, является мурономаб (мышиные МкАТ — Orthoclone-OKT3), который утвержден в 1986 г. и предназначен для профилактики отторжения трансплантата почки. В 90-е гг. ХХ в. разработан ряд препаратов на основе химерных МкАТ, таких как ритуксимаб (для лечения В-клеточной неходжкинской лимфомы), базиликсимаб (для профилактики отторжения трансплантата почки), инфликсимаб (для лечения ревматоидного и псориатического артритов, анкилозирующего спондилита, псориаза, болезни Крона). В конце 90-х годов ХХ в. и в 2000-е годы ХХI в. в клиническую практику внедрен ряд препаратов на основе гуманизированных или полностью человеческих МкАТ, таких как паливизумаб (для профилактики инфекции, вызванной респираторным синцитиальным вирусом), трастузумаб (для лечения рака молочной железы), омализумаб (для лечения атопической бронхиальной астмы и аллергического ринита), адалимумаб и голимумаб (для лечения ревматоидного и псориатического артритов, анкилозирующего спондилита, болезни Крона), офатумумаб (для лечения хронического лимфолейкоза) и др.

В 2013 г. Комитет по лекарственным препаратам для медицинского применения (CHMP) Европейского медицинского агентства по лекарственным средствам (ЕМА) принял положительное решение с рекомендацией выдать регистрационные удостоверения на два первых биоаналогичных (биоподобных) препарата: инфликсимаб — Remsima/Ремсима (производство «Celltrion Inc.») и Inflectra/Инфлектра (производство «Hospira»), подтверждающие их применение для лечения ревматоидного артрита, болезни Крона, язвенного колита, анкилозирующего спондилита, псориатического артрита, псориаза [2, 3]. Указанные препараты (химерные МкАТ, специфичные к фактору некроза опухолей альфа — TNFα/ФНОα) разработаны как «biosimilars» (биоаналогичные/биоподобные) оригинальному (референтному) препарату Remicade®/Ремикейд® (производство «Johnson & Johnson» и «Merck»). Препарат Remicade® разрешен для клинического применения в странах Европейского Союза (ЕС) с 1999 г.

Инфликсимаб (действующее вещество разработанных биоподобных препаратов МкАТ) изучен как препарат СТ-Р13 (производство «Celltrion Inc.», Республика Корея).

При проведении сравнительных исследований, на этапе оценки качества препаратов, было показано, что все основные физико-химические характеристики, показатели специфической биологической активности препаратов Inflectra® и Remsima® были высоко подобны/сходны аналогичным показателям оригинального (референтного) препарата Remicade® [1–3]. Выявленные при исследовании небольшие различия в уровне фукозилирования инфликсимаба оценены разработчиком препарата и экспертами СНМР как клинически незначимые. Это обусловлено тем, что выявляемая в тестах ex vivo более низкая аффинность связывания СТ-Р13 с Fc-рецепторами и более низкая антителозависимая клеточная цитотоксичность (АЗКЦ/ADCC), обусловленные афукозилированием, не влияли на проявления активности препарата при исследовании на экспериментальных моделях, более соответствующих патофизиологическим процессам, наблюдаемым у пациентов.

На основании анализа проведенных сравнительных исследований по оценке качества препаратов была разработана программа дальнейших доклинических сравнительных исследований по доказательству подобия разработанного препарата СТ-Р13 и оригинального препарата Remicade®.

ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Общие положения

Препараты МкАТ характеризуются сложной структурой, имеют несколько функционально активных доменов в пределах одной молекулы (антиген-связывающий, комплемент-связывающий регионы, константная часть молекулы, взаимодействующая с Fc-рецепторами) в зависимости от изотипа иммуноглобулина. Такие препараты обладают уникальными свойствами за счет специфичности антиген-связывающего региона, проявляют Fc-обусловленные цитотоксические эффекторные функции, а также функции, связанные с Fc-рецепторами, включая FcRn.

Использование различных методических подходов на этапе оценки качества позволяет углубленно охарактеризовать свойства препаратов МкАТ по физико-химическим и функциональным показателям, что дает возможность оценить сопоставимость качества препаратов и определить дальнейшие подходы доказательства подобия препаратов при проведении доклинических исследований.

Доклинические исследования препарата СТ-Р13 проведены в соответствии с положениями руководства Европейского медицинского агентства по лекарственным средствам (ЕМА) по биоподобным (биоаналогичным) биотехнологическим лекарственным препаратам МкАТ (ЕМА/СНМР/BMWP/403543/2010), Руководства по биоподобным (биоаналогичным) биотехнологическим лекарственным препаратам, содержащим в качестве активного вещества белки, полученные с применением методов биотехнологии: доклинические и клинические исследования (ЕМА/СНМР/BMWP/42832/2005) и Руководства ICH-S6 (R1) «Доклиническая оценка безопасности биотехнологических лекарственных препаратов» (ЕМА/СHМP/ICH/731268/1998) [6, 7, 9].

Программа сравнительного доклинического изучения препаратов СТ-Р13 и Remicade® включала фармакодинамические, фармакокинетические и токсикологические исследования. Проведена оценка первичных фармакодинамических свойств с использованием широкого набора тестов in vitro, включая исследования перекрестной реактивности на тканях человека. Токсикологические исследования включали оценку токсикокинетики (ТК) и иммуногенности. Сравнительные исследования токсичности в течение 2-х недель, выполненные на крысах, и иммуногистохимическое изучение перекрестной реактивности на тканях человека были выполнены в соответствии с требованиями GLP.

Фармакологические исследования

Фармакодинамика (исследования в тестахin vitro)

В основе проявлений биологической активности инфликсимаба можно выделить два основных механизма действия. Первый из них включает нейтрализацию специфической биологической активности TNFα путем его связывания с инфликсимабом и ингибирование внутриклеточной сигнализации, обеспечивающей передачу сигналов для активации клеточных функций, в частности пролиферации клеток. Для оценки проявлений активности инфликсимаба, связанной с данным механизмом, используют следующие методы: нейтрализация активностиTNFαвтесте in vitro; ингибиция апоптоза, вызванного TNFα; аффинность связывания TNFα методом поверхностного плазмонного резонанса (ППР/SPR), ИФА, а также на клетках, экспрессирующих соответствующие рецепторы. Вторичный механизм действия включает в себя активацию иммунных реакций, которые могут быть изучены с использованием следующих методов: антителозависимая клеточноопосредованная цитотоксичность (ADCC/АЗКЦ); комплементзависимая цитотоксичность (CDC/КЗЦ); аффинность связывания с семейством Fcg-рецепторов (FcgR) и неонатальным Fc-рецептором (FcRn) методом ППР; аффинность связывания С1q компонента комплемента методом ИФА.

Первичная фармакодинамика (ФД) препаратов изучена в лабораторных сравнительных исследованиях с использованием различных методик, позволяющих оценить аффинность связывания препаратов СТ-Р13 и Remicade® с растворимыми мономерными и тримерными формами TNFα и трансмембранными формами TNFα, TNFb, Fc-рецепторами (FcgRI, FcgRIIa, FcgRIIIa, FcRn) и С1q компонентом комплемента. Проведены сравнительные исследования по оценке нейтрализующей активности TNFα, проявлений КЗЦ и АЗКЦ, нейтрализации апоптотического эффекта, перекрестной реактивности с различными тканями человека.

В качестве препарата сравнения во всех этих исследованиях был использован препарат Remicade®.

Таким образом, в соответствии с требованиями СНМР, изложенными в руководстве ЕМА/СНМР/BMWP/403543/2010, данное тестирование было направлено на оценку связывания с целевым антигеном (антигеном-мишенью), связывания с FcgR рецепторами, FcRn и комплементом, а также оценку Fab-ассоциированных свойств по нейтрализации функциональной активности TNFα и Fc-ассоциированные свойства исследуемых препаратов МкАТ (АЗКЦ, КЗЦ и активация комплемента) [1–3].

В целом, в отношении аффинности связывания с TNFα, равновесные константы диссоциации Кd, установленные в ИФА, и кинетика, установленная методом ППР для растворимых мономерных и тримерных форм TNFα, СТ-Р13 и Remicade®, были сопоставимы, при практически идентичных значениях Кd. Результаты других исследований по оценке аффинности связывания с мономерными и тримерными формами TNFα и трансмембранного TNFα свидетельствуют о сопоставимости анализируемых показателей для лекарственных препаратов СТ-Р13 и Remicade®. Также установлена сопоставимая/сходная аффинность связывания с FcgRI, FcgRIIa и FcRn рецепторами. Выявлено различие в аффинности связывания с FcgRIIIa рецептором между препаратами СТ-Р13 и Remicade®. Проведены дополнительные исследования для установления значимости выявленных различий в связывании инфликсимаба с FcgRIIIa в отношении их влияния на проявления биологической активности препарата. Показано, что результаты исследований в условиях эксперимента, приближенных к физиологическим условиям, свидетельствуют об отсутствии влияния выявленных различий на качество препарата, и не могут оказывать отрицательного воздействия на его эффективность и безопасность.

Исследования по изучению вторичных фармакодинамических свойств, фармакологической безопасности, а также исследования по фармакодинамическому взаимодействию с другими лекарственными средствамине проводили, что соответствует рекомендациям руководства СНМР по биоаналогичным (биоподобным) лекарственным препаратам на основе МкАТ (ЕМА/СНМР/BMWP/403543/2010) [7].

Фармакокинетика

Согласно положениям международных документов по биоподобным препаратам, в том числе препаратам МкАТ, на основании результатов исследований in vitvo принимается решение о необходимости и объеме проведения исследований in vivo [4– 8]. При этом основное внимание должно быть уделено сравнительным исследованиям фармакокинетики (ФК), ФД и оценки безопасности. Целью данных исследований является получение дополнительной информации о подобии разработанного препарата с оригинальным (референтным) препаратом. В каждом конкретном случае учитывается наличие соответствующих моделей, видов животных. Соответствующим является вид животных, у которых имеются растворимые или экспрессированные на клетках тканей антигены, являющиеся мишенями для препарата МкАТ. Проведение исследований на соответствующем виде животных позволяет получить результаты, отражающие эффекты, обусловленные непосредственным взаимодействием действующего вещества препарата с антигеном-мишенью. В случае использования при проведении исследований несоответствующих видов животных результаты оцениваются в плане степени сопоставимости оцениваемых параметров разработанного и оригинального препаратов.

Сравнительные фармакокинетические исследования препаратов СТ-Р13 и Remicade® проведенына крысах. Крысы не являются соответствующим видом животных, поскольку эффекты, обусловленные введением препаратов, не связаны с непосредственным воздействием инфликсимаба на специфические рецепторы. Соответствующим видом животных для исследуемых препаратов инфликсимаба являются человекообразные обезьяны. В связи с этим исследования, проведенные на крысах, позволяют оценить степень сопоставимости фармакокинетических параметров препаратов СТ-Р13 и Remicade®.

Метод для выявления и количественной оценки содержания в образцах сыворотки крови животных СТ-Р13 или Remicade® (ИФА), а также метод определения антител, индуцированных введением препаратов (метод полуколичественного ИФА), были валидированы. Исследования ФК, а также разработка и валидация методов выполнены в соответствии с требованиями GLP.

При изучении абсорбции проведены сравнительные исследования параметров ФК на крысах при однократном внутривенном введении препаратов. Препараты СТ-Р13 и Remicade® вводили 20 крысам-самцам линии Sprague-Dawley в дозах 10 и 50 мг/кг, соответственно, по 5 крыс в группе на дозу. Образцы сыворотки крови отбирали в течение 336 ч после введения препаратов. Определение сопоставимости параметров ФК основывалось на сравнении показателя AUCt.

Установлено, что после однократного внутривенного введения препарата СТ-Р13 медленный темп снижения концентрация инфликсимаба в сыворотке крови животных носил би-экспоненциальный характер. Площадь под кривой «сывороточная концентрация–время» от начала дозирования до момента последней выборки (AUC0-t), концентрация в нулевой точке (С0) и максимальный пик концентрации в сыворотке (Сmах) зависели от дозы, возрастая с ее увеличением от 10 до 50 мг/кг. Профили зависимости величины концентрации инфликсимаба, определяемой в сыворотке крови экспериментальных животных, от сроков после введения препаратов СТ-Р13 или Remicade®, представлены на рис. 1.

Установлено, что после однократного внутривенного введения препаратов СТ-Р13 или Remicade® в дозах 10 или 50 мг/кг профили кривой «сывороточная концентрация – время» для СТ-Р13 и Remicade® подобны.

В табл.1 приведены данные сравнительных фармакокинетических исследований препаратов СТ-Р13 и Remicade®.

Как видно из табл. 1, отношение средних геометрических значений AUC0-tдля CT-P13 и Remicade® составило 96,66 % (90 %-ый ДИ 79,69–117,23) при дозе 10 мг/кг. При дозе 50 мг/кг отношение средних геометрических значений AUC0-t для CT-P13 и Remicade® составило 112,70 % (90%-ный ДИ 87,30–145,49).

Наблюдаемая вариабельность значений связана с небольшим размером выборки (по 5 животных в каждой группе). Следует отметить, что при проведении клинических исследований биоэквивалентности с участием человека не используют такие малые выборки, как в данном экспериментальном исследовании.

Сравнительные фармакокинетические параметры препаратов CT-P13 и Remicade® при однократном внутривенном введении приведены в табл. 2.

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья

Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!


Начата подписка на 2018 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление