Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2018 год
1-4 номера

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2018, №№ 1-4

Подписаться на 2019 год

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 1-4'2018

Изучение циркулирующих T-регуляторных клеток, продуцирующих IL-17 в норме и при раке молочной железы

E.O. Остапчук, Е.А. Кустова, Н.Т. Уразалиева, Ю.В. Перфильева, Н.А. Омарбаева, Ш.Ж. Талаева, Н.Н. Беляев

Т-регуляторные клетки (Treg) играют одну из ключевых ролей в подавлении противоопухолевого иммунного ответа и развитии злокачественных опухолей. Согласно результатам многих исследований, у пациентов со злокачественными новообразованиями, в том числе, у больных раком молочной железы (РМЖ), содержание Treg-клеток увеличено как в периферической крови, так и в опухолевой ткани, что коррелирует со стадией рака и низкой выживаемостью пациентов. Возрастание численности Treg-клеток рассматривается в качестве одной из причин неэффективности иммунной защиты при опухолевом росте. Известно, что Treg-клетки как образованные в тимусе, натуральные, так и индуцированные на периферии, в том числе и IL-17-продуцирующие (Treg-17), обладают значительной супрессорной активностью по отношению к функциям эффекторных клеток. До сих пор роль некоторых субпопуляций Treg-клеток остается не изученной при онкологических заболеваниях. Мы исследовали содержание и спонтанную экспрессию супрессорных молекул Treg-17-клетками периферической крови здоровых женщин и больных РМЖ с помощью проточной цитофлуориметрии. В данной работе показано присутствие Treg-17-клеток в периферической крови здоровых женщин. В периферической крови больных РМЖ обнаружено увеличение доли Treg-17-клеток, экспрессирующих CTLA-4, GITR, CD39 и IL-35, по сравнению со здоровыми женщинами. Расширение пула Treg-17-клеток может вносить вклад в подавление противоопухолевого иммунитета и приводить к прогрессированию заболевания. Полученные данные могут быть использованы в дальнейших исследованиях и разработке новых подходов к ранней диагностике и иммунотерапии РМЖ. (Цитокины и воспаление. 2018. Т. 17. № 1–4. С. 86–90.)

Ключевые слова: IL-17-продуцирующие Т-регуляторные клетки, иммуносупрессия, рак молочной железы.

Ускользание опухоли от иммунного надзора при раке обусловлено механизмами, обеспечивающими иммуносупрессорный фон в опухолевом микроокружении. Негативная роль Т-регуляторных клеток (Treg) в данном процессе считается доказанной. У пациентов со злокачественными новообразованиями, в том числе больных раком молочной железы (РМЖ), содержание CD4+CD25+Foxp3+-лимфоцитов увеличено в периферической крови (ПК) и в опухолевой ткани [9]. Инфильтрация опухоли Treg-клетками и их количество в ПК при РМЖ коррелирует со стадией заболевания и низкой выживаемостью пациентов, а при их элиминации, как было показано в экспериментах на мышах, происходит отторжение или уменьшение размеров опухоли [10].

До сих пор мало изучена причина увеличения Treg-клеток у больных раком. Предполагается, что пул данных клеток состоит как из образованных в тимусе натуральных Treg-клеток (nTreg), так и индуцированных Treg-клеток (iTreg), образовавшихся из конвенциональных CD4+CD25--клеток (Tcon) и/или nTreg-клеток, т. к. известно, что в опухолевом микроокружении и ПК при раке содержатся молекулы, способные индуцировать образование многих субпопуляций iTreg-клеток. Эта гипотеза подтверждается работами, показывающими присутствие nTreg-клеток c определенным набором TCR и наличие CD4+CD25+ Treg-клеток в опухолевом микроокружении у тимэктомированных мышей и после введения мышам анти-CD25 антител [5, 11]. Считается, что iTreg-клетки, усиливая супрессорное действие nTreg-клеток, участвуют в подавлении противоопухолевого иммуннитета [1].

Таким образом, комплексный анализ основных субпопуляций Treg-клеток, циркулирующих в периферической крови, их фенотипа, функциональной активности и причин нарушения их гомеостаза при РМЖ, как наиболее распространенного типа онкологических заболеваний, крайне необходим для раскрытия механизмов супрессии противоопухолевого иммунитета и последующей разработки новых подходов к иммуноориентированной терапии онкологических заболеваний.

Недавно была выявлена субпопуляция iTreg-клеток, продуцирующая IL-17 (Treg-17). Treg-17-клетки могут быть дифференцированы как из Tcon-, так и из nTreg-клеток, и обладают супрессорными свойствами, подавляя активацию и пролиферацию Т-эффекторных клеток. Treg-17-клетки отличаются высокой активностью генов, кодирующих транскрипционные факторы RORγt и FoxР3, а также цитокины IL-17A, IL-17F, IL-21, IL-10. Данные клетки также экспрессируют высокий уровень CD25 и CCR4.

Роль Treg-17-клеток при раке до конца не выяснена. CD4+Foxp3+IL-17+-клетки, подавляющие Т-клеточную активность, были обнаружены в опухолевой ткани при раке толстого кишечника и некоторых других типах рака и колита. Считается, что Treg-17-клетки являются «воспалительными» Treg-клетками, так как они повышали секрецию провоспалительных цитокинов и одновременно подавляли локальный Т-клеточный иммунный ответ при язвенном колите и, тем самым, индуцировали развитие опухоли на фоне хронического воспалительного процесса [8]. Также CD4+FoxР3+IL-17+-клетки вызывали экспрессию маркеров, ассоциированных с опухолевыми клетками при раке толстого кишечника, на мононуклеарных клетках костного мозга и при участии секретируемого ими TGFβ способствовали переходу таких клеток в опухолевые стволовые клетки [15]. Увеличенное количество IL-17-продуцирующих CD4+-клеток было обнаружено у курящих людей, больных аденокарциномой легкого и раком яичников [6, 7]. Кроме этого, сообщалось о содержании Th17-клеток в опухолевой ткани при РМЖ, количество которых не ассоциировало с прогрессированием заболевания и количеством Treg-клеток. Однако данное исследование проводили с применением неполного фенотипического скрининга клеток, Th17 и Treg-клетки определяли по экспрессии только IL-17 или FoxP3, соответственно [14]. Также известно, что активированные форбол 12,13-дибутиратом и иономицином мононуклеары ПК больных с прогрессирующими формами РМЖ содержат больший процент CD4+Foxp3+IL-17+-клеток [12].

Целью данного исследования было изучение содержания циркулирующих Treg-17-клеток и экспрессии ими супрессорных молекул в норме и при РМЖ.

Материалы и методы

В ходе исследования использовали ПК (10 мл), стабилизированную ЭДТА (2 мг/мл), здоровых женщин (средний возраст — 48,5±16,5 лет, n=7) и первичных больных с операбельным РМЖ и отсутствием метастазов (средний возраст — 52,8±10,4 лет, n=15), находящихся на различных стадиях заболевания (I стадия — n=3, II стадия — n=10, III стадия — n=2). Эритроциты ПК подвергали лизису, добавляя FACS Lysing Solution («BD Biosciences», США), и отмывали фосфатно-солевым буферным раствором.

Фенотип и экспрессию супрессорных молекул оценивали методом проточной цитометрии c использованием флуоресцентно-меченных антител к CD39-APC, CTLA4-APC, IL17А-FITC, GITR-APC, CD73-APC, LAP (TGFβ1)-APC («Miltenyi Biotech», США), CD4-APC-Cy7, CD25-PerCP-Cy5.5, FoxP3-PE, («BD Biosciences», США), IL35-APC («R&D Systems», США). Инкубацию клеток с мечеными антителами к поверхностным маркерам проводили согласно инструкциям фирм-производителей, затем клетки пермеабилизовали и отмывали с использованием набора «FOXP3 Staining Buffer Set» («Miltenyi Biotec», США), производили внутриклеточное окрашивание и анализировали с использованием цитофлуориметра «FACSCantoII» с применением программного обеспечения «FACSDiva» («BD Biosciences», США).

Результаты представлены в виде средних арифметических ± стандартное отклонение (M±SD) или медианных значений и квартильного размаха (25 %, 75 % процентиль). Статистическую достоверность различий средних оценивали по t-критерию Стьюдента при уровне значимости р˂0,05.

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!


Начата подписка на 2019 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2019 Цитокины и Воспаление