Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2018 год
1-4 номера

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2018, №№ 1-4

Подписаться на 2019 год

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 1-4'2018

Роль полиморфизма гена IL4 в развитии атопического дерматита у детей

А.П. Бражникова, И.А. Горланов, О.П. Гурина, Е.А. Дементьева, А.Б. Чухловин, П.Г. Назаров

С целью выявления ассоциации полиморфных вариантов гена IL-4 (rs2243250 и rs79071878) с развитием атопического дерматита (АД) у детей, а также оценки роли наследственных факторов в развитии тяжелых клинических форм заболевания, проведена ПЦР точечных полиморфизмов, а также определение IL-4 и IgE с помощью ИФА в двух группах детей (со средне-тяжелым и тяжелым течением заболевания, n=52) и здоровых детей (n=62), проживающих на территории Северо-Западного Федерального Округа РФ. Обнаружено, что аллель *T полиморфного локуса rs2243250 гена IL4, как и *RP2 аллель локуса rs79071878 гена IL4, ассоциированы с развитием АД у детей и являются маркерами тяжелого течения заболевания, а также способствуют повышению концентраций IL-4 и IgE в плазме крови как у больных, так и в контрольной группе. (Цитокины и воспаление. 2018. Т. 17. № 1–4. С. 96–101.)

Ключевые слова: атопический дерматит, аллель, ассоциация, ген IL4, полиморфизм, однонуклеотидный полиморфизм, вариация числа тандемных повторов, маркер предрасположенности.

Атопический дерматит (АД) — это хроническое, наследственно обусловленное, воспалительное заболевание кожи, которое является одной из наиболее актуальных проблем в практическом здравоохранении. АД занимает лидирующие позиции в структуре хронических дерматозов (по данным зарубежных авторов — от 20 до 66 %), ежегодно отмечается рост заболеваемости, особенно в урбанизированных странах [4]. В Российской Федерации распространенность данного заболевания среди всего населения в 2015 г. составила 436,2 на 100 000 населения. Заболеваемость — 209,6 на 100 000 населения, с ежегодным приростом от 2 до 16 % по разным регионам. Структура заболеваемости остается постоянной: бóльшая часть заболеваний с впервые в жизни установленным диагнозом приходится на возрастную категорию детей 0–14 лет (71 % в 2013 г., 65 % в 2015 г.), 1/4 часть заболеваний диагностируется среди взрослого населения 18 лет и старше (~24 %), около 5,5 % заболеваний — среди детей в возрасте 15–17 лет [3]. Раннее начало АД часто приводит к социальной дезадаптации ребенка, а иногда и инвалидизации, поэтому основные усилия исследователей направлены на поиск способов профилактики и предсказания характера течения заболевания, чему активно способствует накопление и развитие знаний в области этиологии и патогенеза.

Под термином «атопия» (греч. atopy — «чужая», «странная», «необычная»), по мнению A.F. Coca и R.A. Cooke (1923) подразумевались некоторые наследственно обусловленные формы гиперчувствительности (астма, сенная лихорадка), наличие ассоциации между которыми и поражениями кожи отмечал еще J.B. van Helmont, впервые описавший в 1607 г. сочетание астмы и зуда кожи. Несколько позднее A.F. Coca (1931) отнес к атопическим заболеваниям непереносимость некоторых видов пищи и медикаментов, а в 1933 г. F. Wise и M.B. Sulzberger дополнили эту группу рядом дерматозов, тогда и появился термин «атопический дерматит» [2, 20]. Длительное время для обозначения различных вариантов поражения кожи при АД использовались такие термины, как: «экзема» (впервые употреблен Aëtius из Amida в 543 г. н. э.), «строфулюс» (описан в 1857 г. Erasmus Wilson), «нейродермит» (концепция нейрогенной теории Brocq и Jacquet, 1891 г.), «почесуха Бенье» (prurigo diathésique de Besnier, 1892 г.), что было обусловлено отсутствием единого мнения о происхождении и клинической морфологии заболевания [5].

Современные представления об этиопатогенезе АД призваны учитывать данные молекулярно-генетических исследований, на основании которых обнаружено более 16 генов-кандидатов «атопии» и их взаимодействие с неблагоприятными факторами внешней среды [9]. Мультифакториальная природа АД определяет сосуществование двух основных теорий развития заболевания (корнеоцентрической и иммуноцентрической), которые отражают наличие у пациентов с АД наследственно обусловленных генетических дефектов кожного барьера и особенностей иммунологического ответа [5, 7].

По данным полногеномных исследований было лоцировано большое количество генов-кандидатов, структурные изменения в которых могут приводить к развитию «атопического» иммунологического ответа. Так, в регионе 5q31-33 находятся гены, кодирующие так называемые «иммунологические белки» (IL-4, IL-5, IL-12, IL-13, GM-CSF), ответственные за появление патологической симптоматики у 80 % пациентов с АД (IgE-зависимый вариант) [8]. Критическую роль в патогенезе играет IL-4, основной цитокин Т-хелперов 2-го типа (Th2). Именно в присутствии IL-4 во время презентации антигена происходит селекция Th-клеток с развитием Th2 ответа, что приводит к переключению В-лимфоцитов на продукцию аллерген-специфических IgE антител [10]. IL-4 ограничивает синтез провоспалительных медиаторов (IL-1β, IL-6, IL-8, IL-12, TNFα) макрофагами и способствует продукции IL-5, IL-13 Th2-лимфоцитами, которые увеличивают выживание эозинофильных лейкоцитов в тканях и высвобождение эозинофильного катионного белка [1, 7]. Подобные изменения регистрируются в острой фазе воспаления и коррелируют с тяжестью течения заболевания [18].

В ряде работ были определены значимые полиморфные варианты гена IL4: однонуклеотидная замена С-590T в регуляторной области (rs2243250) и вариация числа тандемных повторов в интроне 3 (rs79071878), способствующие усилению экспрессии гена и, как следствие, увеличению продукции цитокина [6, 11, 16, 19]. Для полиморфного локуса rs2243250 cвязь с аллергическими заболевания была показана ранее, тогда как для локуса rs79071878 публикации по данной тематике нам не встретились [9].

Целью нашего исследования стала оценка роли обозначенных полиморфных вариантов гена IL4 в развитии АД у детей, а также выявление связи наследственных факторов со степенью тяжести течения заболевания в исследуемой группе и концентрациями иммунологических показателей крови (IL-4 и IgE).

Материалы и методы

Нами были обследованы 52 ребенка от 6 до 17 лет (12,46±0.41; 25 девочек и 27 мальчиков) с АД, поступивших для лечения в кожное отделение на базе кафедры дерматовенерологии СПбГПМУ. Диагноз был установлен на основании анамнеза и клинико-лабораторных данных, а степень тяжести течения оценивали по шкале SCORAD, что позволило разделить пациентов на две группы. 1-я группа — среднетяжелое течение (SCORAD <40, n=14) и 2-я группа — тяжелый вариант течения (SCORAD >40, n=38) [14]. Группа контроля состояла из 62 девочек от 12 до 17 лет (15,42±0,16), проходивших диспансеризацию в ГКДЦ «Ювента», практически здоровых, сопоставимых по возрасту и этнической принадлежности, не имевших отягощенной наследственности по исследуемому заболеванию. В ходе лабораторной части исследования применяли стандартные методы молекулярно-генетического анализа. Из лейкоцитов цельной крови производили выделение ДНК с использованием набора «ДНК-сорб-В» (ООО «ИнтерЛабСервис», Россия). Полиморфные варианты гена IL4 определяли с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Полиморфизм локуса rs79071878 (вставка/делеция 70 п. о. в области 3 интрона VNTR region 3) выявляли с применением пары праймеров: смыслового — 5¢-AGGCTGAAAGGGGGAAAGC-3¢ и антисмыслового — 5¢-CTGTTCACCTCAACTGCTCC-3¢ [15]. Инсерцию определяли по более длинному продукту ПЦР (+70 п. о.).

Аллель-специфическую ПЦР вариантов С/Т -590 локуса rs2243250 гена IL4 проводили со смысловыми праймерами: IL4-590T: 5¢-CACCTAAACTTGGGAGAACATTGTT-3¢ и IL4-590C: 5¢- CACCTAAACTTGGGAGAACATTGTC-3¢. Общий антисмысловой праймер был следующим: 5¢-CATAGAAGGGAGAGGCCACA-3¢. Расчетная длина продукта ПЦР составляла 250 п. о.

Реакцию проводили в амплификаторе «Bio-Rad iQ5» («Bio-Rad Laboratories, Inc.», США) в 25 мкл конечного объема, где содержалось по 15 пмоль каждого праймера, 0,1 ммоль смеси дНТФ (ООО«ИнтерЛабСервис», Россия), 5 мкл 5-кратного буфера для ПЦР с MgCl2 (ООО«ИнтерЛабСервис», Россия), 1 мкл геномной ДНК и 1 МЕ Тaq-полимеразы ("Сибэнзим", Россия), в соответствии со следующей программой: инициальная денатурация 94 °C 7 мин., 40 циклов ПЦР (денатурация — 94 °C, 30 сек., отжиг — 62 °C, 30 сек., полимеризация — 72 °C, 30 сек.; и конечная экстензия — 72 °C, 7 мин. Продукты ПЦР разделяли путем электрофореза в 1,5 % агарозном геле и визуализировали путем окраски бромистым этидием. Визуализацию, съемку и хранение изображений проводили с помощью видеосистемы «Bio-Rad» («Bio-Rad Laboratories, Inc.», США).

В плазме крови определяли концентрации IL-4 (пг/мл) и IgE (МЕ/мл) в объемах 100 мкл и 15 мкл, соответственно, методом твердофазного иммуноферментного анализа с применением моноклональных антител к исследуемым иммунологическим показателям (наборы реактивов «ИФА-Бест», АО «Вектор-Бест», Россия).

Статистическую обработку полученных данных осуществляли посредством программных продуктов «Microsoft Excel» и «Statistica for Windows». Для генотипов определяли соответствие распределения частот равновесию Харди — Вайнберга в программе «Hardy — Weinberg equilibrium calculator». Ассоциацию аллелей выявляли расчетом показателей отношения шансов (OR). При построении многофакторных таблиц ассоциации частот генотипов с наличием заболевания использовали метод Мантеля — Хензеля. Для количественных величин вычисляли средние показатели и их стандартные ошибки (M±m). Значимость независимых факторов устанавливали на основе коэффициента t-статистики и уровня значимости (p value) для коэффициента t. При всех использованных методах статистически значимыми считали различия при значении р<0.05.

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!


Начата подписка на 2019 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2019 Цитокины и Воспаление