Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2018 год
1-4 номера

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2018, №№ 1-4

Подписаться на 2019 год

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 1-4'2018

Иммуноморфологическое исследование нейрососудистых взаимоотношений в стенке аорты человека в зоне формирования нестабильных атеросклеротических поражений

Е.И. Чумасов, П.В. Пигаревский, Д.Э. Коржевский, Е.С. Петрова, О.Г. Яковлева, С.В. Мальцева, В.А. Снегова

Результаты настоящего исследования свидетельствуют о глубоких дистрофических изменениях со стороны различных тканей стенки аорты, включая и нервный аппарат vasa vasorum в зоне формирования нестабильных атеросклеротических бляшек. Причем эти изменения сочетаются с выраженной иммуновоспалительной реакцией, одновременно развивающейся как в интиме, так и в адвентиции сосуда. Проблема роли периферической нервной системы в развитии иммунопатологических процессов, протекающих в сосудистой стенке при атеросклерозе, находится на начальном этапе изучения. Пока ясно, что в стенке артерий в зоне формирования нестабильных, прогрессирующих поражений проявляется нейровегетативная дисфункция и дисрегуляция вегетативных процессов. Механизмы нарушения автономной иннервации при атеросклерозе требуют дальнейших исследований. Возможно, это позволит разработать более совершенные подходы к диагностике, профилактике и лечению нестабильных атеросклеротических поражений стенки артерий. (Цитокины и воспаление. 2018. Т. 17. № 1–4. С. 49–55.)

Ключевые слова: воспаление, атеросклероз, иннервация, адвентиция.

В настоящее время имеются данные, свидетельствующие о том, что морфологической основой острого коронарного синдрома (ОКС) являются нестабильные, легкоранимые атеросклеротические бляшки артерий, склонные к изъязвлению, разрыву и последующему тромбозу [3, 7, 18]. Единый патогенез всех форм заболевания ОКС, возможно, связан с единым морфологическим субстратом — нестабильной атеросклеротической бляшкой. Однако механизмы развития нестабильных атеросклеротических бляшек, причины их разрыва, а также возможное участие в этом процессе нарушения иннервации сосудистого русла адвентиции остаются совершенно неизученными.

Роль периферической нервной системы крайне важна в регуляции кровенаполнения, артериального давления и трофики стенки магистральных сосудов. В соединительной ткани и жировой клетчатке, располагающейся между сосудами, и в адвентиции самих сосудов животных и человека в норме обнаружены интрамуральные ганглии, нервные сплетения из безмиелиновых симпатических и парасимпатических постганглионарных аксонов, а также миелинизированные преганглионарные (эфферентные) и афферентные (чувствительные или рецепторные) нервные волокна [5, 6, 10, 13]. В этой же области локализуется значительное количество хромаффинных параганглиев, которые выполняют нейроэндокринную функцию, выделяя в микроциркуляторное русло околосердечной области норадреналин, адреналин и регуляторные пептиды [6].

По мере удаления от сердца степень иннервации стенки магистральных сосудов уменьшается. Нервные аппараты в них локализуются только в области адвентиции. В нисходящей части аорты они представлены мелкими нервными стволиками и пучками нервных волокон, образующими широкопетлистое сплетение. На границе медии и адвентиции тонкие безмиелиновые аксоны этого сплетения формируют концевую терминальную сеть вокруг vasa vasorum. В медию последние проникают редко и только на одну треть ее толщины, а в интиме нервный аппарат отсутствует. Существует предположение, что нервно-сосудистая сеть адвентиции выполняет трофическую роль для медии и интимы артерий [6, 14, 16, 17]. Поэтому чрезвычайно важной и актуальной представляется проблема выяснения нарушений иннервации и нейроэндокринной регуляции трофики стенки магистральных артерий у человека при таком распространенном и социально значимом заболевании как атеросклероз. Особенно интересно изучение этого процесса при формировании нестабильных атеросклеротических бляшек у человека, которые являются причиной абсолютного большинства острых клинических осложнений ишемической болезни сердца. В настоящее время работы, посвященные этому вопросу, отсутствуют. Решение поставленной задачи позволило бы определить место нарушений автономной иннервации артерий в патогенезе атеросклероза и при его неблагоприятном резко прогрессирующем течении.

Целью настоящего исследования явилось изучение изменений нервных аппаратов вегетативного отдела нервной системы в стенке грудного и абдоминального отделов аорты человека при формировании нестабильных атеросклеротических поражений.

Материалы и методы

Объектом исследования служил аутопсийный материал, полученный от 5 мужчин (средний возраст — 57±5 лет), умерших от острой сердечно-сосудистой недостаточности атеросклеротической этиологии. Непременным условием для отбора материала являлось отсутствие тяжелых, сопутствующих заболеваний, способных оказывать воздействие на иммунологическую реактивность.

Исследовали сегменты аорты (из района дуги, грудного и брюшного отделов). Всего 36 образцов ткани.

Иссеченные кусочки фиксировали в 4 %-ном параформальдегиде на 0,1 М фосфатном буфере (pH 7,2–7,4). Иммуноморфологическое и микроскопическое исследование проводили на парафиновых и криостатных срезах толщиной 3–5 мкм. На первом этапе работы, для верификации типов атеросклеротических поражений и отбора нестабильных, обладающих признаками прогрессирующего роста бляшек, препараты окрашивали красителем Oil Red O.

С целью выявления особенностей эластико-коллагенового каркаса в различных типах атеросклеротических поражений сосудистой стенки проводили селективное окрашивание образцов ткани резорцином, основным фуксином в присутствии хлорида железа, по Вейгерту — Ван Гизону (экспресс метод «Bio Optica»). Специфичность метода позволяла дифференцировать различные тканевые структуры: коллагеновые волокна (различные оттенки красного), эластические волокна (от фиолетового до коричневого), ядра (окрашены почти черным), эритроциты, матрикс (желтые).

Одновременно выявляли степень инфильтрации сосудистой стенки мононуклеарами с помощью окрашивания срезов гематоксилином Майера с докраской водно-спиртовым раствором эозина.

При изучении нервных аппаратов стенки аорты парафиновые срезы окрашивали толуидиновым синим по Нисслю и гематоксилином–эозином. Для изучения аксонов, входящих в состав нервных стволов, применяли мышиные моноклональные антитела к нейрофиламентам 200 (NF) (клон 2F11; разведение производителя; «Dako», Дания). Для иммуногистохимического выявления синаптофизина (Syn) — специфического белка синаптических везикул и синаптофизин-положительных терминалей (СФПТ) — использовали поликлональные кроличьи антитела (разведение производителя; MONOSAN, Нидерланды). Для идентификации катехоламинергических структур симпатической нервной системы применяли поликлональные кроличьи антитела к тирозингидроксилазе (ТН) (1:1000, «Abcam», Великобритания). Для выявления нервных стволов и пучков нервных сплетений и клеток без учета их медиаторной специфики был использован белок PGP 9,5 [4]. В сочетании с реакцией на ТН маркер PGP 9,5 применялся для обнаружения парасимпатических нервных структур. Для выявления белка PGP 9,5 использовали поликлональные кроличьи антитела (1:200, «Spring Bioscience», США). В качестве вторичных реагентов применяли реактивы из наборов «Super Sensitive Polymer-HRP Detection System» («Bio Genex», США) и «EnVision+System Labbeled Polymer-HRP Anti-Mouse (K4001)» («Dako», Дания).

Для определения металлопротеиназы 1-го типа в клеточных и внеклеточных структурах нестабильных и стабильных атеросклеротических поражений было осуществлено иммуногистохимическое исследование высокочувствительным двухступенчатым стрептавидин-биотиновым методом. С этой целью использовали моноклональные антитела к металлопротеиназе-1 (MMP-1, клон 36665, в концентрации 50 мкг/мл, «R&D Systems»), макрофагам (CD68, клон KP1, 50 мкг/мл, «Dako») и гладкомышечным клеткам (ready to use SMA/HRP, клон 1A4, «Dako»). TNFα выявляли с помощью моноклональных антител фирмы «Sigma» (клон 28401, 50 мкг/мл), IL-6 — с помощью моноклональных антител фирмы «R&D systems» (клон 556704, 50 мкг/мл). Продукт реакции выявляли с помощью готового набора реагентов «R&D Systems» («Cell & Tissue Staining Kit», «HRP-DAB System). Докрашивание ядер осуществляли метиловым зеленым (готовый р-р Methyl Green «Dako»).

Полученные препараты исследовали в световом микроскопе «Leica» DM 2500. Микрофотографии получали с использованием цифровой фотокамеры «Leica» DFC 420 и компьютерной программы «Leica Application Suit Version 3.4.0» («Leica», Германия).

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!


Начата подписка на 2019 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2019 Цитокины и Воспаление