Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: www.cytokines.ru


  


2018 год
1-4 номера

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2018, №№ 1-4

Подписаться на 2019 год

Заказать этот номер

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 1-4'2018

Негативно трансформированный фенотип субпопуляции IFNα/βR1+IFNγR+TLR4+ нейтрофильных гранулоцитов при хронических герпес-вирусных инфекциях и его ремоделирование in vitro под влиянием регуляторного гексапептида

И.В. Нестерова, Т.З.Л. Нгуен, Е.О. Халтурина, С.В. Хайдуков, В.В. Малиновская

Изучены особенности трансформирования фенотипа нейтрофильных гранулоцитов (НГ), экспрессирующих рецепторы IFNα/βR1, IFNγR (CD119) и TLR4, у пациентов с различными хроническими герпес-вирусными инфекциями (ХГВИ) в сравнении со здоровыми добровольцами. Описано негативное изменение фенотипа субпопуляции IFNα/βR1+IFNγR+TLR4+НГ периферической крови при ХГВИ. Показано, что в группе пациентов с ХГВИ процент НГ, несущих IFNα/βR1 и IFNγR, выше, чем в контрольной группе условно здоровых лиц. При этом по числу TLR4+НГ пациенты разделились на две группы, достоверно отличающиеся как друг от друга, так и от контроля. В эксперименте in vitro оценено влияние гексапептида (ГП) RDKVYR (синтетического аналога активного центра тимопоэтина) на трансформированный фенотип НГ in vitro. У пациентов с ХГВИ под влиянием ГП количество НГ, экспрессирующих на поверхностной мембране рецепторы к IFNα/βR1, IFNγR, уменьшилось, снизилось число TLR4+НГ в группе с их высоким уровнем и не изменилось число TLR4+НГ в группе с низким уровнем. Кроме того, ГП достоверно повлиял на плотность экспрессии молекул на мембране НГ при ХГВИ: увеличил экспрессию IFNα/βR1, умеренно уменьшил плотность экспрессии IFNγR, и не изменил плотность экспрессии рецептора TLR4 в обеих группах. Продемонстрирован иммуномодулирующий эффект ГП на трансформированный при ХГВИ фенотип субпопуляции IFNα/βR1+IFNγR+TLR4+НГ. (Цитокины и воспаление. 2018. Т. 17. № 1–4. С. 56–61.).

Ключевые слова: нейтрофильный гранулоцит, фенотип, рецепторы, субпопуляции, интерферон, гексапептид.

По данным ВОЗ, более 95 % взрослого населения Земного шара заражено моно- или смешанными герпес-вирусными инфекциями. Несмотря на то, что, однажды попав в организм человека, вирусы полностью не элиминируются, а остаются в нем навсегда, большинство инфицированных людей редко болеет хроническими герпес-вирусными инфекциями (ХГВИ). Так, эпизоды обострений возникают не часто, и, как правило, в критических для организма ситуациях (стресс, как физический, так и психоэмоциональный, переохлаждение, употребление глюкокортикостероидов и нестероидных противовоспалительных препаратов, воздействие ультрафиолетового облучения, частая смена климатических зон и часовых поясов и т. д.). У этих лиц, как правило, противовирусные механизмы иммунной системы функционируют нормально. Нарушения функционирования противовирусных защитных механизмов иммунной системы — особая проблема для здоровья человека, инфицированного герпес-вирусами. Ранее многочисленными исследованиями показано, что наиболее часто при хронических моно- или микст-герпес-вирусных инфекциях имеют место снижение уровней сывороточных интерферонов, нарушения индуцированной продукции IFNα и IFNγ, дефицит количества и нарушения функциональной активности естественных киллерных клеток, цитотоксических и естественных киллерных Т-лимфоцитов, дефицит секреторного IgA и нейтрализующих IgG-антител [1, 8, 9]. В настоящее время убедительно доказана роль нейтрофильных гранулоцитов (НГ) в противовирусной защите, особенно при ранних контактах НГ и вирусов: фагоцитоз, формирование NET, экзосом, реализация антителозависимой цитотоксичности, позитивная и негативная регуляция активности Т- и В-лимфоцитов и т. д. [3, 4]. НГ оснащены большим количеством поверхностных мембранных рецепторов, каждый из которых обладает различными индивидуальными свойствами и, в зависимости от интенсивности экспрессии, формирует разные фенотипы различных субпопуляций. Функциональная активность НГ также зависит от уровня экспрессии различных рецепторов [2]. Toll-подобные рецепторы (TLRs), в частноcти, TLR4, экспрессирующиеся на поверхностной мембране НГ, распознают патоген-ассоциированные молекулярные паттерны РНК и ДНК вирусов. Рецепторы к интерферонам (IFN) I (IFNα/βR1,IFNα/βR2)и II типа (IFNγR), локализующиеся на поверхностной мембране НГ, связывают IFNα и IFNβ, секретируемые эпителиальными клетками после контакта с респираторными и герпес-вирусами, и запускают сигналинг, приводящий к экспрессии в ядре НГ генов, ответственных за синтез IFNα и IFNβ. IFNα активирует Т-хелперы и естественные киллерные клетки и индуцирует в них продукцию IFNγ через IFNR2 [5–7]. Система интерферонов — «краеугольный камень» противовирусной защиты. От полноценности функционирования НГ и системы интерферонов, их взаимодействия, особенно на первых этапах контакта с вирусами, и от агрессивных свойств самих вирусов зависит исход многих вирусных инфекций. При хронических, упорно рецидивирующих и персистирующих герпес-вирусных инфекциях, вызываемых вирусом Эпштнейна — Барр (ВЭБ), цитомегаловирусом (ЦМВ), вирусом герпеса 6 типа (ВЧГ6), вирусом простого герпеса первого типа (ВПГ1), вирусом простого герпеса второго типа (ВПГ2) описаны различные нарушения системы IFN и иммунной системы. Для этих хронических инфекционно-воспалительных заболеваний характерны дефицит индуцированной продукции IFNα и IFNγ, дефекты функционирования НГ: приобретенные нейтропении, нарушения экспрессии некоторых мембранных рецепторов, фагоцитарные дисфункции, различные дефекты микробицидной системы — гранулоцитопатии, появление неполноценных субпопуляций НГ с низкой противовирусной, антибактериальной активностью, а также субпопуляций НГ-супрессоров [1].

Известно, что гексапептид (ГП) — аргинил-альфа-аспартил-лизил-валил-тирозил-аргинин — синтетический аналог активного центра гормона тимуса (тимопоэтина) обладает иммунорегуляторным, детоксицирующим, антиоксидантнм действием: вызывает инактивацию свободнорадикальных и перекисных соединений. Этот пептид корригирует состояние иммунной системы при ее дисфункциях, восстанавливает баланс окислительно-антиокислительных реакций организма при инфекционно-воспалительных заболеваниях. В то же время данных об изучении влияния ГП на рецепторный аппарат НГ при ХГВИ в доступной нам литературе не найдено. В связи с изложенным выше определенный интерес представляет изучение влияния ГП на трансформированный при ХГВИ фенотип НГ.

Целью исследования явилось изучение особенностей экспрессии поверхностных мембранных рецепторов НГ к IFNα и IFNβ (IFNα/βR1), IFNγ (CD119) и TLR4 (CD284) при различных ХГВИ и возможности модуляции негативно измененных фенотипов субпопуляции IFNα/βR1+IFNγR+TLR4+НГ периферической крови этих пациентов под влиянием ГП в системе in vitro.

Материалы и методы

Экспериментальное исследование проводили на 99 образцах периферической крови, полученных от 21 пациента обоего пола в возрасте от 23 до 60 лет, страдавших хроническими моно- (в 45 % случаев) и микст- (в 55 % случаев) ХГВИ, и от 15 условно здоровых субъектов, составивших контрольную группу, сопоставимых по полу и возрасту. Среди моно-инфекций ВПГ2 составляли 33,3 % случаев, ВПГ1 — 22,2, ЦМВ — 22,2, ВЭБ — 22,2 % случаев. Среди микст-инфекций лидировали сочетания ВЭБ+ЦМВ+ВЧГ6 — в 36,4 %, ВПГ1+ВЭБ — в 27,3 %; ВЭБ+ЦМВ — в 18,2 % случаев. А сочетания ВПГ1/2+ВЭБ+ЦМВ и ВЭБ+ВЧГ6 встречались в 9,1 % случаев. Для детекции герпес-вирусных инфекций применяли методы серо- и ПЦР-диагностики. Геном вирусов выявляли в биоматериалах: кровь, слюна, моча, соскоб с миндалин и задней стенки глотки.

Проводили определение фенотипа субпопуляции IFNα/βR1+IFNγR+TLR4+НГ методом проточной цитометрии с использованием проточного цитофлуориметра FC 500 («Beckman Coulter», США) и конъюгатов моноклональных антител IFNα/βR1-FITC, CD119-PE, TLR4-APC («Beckman Coulter International S.A.», Франция). Оценивали количество НГ (%) периферической крови, экспрессирующих IFNα/βR1, IFNγR и TLR4 с одновременной детекцией плотности экспрессии каждого рецептора на мембране НГ по уровню MFI как в группе здоровых субъектов (группа контроля), так и в группе исследуемых. Далее образцы цельной крови пациентов с ХГВИ инкубировали с ГП в конечной концентрации 10-6 мг/мл, в течение 1 часа, при температуре 37 °С и оценивали особенности трансформации фенотипа субпопуляции IFNα/βR1+IFNγR+TLR4+НГ под влиянием ГП в системе in vitro. Результаты эксперимента сравнивали с данными, полученными в группе условно здоровых лиц, и данными, полученными при исследовании фенотипа НГ субпопуляции IFNα/βR1+IFNγR+TLR4+НГ пациентов с ХГВИ.

Все исследования были выполнены с соблюдением требований Хельсинкской декларации: было получено информированное согласие всех добровольцев и пациентов, участвующих в проведении исследования, в соответствии с рекомендациями (Декларация по этическим принципам медицинских исследований, в которых участвуют люди, принятая 52-ой Генеральной Ассамблеей Всемирной Медицинской Ассоциации, Эдинбург, Шотландия, октябрь, 2000 г.).

Полученные результаты исследования были обработаны при помощи методов вариационной статистики и представлены в виде медианы, нижнего и верхнего квартиля (Ме[Q1;Q3]), 95 % доверительного интервала (95% ДИ) (референсные значения контроля). При анализе количественных признаков оценку достоверности различий между группами проводили с использованием непараметрического критерия Манна — Уитни. Различия, связи и зависимости считали статистически значимыми при р<0,05. Ввод данных производили в таблицах Microsoft Excel 2007. Статистическую обработку результатов проводили с использованием пакета прикладных программ «IBM SPSS Statistic 20».

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала
!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!


Начата подписка на 2019 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2019 Цитокины и Воспаление